CC BY
0
РОССИЙСКИЙ Willi НШОШЕСКШ 11VII ШГРЕСС 2D23 АЛ I II
Онкогинекология
регулятор (613 микроРНК). Выявленные микроРНК были валидированы методом ПЦР-РВ. Обнаружены изменения уровня микроРНК miR-33b-5p, miR-423-5p, miR-6843-3p, miR-4668-3p, miR-30c-5p, miR-6743-5p, miR-4742-5p, miR-1207-5p и miR-17-5p в моче пациенток с РЯ относительно контрольной группы.
Заключение: С использованием метаболомного и тран-скриптомного профилирования в моче больных РЯ выявлен аномальный уровень микроРНК miR-33b-5p, miR-423-5p, miR-6843-3p, miR-4668-3p, miR-30c-5p, miR-6743-5p, miR-4742-5p, miR-1207-5p и miR-17-5p. Эти микроРНК имеют потенциал в качестве неинвазивных маркеров РЯ.
ЭФФЕКТИВНОСТЬ КОМПЛЕКСНОГО ЛЕЧЕНИЯ ЦЕРВИКАЛЬНЫХ ИНТРАЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ НЕОПЛАЗИЙ, ПРЕИНВАЗИВНОГО И МИКРОИНВАЗИВНОГО РАКА ШЕЙКИ МАТКИ С ОЦЕНКОЙ МОЛЕКУЛЯРНО-ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ НА СИСТЕМНОМ И ЛОКАЛЬНОМ УРОВНЯХ
П.И. Ковчур, О.И. Курмышкина, Т.О. Волкова
Место работы: ФГБОУВПО «Петрозаводский государственный университет», Петрозаводск, Россия Эл. почта: pkovchur@mail.ru
Недостаточная эффективность стандартных методов лечения рака шейки матки (РШМ) связана с малоизученными механизмами формирования воспалительного микроокружения, системой «контрольных иммунных точек», внутриклеточных сенсоров врожденного иммунитета, иммуно-супрессорных и проангиогенных цитокинов при развитии преинвазивного и микроинвазивного РШМ. Цель исследования: Оценить влияние иммунотерапии цервикальных интраэпителиальных неоплазий (CIN/cr in situ) и микроинвазивного (IA1) РШМ соценкой молекуляр-но-иммунологических показателей, выделенных из образцов опухолевой ткани и периферической крови пациенток с CIN1-2, CIN2, CIN3/cr in situ и IA1 РШМ. Материалы и методы: Проведен анализ частоты CD4+/ CD8+периферической крови, общего количества CD25+, FoxP3+, CD4+CD25+, CD4+CD25high и CD4+FoxP3+лимфоцитов, соценкой концентрации TGFp в сыворотке, экспрессии CD95 и уровня апоптоза в Т-клетках в 3 группах. 1 группа (n = 145) — пациентки с осложненным эктропионом, кондиломатозом и лейкоплакиями шейки матки, где выделили 2 подгруппы: а) подгруппа с ВПЧ (n = 63) и б) подгруппа без ВПЧ (n = 82). 2 группа (n = 32) — с CIN1-2, CIN2 степени с ВПЧ в 90,6% (29) случаев. 3 группа (n = 120) — с CIN3 (n = 75) и IA1 (n = 45) РШМ (ДНК ВПЧ в 90,4% и 96,7% случаев соответственно). Контроль — 30 здоровых женщин без патологии ш/матки и ВПЧ. Всем пациентам с ВПЧ в 3 группах 1 этапом проводилось хирургическое лече-
ние, 2 этапом — курс «Аллокина-альфа» (гистидил-гли-цил-валил-серил-глицил-гистидил-глицил-глутаминил-гистидил-глицил-валил-гистидил-глицин) по 1,0 мг 6 раз через день, подкожно. Оценка эффективности лечения шейки матки проводилась с помощью ПЦР-контроля ВПЧ, цитологического и кольпоскопического исследований через 3 месяца с начала лечения. Иммунологические показатели сравнивали с аналогичными показателями здоровых женщин (контроль), выполненными на проточном цитометре MACSQuant Analyzer (Miltenyi Biotec, Германия). Содержание TGFbl в плазме крови больных и контрольной группы оценивалось методом иммуноферментного анализа с использованием набора Platinum ELISA ("eBioscience", США). Определение активности каспаз-3, -6, -8 и -9-спек-трофлуориметрическим методом с использованием AFC-меченных тетрапептидных субстратов ("BioRad", США). Экспрессия мРНК каспаз оценивалась методом ПЦР в режиме реального времени. Для иммунофенотипирования опухоль-инфильтрирующих лимфоцитов (ОИЛ) образцы ткани подвергались ферментативной диссоциации с последующей проточной цитофлуориметрией клеточной суспензии и оценки экспрессии ключевых маркеров ЛА и ЭМП: VEGFR3/FLT4, c-Met/HGFR, транскрипционных факторов мезенхимального фенотипа (SLUG и EpCAM). Обследовано CIN1 (n = 7), С^3/рак in situ (n = 12), микроинвазивный рак IA1 (n = 7) и морфологически нормальный эпителий шейки матки (контроль, n = 5). Результат выражался в процентах, характеризующих наличие в крови клеток, типируемых по маркерам PD1 и TIM3, либо PD1 и LAG3 в общей популяции CD3+CD8+Т-лимфоцитов.
Результаты: В периферической крови у пациентов с CIN3 и IA1 РШМ показана высокая частота CD4+CD25+ и CD4+CD25high лимфоцитов (p < 0,001) и увеличение CD4+CD25+FoxP3+ клеток среди CD4-положительных лимфоцитов (p < 0,01). Численность CD8+CD25+ лимфоцитов в образцах крови больных CIN3 и1А1РШМ выше, чем в контроле (p < 0,05). Частота CD25+FoxP3+ клеток в популяции CD8+лимфоцитов увеличивалась при CIN3 и IA1 РШМ и доля CD8+CD25+FoxP3+и CD8+CD25+CD127low/neg клеток (p < 0,05), повышение концентрации белка TGFßl (p < 0,01). Показано увеличение численности в периферической крови CD95+Т-клеток за счет CD4+CD95+ (p < 0,05) и снижение (%) CD8+CD95+ клеток (p > 0,05) при формировании инвазивного рака. Изучено функциональное состояние лимфоцитов, обусловленное уровнем совместной экспрессии PD1/PDL1, TIM3 и LAG3 и принадлежностью к определенной субпопуляции Т-клеток. При сравнении уровня экспрессии (в % окрашенных клеток) PD1 и PDL1 в общих популяциях CD4 и CD8 ЛПК значимо в группе больных, и более выражено для CD3+CD8+T-лимфоцитов. При CIN3 количество клеток с фенотипом CD3+CD8+PD1+TIM3+и CD3+CD8+PD1 + LAG3+в каждом из вариантов не превышал 5% от общей популяции CD3+CD8+Т-лимфоцитов. Напротив, при IA1 РШМ количество таких клеток в каждом из указанных случаев более 5% (p < 0,05). В составе иммунного микроокружения
ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ ОПУХОЛИ Российское общество клинической онкологии
том/vol. 13 #3s1 • 2023
MALIGNANT TUMOURS
Russian Society of Clinical Oncology
ТЕЗИСЫ ПОСТЕРНЫХ ДОКЛАДОВ И ПРИНЯТЫЕ К ПУБЛИКАЦИИ
Онкогинекология
(на локальном уровне) изучена популяция CD4(+) и CD8(+) ОИЛ, для которых оценивался паттерн PD-1/-L1, TIM3, LAG3. В популяциях CD4 и CD8 Т-клеток в образцах CIN3 и 1А1РШМ показано увеличение клеток, экспрессирующих PD1/PDL1, TIM3 и LAG3 (p < 0,01). Выявлено увеличение активированных Трег в ОИЛ и увеличение CD8+FOXP3+CD25+Т-клеток, экспрессирующих PD1 + и TIM3 + . Аналогичная тенденция наблюдалась для CD25+CD127low/neg Т-клеток. Показано, что эти изменения в составе ОИЛ параллельны соответствующими изменениями Treg-кле ток в периферической крови при переходе от CIN3 к IA1 РШМ, что является дифференциальным признаком инвазивного РШМ. Для неиммунного компонента микроокружения изучен паттерн коэкспрессии спектра генов, контролирующих ключевые точки сигнальных путей ЛА и ЭМП-рецепторы (VEGFR3, c-Met), транскрипционные факторы мезенхимального фенотипа SLUG и EpCAM. Полученные результаты позволили нам обсуждать перспективные варианты ммунотерапии в комплексном лечении CIN и РШМ. В группе осложненной патологии ш/матки, CIN1-2, CIN2 степени шейки матки. В 1 группе (n = 145) у женщин в подгруппе с ВПЧ (n = 63) эффективность лечения составила в 96,8% (61) случаев через 3 месяца после комплексного лечения (лазерная деструкция Аллокин-альфа). В 3,2% отмечена неполная эпителизация и йод-негативные зоны и ВПЧ в клинически малозначимых концентрациях вируса (< 2lg 105). В 2 подгруппе без ВПЧ (n = 82) эффективность только лазеролечения без иммунотерапии составила 85,4% (14,6% — неполная эпителизация и ВПЧ в клинически малозначимых концентрациях вируса). В 2 гру ппе (n = 32) у пациенток с CIN1-2, CIN 2 степени ВПЧ (n = 29) после комплексного лечения эффективность составила 93,1%.
В группе CIN3 и IA1 РШМ. ВПЧ у больных спреинвазивным и микроинвазивным РШМ имел место у 90,4% и 96,8% случаев соответственно, при этом в сочетании с продукцией онкобелка Е7 в 69,3% и 66,7%. 1 группа — только хирургическое удаление очага неоплазии (n = 30) — в 26,7% (8) определялась значимая вирусная нагрузка и в 13,3% (4) — выявлен онкобелок Е7 с тенденцией к восстановлению молекулярных и иммунологических показателей в течение 3 месяцев (p > 0,05). 2 группа (n = 120) — при комплексном лечении происходит эффективная нормализация Т-хелперов, Tregs, уровня экспрессии CD95-мар-кера, TGF-ß1, FOXP3, уровня активности каспаз -8, -9, -3 и -6 в циркулирующих лимфоцитах (p < 0,01) и снижение ВПЧ-позитивных пациенток (1,7%). Таким образом, изменения апоптотической программы влимфоцитах периферической крови, молекулярных и иммунологических показателей у больных с CIN/cr in situ и IA1 РШМ носят системный, но обратимый характер и не наблюдаются через 3 месяца после комплексного лечения. Заключение: Полученные результаты обосновывают необходимость проведения комплексного изучения иммунного, воспалительного и ангиогенного профиля опухоли при разработке и прогнозировании эффективности стра-
тегий комбинированной терапии преинвазивного и ми-кроинвазивного РШМ.
ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК К ЛУЧЕВОЙ ТЕРАПИИ У БОЛЬНЫХ РАКОМ ШЕЙКИ МАТКИ
Н.Н. Цаплина1, Н.В. Порханова1, Д.С. Кутилин2
Место работы: 1. ГБУЗ «Клинический онкологический диспансер № 1» Минздрава Краснодарского края, Краснодар, Россия; 2. ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону, Россия
Эл. почта: k.denees@yandex.ru
Цель: Во всем мире рак шейки матки (РШМ) по заболеваемости занимает 4 место среди онкогинекологических заболеваний. В стандарты лечения ранней стадии РШМ входит радикальная гистерэктомия или лучевая терапия (ЛТ), а местнораспространенные формы рака лечат только ЛТ. При ЛТ полный клинический ответ достигается лишь у определенной когорты больных, что обусловлено формированием устойчивости опухолевых клеток к ЛТ. В настоящее временя в клинической практике отсутствует перечень маркеров для предсказания чувствительности опухолевых клеток к ЛТ. Поэтому целью исследования стало изучение показателя копийности генов у больных РШМ чувствительных и резистентных к ЛТ. Материалы и методы: Работа выполнена на 500 больных РШМ (IB1, IB2, IIA1). Для исследования использовали срезы тканей из FFPE-блоков. Поиск потенциальных маркеров осуществляли с помощью базы данных The Cancer Genome Atlas, используя пакет TCGABiolinks языка R. Для иден-тифицикации областей генома, размер которых значительно изменялся, в ряде образцов опухолей применяли алгоритм GISTIC. Выявленные маркёры валидировали методом ПЦР-РВ в образцах ДНК, выделенной из опухолевых и нормальных клеток модифицированным методом фенол-хлороформной экстракции. Опухолевые и нормальные клетки из тканей шейки матки выделяли с помощью лазерной микродиссекции с бесконтактным захватом Palm MicroBeam. Дистанционная ЛТ выполнялась на линейном ускорителе Varian TrueBeam в режиме VMAT/IMRT (СОД 50 Гр). Для оценки различий показателя копийности генов применяли критерий Манна-Уитни с поправкой Бонферрони.
Результаты: По результатам ЛТ пациентки были разделены на 2 группы — чувствительные к ЛТ (n = 280, группа 1) и резистентные (n = 220, группа 2). На этапе биоинформационного анализа был выделен ряд генов, изменяющих копийность и ассоциированных с чувствительностью к ЛТ— BIRC2, TRPC6, YAP1, LRRC31, SPRED3, MIR4456, CYP-1A, -A2, CYP11A1, MIR4786, TIGD1, GPX4, ST14, LINC00167, LINC00558, LINC00400, FOXO1, ENOX1, EPSTI1, NEK5, KCTD4,
ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ ОПУХОЛИ Российское общество клинической онкологии
том/vol. 13 #3s1 • 2023
MALIGNANT TUMOURS
Russian Society of Clinical Oncology
