CC BY
24
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Онкоиммунология и гемобластозы Cancers and hematological malignancies
А, В, Сw), выполнены в РНЦ иммунологии Министерства здравоохраненияРУз. Н!ЬА-фенотип устанавливали с помощью стандартного микролимфоцитотоксическо-го теста с использованием панели HLA-антисывороток Санкт-Петербургского НИИ гематологии и переливания крови. Контрольную группу составили практические здоровые 300 женщин, принадлежащие к узбекской этнической группе. При обследовании общей группы женщин с миомой матки экспрессировались 35 HLA-антигенов I класса: 13 антигенов по локусу HLA-A, 17 антигенов по локусу HLA-B и 5 антигенов по локусу HLA-Cw. Было выявлено, что по локусу HLA-А наиболее часто был зарегистрирован антиген HLA-А28 (в 20,3% в основной группе против 4,9% в контрольной; р < 0,05). С наименьшей частотой экспрессировался антиген HLA-А2 (в 20,9% в основной группе против 36,9% в контрольной; р < 0,01). Следует отметить, что в основной группе регистрировались антигены в следующем проценте случаев: А25 — 5,6%, А29 - 4,5%, А24 - 2,8%, А21 - 2,2%, А23 - 1,6%, тогда как в контрольной группе эти антигены не выявлялись вовсе. При исследовании локуса HLA-B у больных с миомой матки по сравнению с контрольной группой наиболее часто (при р < 0,001) встречались антигены HLA-В8 (в 14,6% против 4,7% в контрольной группе), В22 (в 12,4% в основной группе против 1,3% в контрольной). Наименее часто встречался антиген HLA-В35 (в 14,1% в основной группе против 27,2% в контрольной ; р < 0,01). Анализ данных по распределению антигенов HLA-Cw-локуса в основной группе показал, что наиболее часто по сравнению с контрольной группой встречался антиген HLA-Cw5 (в 9,6% в основной группе против 2,3% в контрольной; р < 0,05). Антиген HLA-Cw4 определялся значительно реже, чем в контрольной группе (в 15,8% в основной группе против 36,2% в контрольной; р < 0,001). При измерении силы ассоциации HLA-антигенов с заболеваниями нами выявлена истинность связи в основной группе больных с миомой матки для следующих антигенов: В22 (х2 = 26,7; EF = 0,112; ОР = 10,5; рс < 0,001),В8 (X2 = 17,9; EF = 0,108; ОР = 3,8; рс < 0,001), что определило положительную ассоциацию этих маркеров с риском развития миомы матки. Аддитивная тенденция риска развития данного заболевания отмечалась у антигенов А28 (х2 = 13,5; EF = 0,806; ОР = 4,8; рс = н/д), Cw5 (X2 = 12,3; EF = 0,074; ОР = 4,4; рс = н/д). Отрицательная ассоциация с риском развития миомы матки была установлена для Cw4 (х2 = 19,7; РF = 1,7; ОР = 0,3; рс < 0,001), А2 (х2 = 12,6; РF = 1,3; ОР = 0,4; рс < 0,01), В35 (х2 = 12,6; РF = 1,2; ОР = 0,4; рс < 0,01), что подтверждает протек-тивный эффект данных антигенов.
Таким образом, проведенные нами исследования в группе больных с миомой матки позволили установить положительную ассоциацию и риск развития миомы матки у женщин - коренных жительниц Ташкента, имеющих антигены HLA-В8, В22 и А28. Отрицательная ассоциация с риском развития миомы матки выявлена у носительниц антигенов HLA-А2, В35, Cw4, которые выполняют протективную функцию. Ранняя верификация антигенов гистосовместимости у коренных жительниц Ташкента позволит прогнозировать риск развития миомы матки и провести ряд профилактических мероприятий, направленных на предотвращение роста миомы.
КОМПЛЕКСНЫЙ ПОДХОД К ОЦЕНКЕ ПРОФИЛЯ ИЗМЕНЕНИЙ КЛЕТОК ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ПРИ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ФОРМАХ РАКА ШЕЙКИ МАТКИ
Курмышкина О.В., Волкова Т.О., Щеголева Л.В., Ковчур П.И.
ФГБОУ ВО «Петрозаводский государственный университет», Петрозаводск, Россия
Введение. Основные механизмы, стимулируя которые развивающаяся опухоль может оказывать системное негативное влияние на иммунную систему, направлены на: 1) расширение популяций лейкоцитов с супрессорной активностью (например, Т-регуляторных клеток); 2) усиление процессов, приводящих к пониженной активности или истощению пула эффекторных клеток (например, через индукцию их апоптоза); 3) снижение численности (и активности) клеток-компонентов врожденной системы противоопухолевого надзора. В случае рака шейки матки (РШМ), ввиду его вирус-ассоциированной природы, высока вероятность обнаружить проявления этих механизмов в системной циркуляции на ранних этапах развития патологии, однако, далеко не все из них исследованы к настоящему времени.
Цель и задачи. Охарактеризовать профиль изменений в иммунной системе пациенток с доклиническими формами РШМ на основе следующих параметров: 1) экспрессии маркеров апоптоза (CD95/Fas, Annexin V) в основных популяциях лимфоцитов крови — CD4 и CD8 Т-клетках и естественных киллерах (NK); 2) численности регуляторных CD4 и CD8 клеток (Tregs) по экспрессии маркеров CD25, CD127, FoxP3; 3) численности субпопуляций NK-клеток (в том числе, регуляторных NKreg), а также Т-лимфоцитов с NK-подобным фенотипом (по относительному уровню CD3, CD16 и CD56), и выявить взаимосвязи между данными параметрами с целью предложить возможные механизмы, задействованные в ранних этапах прогрессии патологии.
Материалы и методы. Иммунофенотипирование лимфоцитов периферической крови было проведено методом проточной цитофлуориметрии на приборе MACSQuant Analyzer (Miltenyi Bitec); образцы крови были получены от 57 женщин с диагнозом цервикальная интраэпители-альная неоплазия (ЦИН) 3 степени (включая рак in situ) или микроинвазивный рак шейки матки (стадия IA1) непосредственно перед операцией, а также от 30 здоровых женщин, составивших группу контроля.
Результаты. Увеличение доли Т-лимфоцитов, связывающих Annexin V и ко-экспрессирующих CD95/Fas, в крови больных РШМ (относительно контрольной группы, р < 0,5) указывает на повышенный уровень спонтанного апоптоза Т-клеток, с возрастанием вклада Fas-зависимого пути. При дифференцированном анализе CD4 и CD8 популяций выявлен различный характер изменений экспрессии CD95, свидетельствующий о большей подверженности апоптозу CD8 Т-клеток в группе больных. Связывание Annexin V с CD3(-) популяцией также увеличивалось в группе пациенток с РШМ (р < 0,5), при этом различий в экспрессии CD95 на NK-клетках между обследованными группами не обнаружено (р > 0,5). У пациенток с РШМ наблюдали повышение численности как CD4+Tregs, так и CD8+Tregs, и одновременно снижение соотношения CD3CD8/Treg. По общей численности циркулирующих NK-клеток анализируемые группы не различались, но для субпопуляций NKreg-клеток и NK-подобных T-лимфоцитов выявлена тенденция (р > 0,5) к снижению
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
их относительного количества, сопровождаемая изменением соотношения CD56dim/CD56bnsht NK-клеток в группе больных. Сравнение полученных данных для пациенток с пре-инвазивным (in situ) и микроинвазивным раком позволяет предполагать усиление наблюдаемых отклонений при дальнейшей прогрессии неоплазии, но достоверных различий между этими подгруппами не установлено. Результаты поиска корреляций между 80 выбранными фе-нотипическими параметрами позволяют говорить о том, что при развитии инвазивного РШМ происходит согласованное увеличение экспрессии маркеров иммунорегуля-торных CD4/CD8 клеток, становятся более выраженными взаимосвязи между Tregs, уровнем экспрессии CD95 на CD4 и CD8 Т-клетках и апоптозом, что может иметь непосредственное отношение к механизму формирования патологических отклонений в иммунной системе.
Заключение. Индукция инвазивного роста при РШМ поддерживается широким спектром нарушений, при этом, системные изменения баланса регуляторных клеток врожденного и адаптивного иммунитета могут играть ключевую роль и должны рассматриваться в качестве объекта более детального исследования при разработке новых методов иммунотерапии.
Работа выполнена при поддержке РФФИ (проект №16-34-60019).
ОПЫТ ФЕНОТИПИРОВАНИЯ КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА У БОЛЬНЫХ С МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ
Моруга Р.А.1, Родкина Г.Н.1, Путков С.Б.1, Казаков С.П.1 2
1ФГКУ «Главный военный клинический госпиталь
им. Н.Н. Бурденко» Министерства обороны РФ, Москва,
Россия
2 ФГБОУДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Цель. Проведение сравнительных исследований костного мозга на проточном цитофлюориметре и оценка фе-нотипических особенностей популяций плазматических клеток пациентов с множественной миеломой (ММ), для его анализа и использования полученных результатов в диагностической лабораторной практике.
Материалы и методы. Для исследования использовался пунктат костного мозга, полученный от 10 пациентов с подозрением на ММ на разных стадиях заболевания и лечения. Фенотипически оценивалась популяция клеток, предполагаемая как миеломные плазматические клетки, в результате чего был получен фенотип, как правило, присутствующий на опухолевых миеломных клетках: CD45+dimCD19-CD38+CD138+CD56+dim. А также исследовалось относительное количество внутриклеточного и мембранного содержания легких цепей иммуноглобулинов — Kappa+ и Lambda+, с применением технологии пер-мобилизации клеток. Образцы сыворотки крови и мочи пациентов исследовались методом электрофореза, имму-нофиксации, нефелометрии с определением количества белка в сыворотке и моче, фенотипа миеломы — тяжелых с общими и свободными цепями, количества свободных и общих легких цепей. Костный мозг больных так же направлялся на исследование иммуногистохимическими и цитогенетическими методами.
Результаты. От пациентов с установленным диагнозом ММ, в процессе исследования был выявлен материал, со-
держащий легкие цепи фенотипа Kappa+ и Lambda+, неоднородный по степени их экспрессии. В ходе дальнейших исследований были получены три группы пациентов.
Первая: с положительными результатами иммунофик-сации по IgG, Lambda в сыворотке крови, повышенным содержанием общих легких цепей Lambda, повышенное количество, как клеток костного мозга, несущих легкие цепи Lambda+ медиана — 93,2% (88,7-97,8%) в исследуемой популяции и средней плотности данного рецептора на клетках медиана — 22,7 (21,7-23,7).
Вторая — с аналогичной тенденцией по IgG, Kappa и клетками Kappa+ медиана — 89,5% (83,3-95,7) и невысокой плотностью экспрессии рецепторов медиана — 4 (2,8-5,2).
Третья — в данной группе методом иммунофиксации сыворотки крови выявлялся фенотип IgG, Lambda или IgG, Kappa и повышенное количественное содержание данных легких цепей. Однако в этой, группе по результатам проточной цитометрии, отмечалось невысокое относительное содержание клеток, несущих легкие цепи медиана — 3,25% (3,2-3,3%), и невысокой экспрессией плотности рецепторов медиана — 3,2 (1,9-4,5).
У других пациентов, не имевших диагноза ММ, в ходе исследования косного мозга определялся значительно меньший процент количества плазматических клеток экспрессирующих легкие цепи Kappa+ или Lambda+ 5,7% (0,5-11%) клеток, а средняя плотность экспрессии по данным маркерам, не превышала — 1,0.
Также все обследованные пациенты были распределены согласно прогностической классификации предлагаемой клиникой Mayo (США, 2013 г.). Было отмечено повышение количества плазматических клеток в миело-грамме у пациентов с более высоким риском прогрессии ММ, по данным, полученным цитогенетическими методами исследования. Было проведено распределение пациентов по группам риска и прогнозу злокачественности. Так высокий прогностический риск по цитогенетическо-му исследованию и классификации клиники Mayo — у 1 пациента с 76,4% плазматических клеток в костном мозге. Промежуточный риск — у 1 пациента с 46,6% плазматических клеток. Стандартный риск выявлен у 4 пациентов с 36% (9,6-63,6) плазматических клеток.
Выводы. По результатам проведенных исследований нами были сформированы три, выше описанных, группы фенотипа «плазматических миеломных» клеток и прослежен ряд тенденций.
Дальнейшая работа в данном направлении, по нашему мнению, может оказаться необходимой при оценке стадии и прогноза заболевания, а также начала лечения и выживаемости пациентов с множественной миеломой, при сравнительной характеристике фенотипа и генотипа.
РОЛЬ ГИПЕРВИРУЛЕНТНЫХ Н. PYLORI, ГЕНЕТИЧЕСКОГО ПОЛИМОРФИЗМА ЦИТОКИНОВ В ИММУНОПАТОГЕНЕЗЕ ХРОНИЧЕСКОГО ГАСТРИТА И ИХ ВЗАИМОСВЯЗЬ С КАНЦЕРОГЕНЕЗОМ
Москалев А.В., Рудой А.С.
Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург, Россия
На протяжении ряда лет, опираясь на данные собственных исследований и литературы, изучали вопросы иммунопатогенеза острого и хронического гастрита (ХГ), язвенной болезни. Однако вопросы взаимосвязи хронического атрофического гастрита (ХАГ) с риском развития
