CC BY
16
УДК 636.3.082.453.5
Безвесшьна А.В.*
1нститут тваринництва УААН, м. Хартв
ЕФЕКТИВШСГЬ ЗАСТОСУВАННЯ Р1ЗНИХ СЕРЕДОВИЩ ДЛЯ РОЗБАВЛЕННЯ СПЕРМИ БАРАНШ-ПЛ1ДНИКШ ПРИ КРЮКОНСЕРВАЦП
У статт1 наведет дат виживаност1 спермИ'в баратв-плгднитв у деконсервованог сперми, яка була розбавлена дослгдним середовищем з додаванням яечного порошку.
Ключоei слова: сперма, барани-пл1дники, крюконсерващя, виживатсть спермпв, яечний порошок.
В багатьох державах з високо розвинутим сшьським господарством одне з провщних мюць займае вiвчарство, як галузь промислового тваринництва. Вiвчарство Укра!ни зараз перебувае в глибокш економiчнiй кризi, яка призвела до критичного зниження поголiв'я овець в Укрш'ш [1].
Вiдновлення вiвчарства та перетворення його у конкурентноспроможну галузь являеться необхщним етапом вiдродження сшьського господарства.
Один з шляхiв штенсифжаци вiвчарства - використання бiотехнологiчних методiв, якi забезпечують прискорену реалiзацiю генетичних ресурав. Найбiльш перспективним методом для швидкого i якiсного вiдтворення поголiв'я овець е штучне осiменiння заморожено-вщтанутою спермою барашв-плiдникiв.
Розробка науково-обгрунтовано! технологи регулювання вiдтворенням овець, що мiстить в собi контроль охоти, штучне оаменшня в фiксований час, дiагностику суягностi, синхронiзацiю охоти дозволить вщ початку до кiнця планувати отримання ягнят в такi строки, котрi неможливi в природних умовах [2].
Складний хiмiчний та електролiтний склад натурального середовища збуджуе сперми, яю знаходяться поза органiзмом. При цьому запас живильних речовин швидко знижуеться, внаслiдок чого сперми утрачають електричний заряд, вщбуваеться аглютинацiя та !х загибель. Для усунення негативного впливу плазми сперми на сперми та продовження строку !х життездатност поза оргашзмом сперму розбавляють синтетичними середовищами рiзного складу.
Синтетичнi середовища повинш вiдповiдати наступним вимогам: мати оптимальну буферну емнiсть (кислотно-лужний показник), осмомоляршсть та електропровiднiсть, нейтральне або близьке до нього рН (6,4-7,0), збер^ати заплщнювальну здатнiсть спермпв [3, 4, 5, 6, 7].
Метою дослщжень було вивчення антишоково! ди яечного порошку у стандартному середовищi для розбавлення, крюконсерваци та зберiгання сперми барашв-плщниюв у рiдкому азотi.
* Науковий кер1вник - Тихона Г.С., к.с.-г.н. © Безвесшьна А.В., 2008
10
Методика дослджень. Дослщження проводилися у лаборатори трансплантаци ембрюшв I тканин ,на сперм1ях барашв-плщниюв сокольско! породи I полуварс. Сперму вщ барашв одержували на штучну вагину один раз на тиждень триплетною садкою, вщповщно до шструкци. Ус дослщження проводили на роздшених еякулятах.
Яюсть еякуляту I його придатшсть для оаменшня самиць ощнювали по зовшшшм (макроскотчним) ознакам: об'ему, кол1ру, запаху, консистенци.
При мжроскошчному дослщженш сперми насамперед визначали густоту I концентращю сперми, рухомють (актившсть спермив). Також проводили визначення резистентност I дихання спермпв.
Шсля ощнки якост сперми, за вищевказаними показниками, проводили розбавлення И контрольним та дослщним середовищами.
Рецепт контрольного середовища вщ1брали з каталогу Головного управлшня тваринництва МСГ СРСР. У дослщному середовищ1 жовток курячого яйця замшили на яечний порошок. Дал1 представлеш склад контрольного (1) та дослщного (2) середовищ:
1.лактоза - 12,0; жовток курячого яйця - 6,0; глщерин - 8,0; вода бщистильована - 100,0;
2.лактоза - 12,0; яечний порошок - 5,0; глщерин - 8,0; вода бщистильована - 100,0.
Оптимальну концентращю яечного порошку у середовищ1 визначали дослщним шляхом.
Шсля розбавлення сперми контрольним I дослщним середовищами у стввщношенш 1:1 без глщерину та шкубування И при температур1 +2-40С протягом одше! години, розбавляли тими ж середовищами з додаванням глщерину у стввщношенш 1:4 з послщуючою еквшбращею протягом двох годин. Замороження розбавлено! сперми проводили у вщкритих гранулах на фторопластовш пластиш при температур! -790С з подальшим збереженням И в рщкому азот при температур1 -1960С.
Заморожену сперму вщтаювали у водянш баш при температур1 +400С у 3%-му розчиш лимоннокислому натр1ю, а пот1м визначали виживашсть I актившсть спермив при +380С.
Концентращю водневих юшв середовища (рН) вим1рювали юномером марки ЕВ-74. Осмомоляршсть визначали за допомогою осмометру марки ОМК 1С-01.
Прогнозування заплщнювально! здатност сперми визначали, розробленим нами методом пенетраци, для проведення якого використовували скляш кашляри довжиною 120-180 мм I д1аметром 1,2 мм, що заповнювали 5%-м розчином глюкози або фосфатним буфером. Пот1м кашляри одним кшцем занурювали у проб1рку з1 спермою при +380С на 15-30 хвилин, шсля чого тд мжроскопом встановлювали максимальну висоту, на котру пщнялися спермп.
Результати дослщжень. В дослщах використовувався замшник жовтка курячого яйця - яечний порошок, який складаеться 1з води - 8,5; бшюв - 44,0; жир1в - 42,2; вуглевод1в - 1,8 I золи - 3,5% у пор1внянш з1 складом нативного яечного жовтку - води - 50,0%; бшюв - 17,3; жир1в - 31,2; вуглевод1в - 0,5; золи
11
- 1,0%. Л1тературний анал1з им1чного складу показав, що в яечному порошку значно бшьше жир1в, вуглевод1в та бшюв.
Кр1м того, температура +1700С, при якш виготовляють яечний порошок, знищуе умовно патогенну мжрофлору, яка може бути у курячому яйщ, що попереджуе занесення И у сперму, а пот1м у статев1 шляхи самиць при штучному оаменшш.
Визначення ф1зико-х1м1чних властивостей показало, що концентращя водневих юшв (рН) у контрольному середовищ1 - 6,75; осмомоляршсть без глщерину - 328,5 мОсм/кг, у дослщному середовищ1 - 7,2 та 329,5, вщповщно, що вщповщае вимогам до середовищ.
Для визначення оптимально! кшькост яечного порошку проведет дослщження з додаванням його ввд 3 до 6 г на 100 мл середовища для розбавлення, крюконсервацп сперми. Встановлено, що оптимальною дозою для спермпв являеться 5-% концентращя яечного порошку.
Таблиця 1
Якчсш показники розбавленоУ та деконсервованоУ сперми барашв-плщник1в
у середовищах з вм1стом яечного жовтка та яечного порошку (п=32).
Середовища для розбавлення сперми Рухомють, бал Виживашсть, год. Абсолютна виживашсть, ум. од.
Розбавлена
З яечним жовтком (контроль) 9,0 ± 0,0 11,5 ± 0,5 55,5 ± 1,5
З яечним порошком (дослвд) 9,0 ± 0,0 11,0 ± 3,2 47,5± 2,2
Деконсервована
З яечним жовтком (контроль) 5,7 ± 0,3 7,5 ± 0,3 15,0 ± 1,7
З яечним порошком (дослвд) 5,2 ± 0,1 6,0 ± 0,0 13,5± 0,2
При додаванш в дослщне середовище яечного порошку виживашсть спермпв була дещо нижча, шж у контрольному, але р1зниця м1ж показниками життездатност була не достов1рна.
Результати пор1вняльних дослвдв з визначення заплщнювально! здатност спермпв за допомогою тесту пенетраци показали, що найвищою рухомютю волод1е нативна сперма в пор1внянш з заморожено-вщтаяною. Так, у св1жеотриманш сперм1 з рухомютю спермпв у 7 бал1в при шкубуванш +380С протягом 15 хвилин проникаюча здатшсть була 33 мм (п=5), а у заморожено-вщтаянш сперм1 з рухомютю спермпв у 4 бали складала 27,5 мм (п=5).
Таким чином, розроблене дослщне середовище з доданням яечного порошку, який також як жовток нативного яйця волод1е антишоковою д1ею I пщтримуе виживашсть спермпв на р1вш стандарту з дотриманням асептичних умов.
Висновки. Розроблене середовище з додаванням яечного порошку замють нативного жовтка яйця забезпечуе виживашсть спермпв у деконсервованш сперм1 барашв-плщниюв на р1вш стандарту, тому його також можна використовувати для розбавлення сперми.
Л1тература:
1. Рябко В.М. Розвиток в1вчарства на швдш Укра!ни/ Вюник аграрно! науки. -
12
№ 4, 2002.- С. 39-41.
2. Балашов Н.Г., Евсюков М.Е. Среды для разбавления и хранения спермы с/х животных. - Москва: МСХ СССР (Главное управление животноводства), 1977. - С 15.
3. Платов Е.М. Криоконсервация спермы баранов/ Криоконсервация спермы сельскохозяйственных животных. - Москва, 1988. - С.161-187.
4. Бугров О.Д. Вплив осмотичного тиску на амя плщнишв при його глибокому заморожуванш/ Розведення i утримання сшьськогосподарських тварин. - Вип. 5. - Кшв, 1965. - С. 36-42.
5. Инструкция по искусственному осеменению овец и коз. - Москва: Агропромиздат, 1986. - С.28.
6. Зайцев В.В., Варнавская В.А., Варнавскмй А.Н. Среды для замораживания семени/Овцеводство, 1989.- №6. - С.34-35.
7. Осташко Ф.И. Биотехнология воспроизвоства крупного рогатого скота. Киев: Аграрна наука, 1995. С. 63-74.
Summary Bezvesilna A.V
EFFICIENCY OF APPLICATION OF DIFFERENT MEDIA FOR RAMS SPERM DILUTION BEFORE CRYOPRESERVATION
The article considers results of rams' sperm cells survival in frozen-thawed
sperm diluted by experimental medium supplemented with egg powder
Стаття надшшла до редакцИ 08.02.2008
13
