CC BY
2974
MEDICAL SCIENCES / «Ш11ШетиМ~^©иГМа1>#Щ&2)),2©2©
MEDICAL SCIENCES
УДК 616.31-002.44-036.87-036.1-047.42
Ковач 1.В.
д.мед. н., Дичко €.Н. д.мед. н., Кравченко Л.1. к.мед.н.
Бунятян Х.А. к.мед.н. Хотимська Ю.В.
к.мед. н
Державний заклад «Днтропетровська медична академiя МОЗ Укра'ни»
DOI: 10.24411/2520-6990-2020-11638 ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНЕ МОДЕЛЮВАННЯ ХРОН1ЧНОГО РЕЦИДИВНОГО АФТОЗНОГО
СТОМАТИТУ
Kovach I. V.
doctor of medicine Dychko E.N. doctor of medicine Kravchenko L.I. candidate of medical Sciences Bunjatjan H.A. candidate of medical Sciences Hotymskaja Ju.V. candidate of medical Sciences State institution "Dnepropetrovsk medical Academy of the Ministry of health of Ukraine»
EXPERIMENTAL MODEL OF CHRONIC RECURRENT APHTHOUS STOMATITIS
Анотацш
Одтею i3 самих актуальних проблем сучасно' медицини стае алергшт захворювання. Патологiчний стан у виглядi ревматизму, бронхiальноi астми, полтозу та iнших суттево впливають на здоров 'я лю-дини, його яюсть життя, а в деяких випадках можуть завершитись летально. Разом з тим прояви алер-гтного стану можуть виникати в р1зних системах та органах, в тому чи(mi в органах ротово' порож-нини. Найбыьш вiдомi реакци сповшьненого типу у виглядi багатофомно' ексудативно' ертеми (БЕЕ) та хронiчного рецидивного афтозного стоматиту (ХРАС) з 'х численими синдромами. Що до чинниюв ви-никнення захворювання то вони добре вiдомi i е алергенами бшково' природи, що знаходяться в харчових продуктах, побутових засобах, антибютиках тощо, або гаптенами типу спиртiв, фарб, косметичних засобiв, нафтопродуктiв та iнших. Безлiч цих факторiв затруднюють вiдновлення конкретного чинника, що спричиняе захворювання в конкретному випадку. А все це ускладнюе результативний лкувально-профтактичний процес, особливо дiагностику етiологiчного чинника. Комплексне л^вання алергшних захворювань, як правило, достатньо ефективне, але вивчення природи патологiчного процесу в сучасних умовах мешкання людей та розробка ефективних засобiв л^вання е актуальною проблемою як в приклад-нш, так i теоретинш медицинi.
Тому метою до^дження стало вивчення ефективностi застосування озонотерапп в комплексному лжувант ХРАС, як важливого засобу усунення поламок в основнт ланцi ланцюга патогенезу захворювання СОПР, в ексnериментi на тваринах.
Для реал1заци науково' мети та завдань проведене моделювання афтозного стоматиту на експери-ментальних тваринах (48 крол^самщ у вщ 3-х мiсяцiв).
Моделювання ХРАС виконували шляхом внутрШньочеревного iн'екцiйного введення овальбумiну (яеч-ного бтка) i гiдроксидуалiюмiнiю на nротязi трьох дiб з додатковою iнстиляцiею СОПР розчином трип-сту. При цьому кожт 8 дiб до 24 -го дня експерименту додатково повторювали ттраназальне введення овальбумину та трипсту. Тварин трьох груп по 12 особин левами ЛПК у виглядi гелю «Холюал» (перша група), озонотерапИ (друга група) та «Холiсала» з озонотератею разом (третя група). Шсля моделювання ХРАС та л^вання виразкових утворень на СОПР тварин виводили з експерименту вiдnовiдно до мiжнародних бiоетичних стандартiв. Фрагменти слизово' оболонки рота тсля пофарбування оцтювали ni мжроскопом «Olimpus BX- 41» та обробляли результати за программою «Olimpus DP - soft version 3.2» з оцткою iнтенсивностi iмуногiстохiмiчних реакцш.
В результатi обробки мжроскопп слизово '1' оболонки рота експериментальних тварин було встанов-лено, що в основних компонентах покривноi тканини, якими е клтини, судини та строма, виникають
/ medical sciences_75
значн1 патологгт змти. Вони характеризуються суттевим некрозом, дистрофгею, ггпоксиею та запаль-ними явищами.
Разом з тим, проведена комплексна лгкувальна корекц1я з використанням гелю «Хол1сал», озоноте-рапИ та ix комплекса привели до заживлення виразкових висипок в СОПР експериментальних тканин в р1зн1 термти спостереження. Одночасно м1кроскоп1я фрагментгв слизовог оболонки тварин при первин-ному та заключному досл1джент, особливо клтинного складу, мкроциркуляторного русла та елементгв строми показала, що найбшьш результативним в клт1чному та патоморфологгчному аспектi виявились особини третьог до^дно'г' групи. Таким чином, експериментально доведено, що комплексне використання знеболюючого та кератопластичного гелю мкцево при виконант процедур озонотерапп володiе найбшьш високим miтчним та морфологiчним ефектом та може бути використано при л^ванш ХРАСу людей.
Abstract
One of the most urgent problems of modern medicine is allergic diseases. A pathological condition in the form of rheumatism, bronchial asthma, pollinosis and others significantly affect a person's health and quality of life, and in some cases can end fatally. However, manifestations of an allergic condition can occur in different systems and organs, including the oral cavity. The most well-known reactions are delayed type in the form of multiform exudative erythema (MEE) and chronic recurrent aphthous stomatitis (HRAS) with their numerous syndromes.
As for the factors that cause diseases, they are well known and are allergens of protein origin, which are found in food products, household products, antibiotics, etc., or haptens such as alcohol, paints, cosmetics, and others. Many of these factors make it difficult to determine the true cause of the disease in a particular patient. And all this complicates the effectiveness of the treatment and prevention process, especially the diagnosis of the etiological factor. Complex treatment of allergic diseases is usually quite effective, but the study of the nature of the pathological process in modern living conditions and the development of effective methods of treatment is an urgent problem in both applied and theoretical medicine.
Therefore, the aim of the study was to study the effectiveness of ozone therapy in the complex treatment of HRAS, as an important way to eliminate breakdowns in the main link of the pathogenesis of the disease ofMMOC, in an animal experiment.
To achieve the scientific goal and objectives, modeling of aphthous stomatitis was performed on experimental animals (45 male rabbits at the age of 3 months). Modeling of CRAS was performed by intraperitoneal injection of ovalbumin (egg protein) of hydroxylamine for three days with additional instillaciei MMOC with a solution of trypsin. At the same time, every 8 days until the 24th day of the experiment, the intranasal administration of ovalbumin and trypsin was additionally repeated. Animals of three groups of 12 were treated with PLC in the form of gel "Holysal" (the first group), ozone therapy (the second group) and "Holysal" with ozone therapy together (the third group). After simulating HRAS and treating ulcerative rashes on MMOC, the animals were removed from the experiment in accordance with international bioethical standards. Fragments of the oral mucosa after staining were evaluated under the microscope " Olimpus BX-41 "and the results were processed by the program " Olimpus DP - soft version 3.2 " with an assessment of the intensity of immunohistochemical reactions.
As a result ofprocessing microscopy of the oral mucosa of experimental animals, it was found that significant pathological changes occur in the main components of the integumentary tissues, such as cells, vessels and stroma. They are characterized by significant necrosis, dystrophy, hypoxia and inflammatory phenomena.
However, the complex therapeutic correction using Holisal gel, ozone therapy and their complex resulted in healing of ulcerative rashes in MMOC of experimental tissues at different observation periods. At the same time, microscopy offragments of the animal mucosa during the initial and final study, especially of the cellular composition, microcirculatory bed and stroma elements, showed that the most effective in the clinical and pathomorpho-logical aspects were animals of the third research group. Thus, it has been experimentally proved that the combined use of analgesic and keratoplastic gel topically when performing ozone therapy procedures has the highest clinical and morphological effect and can be used in the treatment of HRA in humans.
Ключовi слова: експеримент, моделювання, алергiйнi враження СОПР, лкування, озонотерапiя.
Keywords: experiment, modeling, MMOC allergic lesions, treatment, ozone therapy.
Вступ. Хротчш алерпчн захворювання у дггей - чи не одна з актуальншших медичних проблем сучасносп. Десятки тисяч алергешв рiзного походження - харчов^ побутов^ бактерiальнi, ме-дикаментозт та iншi - поспйно наповнюють нав-колишне середовище людини, а в значному процента випадшв провокують агресш на дитячий ор-гашзм [1,2,4]. Найбшьш вiдомi хрошчт рецидивт алергшш процеси з тяжким перебиюм та мало втш-ною перспективою е бронх1альна астма, ревматизм, полшоз та шш. В стоматолопчнш практищ алергшш реакцп заповшьненого типу виникають у ви-глядi рецидивуючих багатоформно! ексудативно! ерггеми та хрошчного рецидивного афтозного стоматиту з численними !х синдромами [5,6]. Яшсть
життя хворих на цю патологш ввдверто зни-жуеться, особливо у тих оаб, у яких рецидиви БСС та ХРАС безперервш, навпъ без коротких свилих пром1жк1в. Наряду з визначеною етюлопею та патогенезом алергшних захворювань в теоретичному плаш залишаеться до тепершнього часу складним встановлення дшсного алергена для конкретно! хворо! особи, що нерщко потребуе настирливого пошуку та довготривалого спостереження за хворою людиною[3,7,8]. Лише комплексний лжу-вально-профшактичний шдхвд з усуненням вiрогiд-ного етюлопчного чинника та основних ланок ланцюга патогенезу алергшного процесу може за-безпечити стшкий лшувальний ефект i навиъ виду-
76
MEDICAL SCIENCES / «Ш11ШетУМ~^©УГМа1>#Щ&2)),2(Ш1
жання хворого. Тому ця медична проблема зали-шаеться досить актуальною в тепершнш час iще i тому, що алергшш хвороби мають стiйку тенден-цш до зростання серед населения, в тому числ ди-тячого.
Мета дослвдження. Вивчення ефективностi застосування озонотерапи в комплексному лшу-ваннi ХРАС, як важливого засобу усунення пола-мок в основнiй ланцi ланцюга патогенезу захворювання СОПР, в експерименп на тваринах.
Материали та методи дослвджень. Для ре-алiзацiï поставлено1 мети проведене моделювання афтозного стоматиту на експериментальних твари-нах. В якосл об'ектiв дослiдження проведене спо-стереження над 48 кролями-самцями у вiцi 3-х мiсяцiв, яким на тлi сенсибiлiзацiï викликали ви-никнення виразкових уражень СОПР, близьких до елеменпв ураження при ХРАС. Дослццп групи (по
12 ойб) отримували лiкувально-профiлактичний комплекс у виглядi лише гелю «Холюал», чи лише озонотерапи, а також «Холюала» та озонотерапи разом.
Групу порiвняння (12 особи) як контроль ну не тддавали шяким манiпуляцiям.
Моделювання ХРАС виконували з викори-станням альбумiну яечного бшка за ведомою схемою (внутршньочеревна iн'екцiя овальбумiну i гiдроксидуалюмiнiю на протязi трьох дiб з додатко-вою iнстиляцiею СОПР розчином трипану).
Кожнi 8 дiб додатково повторювали штра-назальне введення овальбумiну та трипану до 24-го для дозою вщповвдно май тша експерименталь-ноï тварини. Тварин виводили з експерименту ввдповщно до м1жнародних бюетичних стандартiв (рис 1, 2 ,3).
Рис.1. Моделювання ХРАС.
m
Рис. 2. Моделювання ХРАС (сенсибШзащя овальбумтом).
/ MEDICAL SCIENCES 77
Рис.3. Застосування озонотерапИ вумовах експерименту на тваринах.
Рутинну проводку фрагменпв м'яких тканин СОПР завершували фарбуванням гематоток-силiном i еозином, ткрофуксином за Ван Гiзоном. Оцiнку мжропрепаратам надавали пiд мiкроскопом «Olimpus BX - 41» i обробкою результапв програ-мою «Olimpus DP - soft version 3. 2» з оцшкою ш-тенсивностi iмуногiстохiмiчних реакцш.
Результати та Тх обоговорення. Морфо-функцiональний стан тканин СОПР вах чотирьох груп кролiв, яким проведено експериментальне до-слвдження в залежносп вiд способу лiкування ви-разкових утворень, надавали шляхом оцшки основ-них компонентiв покривно! тканини - строми, су-дин та клггинних елементiв.
Контрольна група експериментальних тварин, яким не проводились жодш допомiжнi машпуляцп, мала вiдповiднi показники морфофункцюнального стану. Так вiдносно епiтелiю СОПР вiдмiчена зви-чайна багатошаруватiсть плоскокттинного незро-говiлого епiтелiю. При цьому в зроговiлому шарi епiтелiальних клгтин помiрна ступiнь кератишзацп. А бшьш глибош шари - базальний, шипуватий та зернистий достатньо виразнi, зерна кератопсл!ну невелик!. Базальнi епiтелiоцити без суттевих змiн, ядра в них однорщш, гiперхромнi, цитоплазма пом!рно базофшьна. 1нш! шари епiтелiю без змш розм!р!в та форми.
Власна пластинка СОПР мае рихлу сполучну тканину у вигляд! еластичних волокон, сичастий шар мае б!льш груб! сполучно-тканинш волокна (переважно арпроф!льш). Волокна репкулшв ма-ють мембрану та щлу мережу строми. М1ж волокнами розташоваш кттини-ф!бробласти, пстюцити, л!мфоцити, макрофаги звичайного вигляду та роз-м!ру. Переважають зрш клггани. М!ж волокнами власного шару слизово! оболонки розташоваш зрш
клiтини-фiбробласти, гiстiоцити, лiмфоцити, огрядш клiтини, макрофаги без ознак змш форми чi розмiру. В ядрах клгшн помiрнi вкраплення ядерного хроматину. Еозшофши вiдсутнi. Переважають колагеновi волокна.
Судинна сiтка мiкроциркулярного русла помiрно повнокровна, на зрiзi катляри округлi, овальнi чи дещо видовжеш. Ендотелiй судин звичайного розмiру, з крупними свiтлими ядрами, тромби в судинах вiдсутнi. Пероксидозна реакщя з МКА показала чiтке фарбування ендотелiю в су-динних структурах, часто вiдмiчались позитивно забарвленi структури в периваскулярному про-сторi. Шляхом цитофотометрп встановленi явища накопичення ендотелiально! NO - сентази в стшках судин до 0,90±0,08 ум.од., а в периваскулярному просторi до 0,20±0,04 ум.од.
Таким чином, за морфофункцюнальним станом тканин СОПР у кролiв контрольно!х групи як в клгшнах епiтелiю, стромi власного шару слизово! оболонки, так i мжрощркуляторному руслi мшро-скопiчнi показники цих об'екпв дослiдження не ма-ють помггаих вiдхилень з ознаками руйнування чи запалення.
В процесi формування моделi ХРАС, а також на етапах пстолопчного дослвдження встановленi вiзуальнi ознаки у виглядi виразкових дефектiв округло! чи овально! форми розмiром до 5 мм в дiаметрi, що мали дещо бiлястий налiт.
Вивчення гiстологiчних препаратiв СОПР на цьому етат дослiдження дозволили виявити ознаки руйнування, дистрофп та запалення об'екпв спо-стережень. Так в клгшнах епiтелiю чiтко спо-стерiгалось суттеве зб^шення незрiлого пло-скоклпинного ештелш, окрГм дшянок слизово!
MEDICAL SCIENCES / «Ш11ШетиМ~^©иГМа1>#Щ62)),2©2©
_78
ясен. Вiдмiченi дiлянки з некротичними руйнуван-нями в ерозiях, виразковi дефекти. Характерним стало столщення шарiв клиин епiтелiю та дмнки нерiвномiрного !х потовщення навiть на деякiй вщсташ вiд елемента враження. Мiсцями зустрiча-ються осередки розпаду клiтин поверхневих шарiв епiтелiю з ознаками виснаження метаболiчних про-цесiв. В деяких дiлянках препаратiв е ознаки папшоматозу. Епiтелiоцити мають суттево ваку-олiзовану цитоплазму - ознаки дистрофп. Мае мюце лiмфоцито-лейкоцитарна iнфiльтрацiя усiх шарiв епiтелiю, мiжклiтинний набряк. Мюцями накопичення еозiнофiльних лейкоцитiв, тобто ви-никають ознаки типового запалення. Вiдмiченi ознаки гшерплазп базального шару епiтелiального покриву.
Мають мюце суттевi змiни стромальних утво-рень слизово! оболонки. Так базальна мембрана на профарбованих препаратах однорщно ущiльнена, зустрiчаються дiлянки 11 розриву де стончений шар епiтелiю. Стромально-епiтелiальнi з'еднання мають пальцеподiбнi фiброваскулярнi сосочки, що за-ходять в шари епiтелiю. Спостерiгаеться проник-нення фiбробластiв, лiмфоцiтiв в мережу пластич-них та колагенових волокон, судини кашлярного русла стають суттево повнокровними, визначаеться пролiферацiя клiтин адвенцп.
На препаратах слизово! оболонки е дмнки розпаду епiтелiю до шару власно! пластинки - це глибош ерози. Дуже характерними виникають явища стоншення i подовження мiоцитiв, ознаки дистрофп мiофiбрiл, гомогенiзацiя цитоплазми м'язових волокон, набухання та редукцiя ядер мю-цитiв. У пiдслизовому шарi набряк, стоншення, фрагментащя i елiменацiя волокон. Мюцями - пов-нокров'я судин, агрегащя еритроцитiв в просвiтi судин. Стшки судин нерiвномiрно потовщенi, набрякл^ в них збiльшена проникливiсть, е му-ко1дне та фiброlдне набухання, лiзис колагенових волокон.
Перексидозна реакцiя з МКА до ендотелiаль-но! N0 - сентази виявляе рiзке зниження фарбу-вання зони ендотелш при зростанш iнтенсивностi колору в периваскулярному просторi.
В результатi цитофотометрп вираховаш показ-ники накопичення ендотелiальноi N0 - сентази в спнщ судин - до 0,60±0,08 ум.од.
Таким чином, отримаш результати гютолопч-ного дослщження слизово! оболонки рота у кролiв демонстртують вiдвертi запальнi, дистрофiчнi про-цеси в тканинах на тл порушень мiкроциркуляцi! та метаболiчних розладiв.
В результатi проведених комплексних лшу-вально-профiлактичних заходiв на змодельованому ХРАС у експериментальних тварин на трьох групах дослвдних кролiв отримано позитивний лжуваль-ний ефект на вйх групах. Так вiзуально в груш тварин, яким використовували з лшувальною метою лише аплжацп гелем «Холюал», чи лише озоноте-рапiю вiдмiчалось прискорене заживлення виразок на слизово! оболонцi в термши вiд 7 до14 днiв. В той час як використання одночасно знеболюючого
гелю «Холюал» та 030H0Tepani! дозволило усунути виразки з епiтелiзaцieю елеменпв вражень в термш 5-7 дiб. Одночасно виведення тварин з експери-менту для вивчення морфофункцiонaльного стану тканин СОПР пiддослiдних тварин довело, що в груш комплексного засобу л^вальних зaходiв вiдмiчено нaйбiльш результативну динaмiку змiн в клiтинних утвореннях, стромi та судинному руслi покривних тканин, що практично приблизило псто-лопчну картину до стану в контрольнш групi. Слiд зауважити, що вдалось ще раз довести, що озоноте-рaпiя значно полшшуе стан мiкроциркуляцi! кaпiлярного русла слизово! оболонки, нормaлiзу-ючи доставку кисню в проблемнi тканини, покра-щуючи обмiннi процеси та метaболiзм в тканинах. Одночасно знеболення та стимулящя епiтелiзaцi! в дiлянкaх виразок за допомогою гелю «Холюал» по-силюе лiкувaльний ефект ХРАС комплексного засобу.
Висновки. 1. Моделювання виразкових виси-пок та вражень слизово! оболонки порожнини рота в експериментальних умовах об'ективно ввдтворюе вiрогiднi пaтогенетичнi ланки aлергiчних пато-лопчних стaнiв в клiнiцi.
2. Апробащя лiкувaльно-профiлaктичних за-собiв на експериментальнш моделi тварин допома-гае у виборi бiльш результативних медикаментоз-них комплекйв для лiкувaння aлергiчних захво-рювань оргaнiв порожнини рота у людей.
3. Використання комплексу л^вально-профшактичного спрямування, який складаеться з озонотерапи та гелю «Холiсaл», при л^ванш хронiчного рецидивного афтозного стоматиту во-лодiе високим лiкувaльним ефектом з прискореним термiном видужання.
4. Запропонований та апробований в експери-ментi склад ЛПК рекомендуеться для запро-вадження в клiнiцi хворим з ХРАС.
Список лiтератури
1. Савкина Г.Д. Малый афтоз. Болезни полости рта. М.-ВИНИТИ РАМ, - 2005. - 124 с.
2. Ginat W. Aphtous stomatitis. Med. specialties. - 2013. - Vol. 6, № 2. - 486 p.
3. Каменецкая Т.М. Аэроионотерапия [Электронный ресурс] - Режим доступа: http ://www. golkom. ru
4. Недосеко В.Б. Алгоритм обследования больного с заболеваниями слизистой оболочки полости рта. 2003. Т.2, №19. - С .13-5.
5. Boldo A. Maj or recurrent aphthous ulceration: case report and review of the literature. Conn. Med. -2008. - Vol. 72, N5. - P. 271-273.
6. Leimola-Virtanen R.P., Happonen R.P., Syr-janen S. Cytomegalovirus (CMV) and Helicobacter pylori found in oral mucosal ulcers. Journal of Oral Pathology and ulcers. - 2000. - Vol.24, №1. - P.14-17.
7. Аникин А.Г., Панков Д.Д. Актуальные проблемы подростковой медицины. М.: Медицина. 2002. - 376с.
8. Neville B.D., Damm D.D., Allen C.M., Bouquot J. Oral and maxillofacial pathology. Medical. 2008. - 968 p.
