CC BY
19
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
ПОКАЗАТЕЛИ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА И УРОВНИ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЛЕГКОГО
Златник Е.Ю., Бахтин А.В., Новикова И.А., Шульгина О.Г., Триандофилиди Е.И.
ФГБУ«Ростовский научно-исследовательский онкологический институт» Министерства здравоохранения РФ, Ростов-на-Дону, Россия
Введение. Циркулирующие опухолевые клетки (ЦОК) считаются в настоящее время одним из важных механизмов метастазирования злокачественных опухолей, но они же могут нести опухолевые антигены и потенциально индуцировать иммунный ответ. Сведения об их возможной роли в процессе «иммуноредактирования» опухоли единичны, хотя она может быть значимой для уточнения прогноза заболевания и оптимизации лечения больных.
Цель. Изучить взаимосвязи между характеристиками клеточного иммунитета и количеством ЦОК у больных раком легкого при различном гистогенезе и распространенности опухолей.
Материалы и методы. Изучали уровни ЦОК с помощью системы CellSearch®, основанной на экспрессии клетками молекул EpCAM, и показатели клеточного иммунитета с помощью проточного цитофлюориметра FACSCantoII (BD) у 30 больных мелкоклеточным (МРЛ) и немелкоклеточным (НМРЛ — аденокарциномой) раком легкого III и IV стадии до начала лечения; средний возраст 62±1,3 года. Из 20 больных МРЛ у 13 (65%) была III, у 7 (35%) — IV стадия заболевания; в группе с НМРЛ у всех 10 была диагностирована IV стадия. Статистическую обработку выполняли с использованием параметрических и непараметрических методов. Вычисляли среднюю, медиану, ошибку средней, достоверность различий, коэффициент корреляции (r); силу прямых и обратных корреляционных связей по критерию Пирсона.
Результаты. ЦОК были обнаружены у 27 больных (90%) в количестве от 1 до 6888, причем в группе МРЛ ЦОК выявлены у 17 больных (85%) в количестве 0-6888, среднее значение составило 655,7, медиана 38,5; в группе НМРЛ ЦОК — у всех 10 пациентов в количестве 1-486, среднее значение составило 57,2, медиана 5,0. При сравнении показателей иммунного статуса ЦОК+ больных РЛ разного гистогенеза, установлено, что их наличие при МРЛ сопровождалось более высоким содержанием CD3+CD4+ клеток с маркерами поздней активации (CD95+), а также CD3+CD4+ клеток с иммунофенотипом клеток «памяти» НМРЛ (84,4±2,4 и 72,2±3,7%; 73,2±4,1 и 64,7±3,5% соответственно, р < 0,05). У этих же больных уровень CD3+CD8+HLA-DR+ лимфоцитов был выше, чем у больных НМРЛ (29,2±4,2 и 19,8±2,2% соответственно, р < 0,05). У больных МРЛ обнаружены более низкие показатели индекса CD3+CD4+/CD3+CD8+ (1,4±0,1 и 1,9±0,3 соответственно, р < 0,05), активированных CD3+CD4+CD38+ лимфоцитов, (19,9±2,3 и 27,8±3,5% соответственно, р < 0,05), и NK-клеток, способных к продукции интерферона-гамма (CD16dimCD56bright) (7,1±1,5 и 15,3±3,8% соответственно, р < 0,05). При анализе данных в зависимости от стадии МРЛ был обнаружен в 36 раз более низкий уровень ЦОК при III стадии (44,6±18,7) по сравнению с IV (1616±952,7). Наряду с этим отмечено более высокое количество NKT- и В-лимфоцитов у больных IV стадии по сравнению с III стадией и более низкие уровни активированных Т-лимфоцитов как среди
CD3+CD4+, так и среди CD3+CD8+ клеток, а также с маркерами ранней (CD38, CD25) и поздней (CD95, HLA-DR) активации. Кроме того, при IV стадии ниже, чем при III, было количество активированных NK-клеток, экспрессирующих Granzyme В. Итак, наличие ЦОК у больных МРЛ сопровождается более низким уровнем активированных Т-лимфоцитов в субпопуляциях CD4+ и CD8+ и активированных натуральных киллеров, т.е., депрессией Т- и NK-звеньев иммунной системы. Результаты корреляционного анализа показали, что при МРЛ отмечены прямая связь с уровнем ЦОК количества наивных CD4 клеток (r = 0,5) и обратная — с уровнем CD3+CD4+ клеток памяти (r = -0,6) и активированных (CD3+CD4+CD95+) лимфоцитов (r = -0,7). НМРЛ характеризуется прямой связью уровня ЦОК с процентом CD3+, CD3+CD8+ клеток (r = 0,8) и сильной обратной — с количеством CD3+CD8+ клеток памяти (r = -0,7). Показана корреляция уровня ЦОК с количеством активированных CD3+CD4+CD25+ лимфоцитов (r = 0,6) и CD3+CD4+HLA-DR+ (r = 0,9), несмотря на обратную корреляцию с общим уровнем CD4+ клеток (r = -0,7) и ее отсутствие с процентом Tregs. Уровень ЦОК при НМРЛ обратно коррелирует с активностью фагоцитарного звена. Как при МРЛ, так и при НМРЛ уровень ЦОК обратно коррелирует с количеством Т-лимфоцитов памяти, хотя при МРЛ она выявлена с CD4+ (r = -0,6), а при НМРЛ -с CD8+ клетками (r = -0,7).
Заключение. При МРЛ и НМРЛ выявлен ряд корреляций уровней ЦОК с показателями иммунного статуса преимущественно минорными лимфоцитарными субпопуляциями: активированными Т-лимфоцитами, Т-клетками памяти, функционально активными NK-клетками.
Работа поддержана грантом РФФИ
№ 16-34-00244мол_а «Оценка взаимного влияния уровня циркулирующих опухолевых клеток и параметров иммунного статуса у больных раком легкого».
ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ РИСКА РАЗВИТИЯ МИОМЫ МАТКИ У КОРЕННЫХ ЖИТЕЛЬНИЦ г. ТАШКЕНТА
Исанбаева Л.М., Мусаходжаева Д.А.
Ташкентский институт усовершенствования врачей, Республиканский научный центр иммунологии Министерства здравоохраненияРУз, Ташкент, Узбекистан
Миома матки — одно из достаточно распространенных доброкачественных новообразований женской половой сферы. Опухоль растет как генетически аномальный клон клеток, который в результате произошедшей в нем мутации приобретает способность нерегулируемого роста. Значительную роль в предрасположенности к опухолям играют антигены гистосовместимости системы HLA. Целью исследования явилось изучение антигенов гисто-совместимости I класса у женщин — коренных жительниц Ташкента.
Обследованы 177 женщин в возрасте от 20 до 55 лет с диагнозом миома матки (основная группа). Обследованные женщины являлись лицами узбекской национальности, с учетом родословной в трех поколениях согласно материалам VII Уоркшопа по обсуждению антигенов системы HLA. Иммуногенетические исследования (типи-рование системы HLA для выявления антигенов I класса
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Онкоиммунология и гемобластозы Cancers and hematological malignancies
А, В, Сw), выполнены в РНЦ иммунологии Министерства здравоохраненияРУз. Н!ЬА-фенотип устанавливали с помощью стандартного микролимфоцитотоксическо-го теста с использованием панели HLA-антисывороток Санкт-Петербургского НИИ гематологии и переливания крови. Контрольную группу составили практические здоровые 300 женщин, принадлежащие к узбекской этнической группе. При обследовании общей группы женщин с миомой матки экспрессировались 35 HLA-антигенов I класса: 13 антигенов по локусу HLA-A, 17 антигенов по локусу HLA-B и 5 антигенов по локусу HLA-Cw. Было выявлено, что по локусу HLA-А наиболее часто был зарегистрирован антиген HLA-А28 (в 20,3% в основной группе против 4,9% в контрольной; р < 0,05). С наименьшей частотой экспрессировался антиген HLA-А2 (в 20,9% в основной группе против 36,9% в контрольной; р < 0,01). Следует отметить, что в основной группе регистрировались антигены в следующем проценте случаев: А25 — 5,6%, А29 - 4,5%, А24 - 2,8%, А21 - 2,2%, А23 - 1,6%, тогда как в контрольной группе эти антигены не выявлялись вовсе. При исследовании локуса HLA-B у больных с миомой матки по сравнению с контрольной группой наиболее часто (при р < 0,001) встречались антигены HLA-В8 (в 14,6% против 4,7% в контрольной группе), В22 (в 12,4% в основной группе против 1,3% в контрольной). Наименее часто встречался антиген HLA-В35 (в 14,1% в основной группе против 27,2% в контрольной ; р < 0,01). Анализ данных по распределению антигенов HLA-Cw-локуса в основной группе показал, что наиболее часто по сравнению с контрольной группой встречался антиген HLA-Cw5 (в 9,6% в основной группе против 2,3% в контрольной; р < 0,05). Антиген HLA-Cw4 определялся значительно реже, чем в контрольной группе (в 15,8% в основной группе против 36,2% в контрольной; р < 0,001). При измерении силы ассоциации HLA-антигенов с заболеваниями нами выявлена истинность связи в основной группе больных с миомой матки для следующих антигенов: В22 (х2 = 26,7; EF = 0,112; ОР = 10,5; рс < 0,001),В8 (X2 = 17,9; EF = 0,108; ОР = 3,8; рс < 0,001), что определило положительную ассоциацию этих маркеров с риском развития миомы матки. Аддитивная тенденция риска развития данного заболевания отмечалась у антигенов А28 (х2 = 13,5; EF = 0,806; ОР = 4,8; рс = н/д), Cw5 (X2 = 12,3; EF = 0,074; ОР = 4,4; рс = н/д). Отрицательная ассоциация с риском развития миомы матки была установлена для Cw4 (х2 = 19,7; РF = 1,7; ОР = 0,3; рс < 0,001), А2 (х2 = 12,6; РF = 1,3; ОР = 0,4; рс < 0,01), В35 (х2 = 12,6; РF = 1,2; ОР = 0,4; рс < 0,01), что подтверждает протек-тивный эффект данных антигенов.
Таким образом, проведенные нами исследования в группе больных с миомой матки позволили установить положительную ассоциацию и риск развития миомы матки у женщин - коренных жительниц Ташкента, имеющих антигены HLA-В8, В22 и А28. Отрицательная ассоциация с риском развития миомы матки выявлена у носительниц антигенов HLA-А2, В35, Cw4, которые выполняют протективную функцию. Ранняя верификация антигенов гистосовместимости у коренных жительниц Ташкента позволит прогнозировать риск развития миомы матки и провести ряд профилактических мероприятий, направленных на предотвращение роста миомы.
КОМПЛЕКСНЫЙ ПОДХОД К ОЦЕНКЕ ПРОФИЛЯ ИЗМЕНЕНИЙ КЛЕТОК ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ПРИ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ФОРМАХ РАКА ШЕЙКИ МАТКИ
Курмышкина О.В., Волкова Т.О., Щеголева Л.В., Ковчур П.И.
ФГБОУ ВО «Петрозаводский государственный университет», Петрозаводск, Россия
Введение. Основные механизмы, стимулируя которые развивающаяся опухоль может оказывать системное негативное влияние на иммунную систему, направлены на: 1) расширение популяций лейкоцитов с супрессорной активностью (например, Т-регуляторных клеток); 2) усиление процессов, приводящих к пониженной активности или истощению пула эффекторных клеток (например, через индукцию их апоптоза); 3) снижение численности (и активности) клеток-компонентов врожденной системы противоопухолевого надзора. В случае рака шейки матки (РШМ), ввиду его вирус-ассоциированной природы, высока вероятность обнаружить проявления этих механизмов в системной циркуляции на ранних этапах развития патологии, однако, далеко не все из них исследованы к настоящему времени.
Цель и задачи. Охарактеризовать профиль изменений в иммунной системе пациенток с доклиническими формами РШМ на основе следующих параметров: 1) экспрессии маркеров апоптоза (CD95/Fas, Annexin V) в основных популяциях лимфоцитов крови — CD4 и CD8 Т-клетках и естественных киллерах (NK); 2) численности регуляторных CD4 и CD8 клеток (Tregs) по экспрессии маркеров CD25, CD127, FoxP3; 3) численности субпопуляций NK-клеток (в том числе, регуляторных NKreg), а также Т-лимфоцитов с NK-подобным фенотипом (по относительному уровню CD3, CD16 и CD56), и выявить взаимосвязи между данными параметрами с целью предложить возможные механизмы, задействованные в ранних этапах прогрессии патологии.
Материалы и методы. Иммунофенотипирование лимфоцитов периферической крови было проведено методом проточной цитофлуориметрии на приборе MACSQuant Analyzer (Miltenyi Bitec); образцы крови были получены от 57 женщин с диагнозом цервикальная интраэпители-альная неоплазия (ЦИН) 3 степени (включая рак in situ) или микроинвазивный рак шейки матки (стадия IA1) непосредственно перед операцией, а также от 30 здоровых женщин, составивших группу контроля.
Результаты. Увеличение доли Т-лимфоцитов, связывающих Annexin V и ко-экспрессирующих CD95/Fas, в крови больных РШМ (относительно контрольной группы, р < 0,5) указывает на повышенный уровень спонтанного апоптоза Т-клеток, с возрастанием вклада Fas-зависимого пути. При дифференцированном анализе CD4 и CD8 популяций выявлен различный характер изменений экспрессии CD95, свидетельствующий о большей подверженности апоптозу CD8 Т-клеток в группе больных. Связывание Annexin V с CD3(-) популяцией также увеличивалось в группе пациенток с РШМ (р < 0,5), при этом различий в экспрессии CD95 на NK-клетках между обследованными группами не обнаружено (р > 0,5). У пациенток с РШМ наблюдали повышение численности как CD4+Tregs, так и CD8+Tregs, и одновременно снижение соотношения CD3CD8/Treg. По общей численности циркулирующих NK-клеток анализируемые группы не различались, но для субпопуляций NKreg-клеток и NK-подобных T-лимфоцитов выявлена тенденция (р > 0,5) к снижению
