CC BY
12
УДК: 636.2:591.463.1.
Кава С.Й, Дмитр1в О.Я.,
Лъв\всъкый нацюналъныйутеерсытет еетерынарногмедыцыны та бютехнологт ¡мет С.З. Гжыцького Осташв Д.Д., Яремчук 1.М., Кузьмша Н.В.
1нститут б1ологИ'тварынНААН, м. Лъвгв
ВМ1СТ Л1ПОПРОТЕ1Н1В СПЕРМИ ЗА РОЗР1ДЖЕННЯ ЕЯКУЛЯТ1В БУГАЯ РОЗБАВНИКАМИ 3 ЯСЧНИМ ЖОВТКОМ
Вивчали вм1ст лтопротешв еякулятах бугагв за розр1дження розбавниками з яечним жовтком. Встановлено, що для св1жоотрыманог спермы характерный вм1ст фракцш лтопротешв (%): хшомжрон - 19,6±3,21, дуже нызъког - 11,2±2,36, нызъког - 22,9±2,26, высоког - 21,2±1,77 г дуже высоког - 24,0±2,76 щтъность Розргдження еякулят1в зныжуе на 8,3 - 10,0 % хшомжрон г пгдвыщуе на 2,0 - 7,7 % дуже нызъког та 3,4 - 4,3 % нызъког щшъност1 лтопртешв. 1нкубування спермы впродовж 4 д1б змгнюе ствв1дношення лтопротешв у бж тдвыщення вмгсту велыкого г зныження - малого розм1ру молекул. Пры цъому, найбшъше хшомжрон встановлено в еякулятахрозбавленых середовыщем «Оптыдыл» (40,6±2,84 %) г менше (31,6 - 37,6 %) - лактозо-жовтково-глщерыновым розргджувачем г в нерозбавлешй сперм1. Выжывання спермпв у нерозбавлешы сперм1 - 110,5± 5,70 год, выще на 16,9 год (13,3 %) пры розргдженг еякулят1в лактозо-жовтково-глщерыновым розргджувачем г найвыще (156,3±14,56 год) пры выкорыстаннг «Оптыдылу»
Ключов1 слова: лтопротегны, сперми, выжывання, сперма, бугай.
Ефектившсть штучного оаменшня кор1в значною м1рою залежить вщ складу середовищ, яю використовують для розрщження еякулят1в буга!в. В основному розрщжувач1 мютять речовини, яю здатш забезпечувати захист \ збереження метабол1чно! активное^ статевих кл1тин за технолопчно! обробки спер ми I високу заплщнювальну здатшсть спермив [1 - 3]. Зокрема, в склад розрщжувач1в включають глщерин I цукри, а в якосп джерела лшдав - жовток яець курей [4]. При цьому, в практищ роботи племпщприемств використовуються, в основному, розрщжувач1 сперми буга!в з обов'язковою присутшстю в 1х склад1 жовтка яець та глщерину I з додаванням глюкози, фруктози, рафшози чи лактози окремо або у поеднанш в р1зних сшввщношеннях.
Мета роботи - вивчити вплив жовтково-глщеринових розрщжувач1в р1зно! рецептури на формування лшопротешових комплекав сперми буга!в.
Матер1али та методи дослщжень. Дослщження проведен! на баз1 ТзОВ ЛНВЦ «Захщплемресурси», 1нституту бюлогп тварин НААН 1 кафедри акушерства, гшекологп та бютехнологп вщтворення тварин ¿меш Г. В. Зверево! ЛНУВМ та БТ ¿меш С.З. Гжицького. Еякуляти буга!в отримували на штучну вагшу з режимом використання дуплетна садка два рази на тиждень через дв1 доби. Св1жоотриману сперму оцшювали за об'емом (мл), актившстю (рухливютю; %) та концентращею спермпв (109 кл1тин/мл). Для дослщжень
116
вщбирали еякуляти об'емом бшьше 2,0 мл, концентрацию - бшьше 0,7* 109 кл1тин/мл та 70 % I бшьше живих спермив. Для виявлення впливу складу розрщжувача еякулят дшили на частини: нерозбавлений св1жоотриманий I розбавлений лактозо-жовтково-глщериновим середовищем (ЛЖГР: лактоза -11,5 г, жовток курячих яець - 20 мл, глщерин - 5,0 мл I вода - 100 мл) та «Оптидил» (готовий комерцшний продукт з1 складом: трис-буфер, яечний жовток, глщерин).
У еякулятах св1жоотриманих нерозбавлених, розрщжених середовищами та шкубованих 4 доби при 2 - 4°С вивчали вмкт фракцш лшопроте!шв (ЛП; %) методом електрофорезу в пол1акриламщному гел1 (ПААГ) I виживання спермпв до припинення прямолшшно-поступального руху (год). Для дослщження ЛП формували пластини ПААГ з град1ентном концентрацш акрилам1ду: 3,5 %, 5,0 % та 7,5 %. Для електрофорезу попередньо зразки сперми фарбували (до 0,1мл св1жоотримано! сперми додавали 0,03 мл 0,1% розчин фарб Судан III + Судан IV (1:1) у 70 % етиловому спирт1) I 30 хв шкубування в темнотг В лунки концентруючого гелю вносили 0,07 мл сум1шг Кшькюний анал1з I визначення вмюту лшопроте!шв (%) проводили прямим скануванням гел1в на анал1затор1 електрофореграм "АФ-1", довжина хвил1 610 нм.
Результати дослщжень. Для св1жоотриманих еякулят1в буга!в характерний вмкт фракцш лшопроте!шв (ЛП; %): хшомжрон (ХМ) - 19,6±3,21, дуже низько! (ДНЩ) - 11,2±2,36, низько! (НЩ) - 22,9±2,26, високо! (ВЩ) -21,2±1,77 \ дуже високо! щшьност1 (ДВЩ) - 24,0±2,76 (табл.). За розрщження еякулят1в вмют фракцш ЛП змшюеться.
Таблиця1
Вм1ст лшопротеТшв залежно вщ складу розрщжувача 1 тривалосп
шкубування сперми бугаУв (п =13; М±т)
ЛП, % Св1жоотримана 1нкубована 4 доби при 2 - 4°С:
нероба-влена розрщжена: нерозба-влена розрщжена:
ЛЖГР «Оптидил» ЛЖГР «Оптидил»
хм 19,6±3,21 9,6±2,82 11,3±2,48 37,6±10,17 31,6±5,69* 40,6±2,84***
ДНЩ 11,2±2,36 18,9±4,82 13,2±3,41 13,4±3,72 11,5±4,02 8,8±3,06
НЩ 22,9±2,26 26,3±3,39 27,2±3,25 12,9±2,98* 13,4±2,59** 13,7±1,80**
вщ 21,2±1,77 22,3±1,78 22,6±1,71 17,6±4,20 21,4±2,52 20,1±2,70
ДВЩ 24,0±2,76 23,4±2,26 25,7±4,10 18,4±5,32 20,1±2,09 16,6±1,66*
* Примака: р1зниця статистично в1ропдна - * р < 0,05; ** р < 0,01; *** р < 0,001
Так, за використання ЛЖГР \ «Оптидилом» знижуеться вмкт, вщповщно, на 10,0 { 8,3 % ХМ та зростае на 7,7 { 2,0 % ДНЩ { на 3,4 { 4,3 % НЩ, пор1вняно з нерозбавленим еякулятом. Вм1ст лшопроте!шв ВЩ 1 ДВЩ не змшюеться I становить, вщповщно, 21,2 - 22,6 I 23,4 - 25,7%. Р1зниця м1ж величинами значень знаходиться в межах похибки середнього арифметичного (1,4 - 2,3 %). 1нкубування сперми при 2 - 4°С призводить до втрат (розщеплення) лшопротешових комплекав, що проявляеться на фореграмах меншою штенсившстю забарвлення смуг лшопроте!шв (рис.1).
117
хм
| лпднщ лпнщ
лпвщ
| лпдвщ
2 3
Рис.1. Лшопроте'ши сперми:
1 - св1жоотриманоТ нерозбавленоТ; 2 - розбавленоТ ЛЖГР; 3 - розбавленоТ ЛЖГР та шкубованоТ 4 доби при 2-4°С.
Поряд з цим, зростае вмют ХМ у сперм1 нерозбавленш на 18,0 %, розрщженш ЛЖГР на 22,0 % (р < 0,01) I «Оптидилом» на 29,3 % (р < 0,001), пор1вняно з величинами значень до шкубування. На противагу, вмют шших фракцш лшопротеТшв знижуеться: у нерозбавлених еякулятах на 2,2 % ДНЩ, на 10,0 % (р < 0,05) НЩ, на 3,6 % ВЩ [ на 5,4 % ДВЩ; у розбавлених ЛЖГР, вщповщно, 7,4, 12,9 (р < 0,01),^0,9 \ 3,3 % та «Оптидилом» - 4,4, 13,5 (р < 0,01), 2,5 [ 9,1 % (р < 0,05). Имов1рною причиною зниження штенсивност1 зафарбування смуг лшопротеТшв в сперм1 за шкубування (нерозбавленш \ розрщженш) е використання сперм1ями лшопротеТшв (плазми сперми й розрщжувач1в) як шляхом Тх включения в мембранш структури статевих кл1тин, так [ для ресинтезу АТФ в ланцюгу дихання мггохондрш [8]. Дане припущення пщтверджуеться тривалютю виживання спермнв, величина якого найнижча у нерозбавленш сперм1 (110,5± 5,70 год), вища на 16,9 год (13,3 %) при розрщжеш еякуля™ ЛЖГР [ найвища (156,3±14,56 год) при використанш «Оптидилу» (рис. 2).
Виживання
□ нерозбавлена сперма; розрщжена: □ ЛЖГР; □ Оптидил Рис. 2. Виживання сперм1\в за шкубування сперми при 2 - 4°С
118
Таким чином, середовище «Оптидил» мктить оптимальш концентрацп компонент, в тому числ1 жовток курячих яець, яю забезпечують збереження лшопротешових комплекшв сперми буга!в i високе виживання спермив.
Висновки
1. Для св1жоотримано! сперми характерний вмкт фракцш лшопроте!шв (%): хшомшрон - 19,6±3,21, дуже низько! - 11,2±2,36, низько! - 22,9±2,26, високо1 - 21,2±1,77 i дуже високо! щшьност1 - 24,0±2,76.
2. Розрщження еякулят1в призводить до зниження на 8,3 - 10,0 % хшомшрон i пщвищення на 2,0 - 7,7 % дуже низько! та 3,4 - 4,3 % низько! щшьност1 лшопрте!шв.
3. 1нкубування сперми впродовж 4 д1б зм!нюе сп!вв!дношення л!попроте!н!в у 6iK п!двищення вм!сту великого (х!лом!крон) i зниження -малого розм!ру молекул.
4. Виживання cnepMii'B у нерозбавленш cnepMi - 110,5± 5,70 год, вище на 16,9 год (13,3 %) при розрщжеш еякулят1в ЛЖГР i найвище (156,3±14,56 год) при використанш «Оптидилу».
Перспективи подальших дослщжень. Дослщити вмкт лшопроте!шв крюконсервовано! сперми буга!в за використання р1зного складу розрщжувач1в.
Л1тература
1. Наук В. А Структура и функция спермиев сельскохозяйственных животных при криоконсервации /В. А. Наук - Кишенев:-Штиница, 1991.-197с.
2. Сперма буга!в нативна. Техшчш умови: ДСТУ 3535-97.
3. Середовище для розбавлення i заморожування сперми буга!в: Патент Укра!ни № 10894; Публ. 29.12.99, Бюл. №8.-12с.
4. Осташко Ф.И. Биотехнолгия воспроизведения крупного рогатого скота. К: Аграрнанаука, 1995. - 182с.
Summary
Kawa S., Dmytryv O., Ostapiv D., Jaremchuk I. , Kuzmina N.
LIPOPROTEIN CONTENT IN SPERM ON BULL EJACULATE DILUTION WHITH DILUENTS THAT HAVE EGG YOLK
Lipoprotein content in bull ejaculates under dilution by diluents that have egg yolk was studied. It is set that freshly obtained semen characterizes by such lipoprotein fractions (%): chylomicron - 19,6±3,21, very low - 11,2±2,36, low -22,9±2,26, high - 21,2±1,77 i very high - 24,0±2,76 density. Ejaculate dilution lowers chylomicron fraction on 8,3 - 10,0 % and increases on 2,0 - 7,7 % and 3,4 -4,3 % lipoproteins with very low and low density. Sperm incubation within 4 days changes lipoprotein interrelation upward great molecules while small molecules content decrease. At the same time, highest content of chilomicrons is found in ejaculates diluted by "Optidil" (40,6±2,84 %) and less (31,6 - 37,6 %) in lactose-yolk-glycerin diluent and in non diluted semen. Survival of spermatozoa in non diluted semen - 110,5± 5,70 h, under dilution by lactose-yolk-glycerin diluent higher on 16,9 h (13,3 %), and the higher survival (156,3±14,56 год) is under usage of "Optidil".
Key words: lipoprotein, spermatozoa, survival, semen, bull.
Рецензент - д.вет.н., професор Стефаник В.Ю.
119
