CC BY
34
УДК 618.11-006.6-085.277.3
© Г.В. Хамитова, В.А. Лиходед, Ш.М. Хуснутдинов, 2010
Г.В. Хамитова1, В.А. Лиходед2, Ш.М. Хуснутдинов2 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ЛОКАЛЬНОЙ ХИМИОТЕРАПИИ РАКА ЯИЧНИКОВ С ПРИМЕНЕНИЕМ ЛИПИДСОДЕРЖАЩЕЙ ФОРМЫ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА
гГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет Росздрава» 2ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Росздрава», г. Уфа
В результате исследования установлено, что введение липидсодержащей лекарственной формы в различные ткани экспериментальных животных формировало депо препарата. Липидсодержащий препарат действовал как коллоидный инородный раздражитель, что формировало гранулематозную воспалительно-репаративную реакцию с образованием богатой капиллярами и клетками созревающей соединительной ткани и зрелых гистиоцитарно-макрофагальных липогранулем, заполняющих образовавшиеся тканевые дефекты. Инволюция макрофагальной гранулемы, образующейся вокруг депо липидсодержащего препарата, была очень медленной из-за постоянного присутствия антигенного раздражителя, каким является жиросодержащая форма препарата, и низкой обновляемости клеток гранулем.
Ключевые слова: рак яичников, локальная химиотерапия, липидосодержащий препарат, макрофагальная гранулема.
G.V. Khamitova, V.A. Lihoded, Sh.M. Khusnutdinov
EXPERIMENTAL GROUNDING OF LOCAL CHEMOTHERAPY IN PATIENTS WITH OVARIAN CANCER WITH USE OF A LIPID CONTAINING DRUG
In the result of investigation it was found out that administration of the lipid containing drug form in different tissues of experimental animals resulted in formation of depo drug. The lipid containing drug had effect of a colloid heterogeneous exciter that caused the development of granulomatous inflammatory reparative reaction with formation of a connective tissue rich in capillary tubes and cells and mature histiocytic macrophageal lipogranulomas, which stuff existing defects of tissues. The involution of ma-crophageal granulomas forming around depo of the lipid containing drug was very slow due to constant presence of antigene exciter - lipid containing form of a drug- and low renewal of granulomas.
Key words: ovarian cancer, local chemotherapy, lipid containing drug, macrophageal granulomas.
Одной из наиболее сложных проблем современной онкологии является лечение рака яичников. В связи с особенностями клинического течения более 70% опухолей выявляются на поздних стадиях. Лечение рака яичников ГГ-ГУ стадий начинается с операции ци-торедуктивного характера. Опухоль удается удалить полностью только у небольшого числа больных, если она ограничивается пределами малого таза и большого сальника. При поражении диафрагмы, области ворот печени, малого сальника, метастазах в печень выполнение оптимальной циторедуктивной операции невозможно. В таких случаях эффективность послеоперационной системной химиотерапии снижается, так как остаточные опухоли более 2 см в диаметре плохо кровоснаб-жаются, что не позволяет обеспечить в них терапевтическую концентрацию химиопрепаратов [1,2,7,8]. Также неэффективным у пациентов с неблагоприятным прогнозом является внутрибрюшинное введение противоопухолевых средств [3,4,5,6]. Дополнение системной химиотерапии локальными методами длительного направленного воздействия депонированных химиопрепаратов с использованием новых лекарственных форм является перспективным направлением в комплексном лечении больных раком яичников.
В задачу настоящего исследования входило в эксперименте показать возможность применения новой лекарственной формы с химиопрепаратами при лечении больных раком яичников на основании изучения особенностей морфологических изменений в тканях крыс после введения липидсодержащей формы лекарственного препарата.
Материал и методы
Опыты были проведены на 150 крысах, которым под эфирным наркозом вводили липидсодержащую форму лекарственного препарата под кожу, забрюшинно, в печень, почки, селезенку. Эвтаназию крыс проводили в сроки на 7, 14, 21 и 28-е сутки после введения лекарственной формы препарата. Материал фиксировали в 10% нейтральном формалине, затем заливали в парафин. Парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином, ставили ШИК-реакцию. Часть препаратов окрашивали суданом черным на жир. Проводилась количественная и полуколичественная оценка полученных изменений, была разработана шкала оценки изменений, по которой определялись динамика повреждений и компенсаторные проявления. Оценивались: наличие полости, интенсивности гранулемы, площадь зоны некрозов, ней-трофильная инфильтрация, жиросодержащие структуры, выраженность выстилки в полос-
ти, фиброз, гиперемия сосудов. Морфометрически с помощью окуляр-микрометра и окулярной точечной сетки Автандилова определялась динамика повреждений и компенсаторных проявлений. Была разработана шкала оценки выявленных изменений. Интенсивность гранулемообразования оценивалась по-луколичественным методом по балльной шкале. Отсутствие гранулем расценивалось как негативный результат. Также использовался количественный подсчет ширины гранулем окружающей полости подсчетом пяти случайно выбранных полей зрения (в мкм) при помощи окуляр-микрометра. Доля жиросодержащих полостей в гранулеме оценивалась в объемных долях при помощи точечной сетки Автандилова в пяти сплошных полях зрения микроскопа в случайной выборке. Плотность нейтрофильной инфильтрации определялась с помощью окулярной сетки с пересчетом на 1 мм2 и вычислением среднего показателя.
Интенсивность фиброза определялась посредством доли окрашенных по Ван-Гизону в красный цвет коллагеновых волокон. В ряде случаев в полости определялась тонкая полоска некротической и уплотненной фибрози-рованной ткани, ширина которой измерялась окуляр-микрометром (в мкм). Гиперемия сосудов, выявляемая по краю гранулем в различные сроки, выявлялась, когда имелись полнокровные сосуды, диаметр которых превышал 70 мкм. Объемная доля гиперемиро-ванных сосудов определялась в срезах относительно всей площади поражения патологическим процессом. Обработка полученных данных проводилась стандартным методом вариационной статистики и непараметрическим методом Вилкоксона - Манна - Уитни.
Полученные результаты
В месте инъекции в ткани липидосодержащей лекарственной формы наблюдалось образование округлой полости, являющейся депо препарата. По мере увеличения срока эксперимента размеры полости содержащей препарат, постепенно уменьшались, а стенка ее уплотнялась. Ширина депо препарата колебалась от 0,6 до 1,2см на 7-е сутки эксперимента и уменьшалась к концу его срока - на 28-е сутки до 0,3-0,7см. На 28-е сутки после введения препарата в почках у 45% животных наблюдалось полная облитерация полости с образованием нежного рубца. Более медленный процесс резорбции липидсодержащего препарата наблюдался в подкожной жировой клетчатке и при внутрибрюшинном введении препарата - в забрюшинной жировой ткани.
Наиболее быстро уменьшались полости в почках, где уже через неделю после введения лекарственной формы средний их диаметр составил 0,4- 0,6 см.
Сформированная при введении препарата полость была окружена валом в виде скоплений крупных клеток гистиоцитарно-макрофагального ряда и грануляционной ткани, образующих зрелые макрофагальные гранулемы, постепенно заполняющие образовавшиеся тканевые дефекты. В небольших количествах встречались лимфоциты, плазматические клетки, полинуклеарные лейкоциты (рис. 1).
Рис. 1. Липогранулема: грануляционная ткань и скопления макрофагов вокруг тканевого дефекта, образованного введением липидосодержащей формы лекарственного препарата. Образование зрелых сосудов. Кровоизлияния, гиперемия.
7 суток эксперимента, х20.
В гранулемах, окружающих депо препарата, преобладали макрофаги, фагоцитирующие липиды, называемые ксантомными клетками (рис. 2). Эти клетки образовывали тесно прилегающие друг к другу, плотные обширные скопления. Клетки имели крупные размеры - 30-40 мкм, округлую или чуть вытянутую форму, пенистую или зернистую из-за наличия мелких жировых капель почти не окрашиваемую красителями амфофильную или слегка эозинофильную цитоплазму. Ядра этих клеток были округлыми, имели небольшие размеры, светлую нуклеоплазму и нежный хроматин.
Рис. 2. 7-е сутки эксперимента. Подкожная жировая клетчатка. Липогранулема, состоящая из ксантомных клеток, в зоне введения жиросодержащей формы препарата.
Слева грануляционная ткань. Х40
Ксантомные клетки располагались среди прослоек отечной рыхлой соединительной ткани с развитой сетью мелких сосудов, большим количеством сосудистых почек, капилляров, формирующих грануляционную ткань. Образованные капиллярами вертикальные петли и горизонтально расположенные между ними веретенообразные фибробласты придавали специфическую архитектонику ткани, что во много определяло ее механическую функцию. По мере рассасывания жиросодержащей формы препарата наблюдалось образование хорошо васкуляризованной грануляционной ткани, бедной фибробластами и волокнами, постепенно заполняющими сформированный дефект.
Описанный процесс представляет собой зрелую макрофагальную липогранулему или липо- и ксантогранулему. Следует отметить, что процесс гранулематоза носил довольно стабильный характер, так как инволюция гранулем в исследуемые сроки была незначительной, что указывает на постоянное присутствие антигенного раздражителя и низкую обновляемость клеток.
В 21 и 28-е сутки эксперимента наблюдалось преобладание ориентации составной части гранулем: ксантомных клеток, гистиоцитов, макрофагов, фибробластов - вокруг крупных сосудов, что придавало им кольцевидную форму (рис. 3).
- -А
-■тЩмж ■сУдг г V •
г м
Дйь
1 I
Рис. 4. 21-е сутки эксперимента, подкожная жировая клетчатка.
Полость, образованная липидсодержащей формой препарата окруженная гранулемой из ксантомных клеток с пузыреобразными жиросодержащими структурами. Х20
В сроки наблюдения 14 суток и более вокруг образованной полости депо препарата и гранулем появлялись зоны фиброза с дила-тированными, гиперемированными сосудами (рис. 5). Коллагенообразование прекращало пролиферацию клеток, фиброзно-рубцовую трансформацию грануляционной ткани, начинающуюся с ее глубоких слоев. Наблюдалась регрессия большинства капилляров и перека-либровка сосудистой сети с образованием крупных неправильно сформированных сосудов.
ж*
-1
шшШ
и
ТС’мл
т®т
Л -Л
г-
Рис. 3. Селезенка. 21-е сутки эксперимента. Кольцевидная ориентация ксантомных клеток в зоне липогранулемы. х40
В подкожной жировой клетчатке и во внутренних органах в большей части наблюдений в месте введения липидсодержащей формы препарата вокруг сформированой полости во всех наблюдениях определялись множественные дочерние крупные оптически пустые жиросодержащие пузыреобразные структуры диаметром 20 - 150мкм, местами сливающиеся друг с другом (рис. 4).
ГН®*Жл - . 'КЕ* Ж
Рис. 5. Подкожная жировая клетчатка. Грануляционная ткань, замещающая тканевой дефект при элиминации жиросодержащей формы лекарственного препарата в месте его введения. Формирование крупных неправильно сформированных сосудов
и их гиперемия. 14-е сутки эксперимента. Х20
По мере увеличения срока эксперимента наблюдалось некоторое усиление фиброза, документированное окраской по Ван-Гизону.
Заключение
Таким образом, введение липидосодержащей лекарственной формы в различные ткани формировало депо препарата, образующего полость, сдавливающую ткани и вызывающую их повреждение с формированием липогранулем. Липидсодержащий препарат действовал как коллоидный инородный раздражитель, что формировало гранулематозную воспалительно-репаративную реакцию с
образованием богатой капиллярами и клетка- генной стимуляцией аллогенным липидосо-
ми созревающей соединительной ткани и зре- держащим препаратом. Инволюция макрофа-
лых гистиоцитарно-макрофагальных липо- гальной гранулемы, образующейся вокруг
гранулем, заполняющих образовавшиеся тка- депо липидосодержащего препарата, была
невые дефекты. очень медленной из-за постоянного присутст-
После введения жиросодержащей фор- вия антигенного раздражителя, каким являет-
мы препарата в сроки от 7 до 28 суток наблю- ся жиросодержащая форма препарата, и низ-
далось относительно стабильное состояние кой обновляемости клеток гранулем.
гранулемы, что объясняется постоянной антиСведения об авторах статьи:
Хамитова Гульшат Валиевна - к.м.н., доцент кафедры акушерства и гинекологии Казанского государственного медицинского университета (410012, г. Казань, ул. Бутлерова, 49)
Лиходед Валерий Алексеевич - д.м.н., проф., зав. каф. Фармацевтической технологии с курсом биотехнологии Башкирского государственного медицинского университета (г. Уфа, ул. Летчиков, 1, р.тел. 278-12-09)
Хуснутдинов Шамиль Масгутович - к.м.н., доцент кафедры онкологии с курсом ИПО Башкирского государственного медицинского университета (450054, г. Уфа, пр. Октября, 73/1).
ЛИТЕРАТУРА
1. Cytoreductive surgery in ovarian cancer/ Pomel C., Jeyarajah A., Oram D. [et al.] //Cancer Imaging. 2007 Dec 17;7:210-5.
2. Heated intraoperative intraperitoneal mitomycin C and early postoperative intraperitoneal 5-fluorouracil: pharmacokinetic studies/ Jacquet P., Averbach A., Stephens A.D. [et al.] //Oncology. 1998 Mar-Apr;55(2):130-8
3. Intraperitoneal chemotherapy for ovarian cancer: overview and perspective /Rao G, Crispens M, Rothenberg ML. [et al.] // J Clin Oncol. 2007 Jul 10;25(20):2867-72
4. Intraperitoneal Chemotherapy in Patients with Advanced Ovarian Cancer: The Con View / Vergote I., Amant F., Leunen K. [et al.] // The Oncologist. - 2008. -Vol. 13, No. 4, 410-414;
5. Intraperitoneal chemotherapy with taxanes for ovarian cancer with peritoneal dissemination /de Bree E,, Rosing H,, Michalakis J. [et al.] //Eur J Surg Oncol. 2006 Aug;32(6):666-70
6. Phase II study of intraperitoneal recombinant interleukin-12 (rhIL-12) in patients with peritoneal carcinomatosis (residual disease < 1 cm) associated with ovarian cancer or primary peritoneal carcinoma /Lenzi R., Edwards R., June C.//J Transl Med. 2007 Dec 12;5:66.
7. The addition of extensive upper abdominal surgery to achieve optimal cytoreduction improves survival in patients with stages IIIC-IV epithelial ovarian cancer /Eisenhauer E.L., Abu-Rustum N.R., Sonoda Y. [et al.] //Gynecol Oncol. 2006 Dec;103(3):1083-90.
8. The effect of maximal surgical cytoreduction on sensitivity to platinum-taxane chemotherapy and subsequent survival in patients with advanced ovarian cancer /Eisenhauer E.L., Abu-Rustum N.R., Sonoda Y. [et al.] //Gynecol Oncol. 2008 Feb;108(2):276-81.
УДК 577.12:543.635.353:612.122.2:616-006.81-092.9 © Ф.Д. Зайнуллин, Ш.Х. Ганцев, Л.Н. Кудряшова, 2010
Ф.Д. Зайнуллин, Ш.Х. Ганцев, Л.Н. Кудряшова ВЛИЯНИЕ ПОЛИНЕНАСЫЩЕННЫХ ЖИРНЫХ КИСЛОТ З-ОМЕГА ТИПА НА БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ СЫВОРОТКИ КРОВИ, ПЕЧЕНИ И МЫШЦ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ С ПЕРЕВИВНЫМИ ОПУХОЛЯМИ
ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Росздрава», г. Уфа
В работе представлены результаты влияния полиненасыщенных жирных кислот омега-3 типа на содержание белка, липидов и гликогена в сыворотке крови, печени, мышцах, а также на вес и продолжительность жизни лабораторных белых мышей с моделированной меланомой В16.
Ключевые слова: полиненасыщенные жирные кислоты омега-3, меланома, белок, гликоген, липиды.
