CC BY
70
УДК 577.1:547.96+612.017.1:615.375
В. Н. Кокряков, Л. Е. Леонова, М. Н. Берлов, А. Д. Краснодембская, Е. В. Цветкова,
Е. С. Кораблева, А. В. Меньшенин, А. А. Колобов, А. В. Комлев
ДОСТИЖЕНИЯ В ИЗУЧЕНИИ АНТИБИОТИЧЕСКИХ ПЕПТИДОВ НА КАФЕДРЕ БИОХИМИИ САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКОГО ГОСУДАРСТВЕННОГО УНИВЕРСИТЕТА*
Санкт-Петербургский государственный университет, кафедра биохимии биолого-почвенного факультета
Проблема структурно-функционального изучения пептидных антибиотиков животного происхождения своими корнями уходит в последнюю четверть XIX в. в период становления иммунологии как самостоятельной медико-биологической науки. Экспериментально она формировалась в ходе поисков веществ с антибактериальными свойствами, продуцируемых клетками и тканями организма животных, и анализа бактериолитических свойств плазмы крови, проводимого сторонниками концепции гуморального иммунитета. Уже на первых этапах развития этого направления исследований был поставлен вопрос о природе и свойствах антимикробных веществ лейкоцитов, в том числе и локализованных в нейтрофилах [1, 4]. В значительной степени проведение этих работ было стимулировано фагоцитарной теорией иммунитета, выдвинутой в 1883 г. И. И. Мечниковым [12], в исследованиях школы которого была обоснована ключевая роль микрофагов (в современной терминологии — нейтрофилов) и макрофагов в формировании невосприимчивости к инфекционным заболеваниям бактериальной и грибковой этиологии. Им же была сформулирована концепция о цитазах — бактерицидных соединениях лейкоцитарного происхождения, обеспечивающих инактивацию и переваривание фагоцитированных микроорганизмов [13]. Необходимо, однако, отметить, что все указанные работы носили преимущественно феноменологический характер до тех пор, пока Петерсон в 1905 г. не выделил из лейкоцитов гноя человека антимикробные субстанции, которые по заключению автора, представляли смесь щелочных (катионных, основных) протеинов, родственных по ряду свойств прота-минам рыб [33]. Сравнение физико-химических свойств лейкоцитарных антимикробных веществ с протаминами рыб в его работе было не случайным, поскольку к тому времени уже было известно, что осдавные ядерные белки соматических клеток — гистоны, открытые Косселем [27], и отличные от них ядерные белки спермы рейнского лосося — прота-мины, открытые Мишером (1874), обладают в условиях in vitro заметной антимикробной активностью в отношении широкого спектра микроорганизмов.
Работы по изучению антимикробных свойств белков и пептидов из ядер соматических и половых клеток были продолжены только в середине прошлого столетия, в том числе и на кафедре биохимии Ленинградского (ныне Санкт-Петербургского) государственного университета. В нашей стране основоположниками исследований в этой области были
* Работа выполнена при поддержке РФФИ (грант № 06-04-49416) и Федерального агенства по науке и инновациям (грант № 02.512.11.2234)
© В. Н. Кокряков, Л. Е. Леонова, М. Н. Берлов, А. Д. Краснодембская, Е. В. Цветкова и др., 2009
заведующий кафедрой биохимии ЛГУ профессор И. П. Ашмарин и профессор В. Е. Пига-ревский — руководитель одной из лабораторий НИИ экспериментальной медицины АМН СССР (ныне ГУ НИИ Экспериментальной Медицины РАМН) [1, 14]. Творческое содружество этих научных коллективов продолжается уже на протяжении четырех десятков лет.
В первых отечественных работах 60-х годов прошлого столетия по проблеме пептидных антибиотиков основное внимание были уделено гистонам и продуктам их частичной деградации как антимикробным соединениям. Поиски этих катионных белков в лизосомальном аппарате гранулоцитов кролика не дали однозначно трактуемых результатов [2, 6]. В последствии при изучении антимикробных молекул системы врожденного иммунитета севрюги [3] и русского осетра [18] в лейкоцитах крови осетровых рыб были обнаружены антимикробные пептиды, которые оказались продуктами ограниченного протеолиза гистона Н2А. В настоящее время методами иммуноцитохимии продолжается изучение внутриклеточной локализации этих пептидных антибиотиков. В случае доказательства их гранулярной локализации в лейкоцитах можно будет обосновано рассматривать гистоны и продукты их ограниченного протеолиза в качестве антибиотиков животного происхождения.
В 70-е годы на кафедре биохимии ЛГУ (СПбГУ) начались работы по структурнофункциональному изучению антибиотических пептидов негистоновой природы [2, 6], которые были стимулированы обнаружением в 60-х годах американскими исследователями цистеин-содержащих антибиотических пептидов в лейкоцитах морской свинки и кролика с широким спектром антимикробного действия [39]. Только в начале 80-х годов в лаборатории профессора Р. Лерера была определена первичная структура этих пептидов и дано им современное название----дефенсины [23]. На рис. 1 представлены структуры альфа-дефенсинов кро-
лика, человека и обезьяны Масаса тиїаПа. Нами в совместном проекте с лабораторией профессора Лерера (Калифорнийский университет Лос-Анджелеса, США) были описаны первичные структуры нескольких альфа-дефенсинов, выделенных из лейкоцитов другого представителя узконосых обезьян Раріо hamadryas [16]. Более подробно данные пептиды рассмотрены в статье Л. Н. Леоновой настоящего выпуска журнала.
Структурными особенностями альфа-дефенсинов являются катионный заряд их молекул, обусловленный высокой долей основных аминокислот (аргинин, лизин, гистидин) в их составе, и наличие 6 остатков аминокислоты — цистеин, участвующих в образовании трех внутримолекулярных дисульфидных мостиков. Данные связи придают глобулоподобным молекулам пептидов повышенную устойчивость к переваривающему действию многочисленных протеиназ гранулярного аппарата нейтрофилов и очагов
1 2 3 4 56
Н№Р-1 АСїСЖІ Р-АС1АСЕНВ.УСТС1У0Й1ЬДОАРСС
ИМАМ АСїСКІ Р-АСЬА6ЕНКУвТСРУЬвіт*АРСС
PH 0-1 ИЯІСЯСШЄ-КСЬСЬЕУУРЄУСГЬНвКЬАЯКССК
N Р-1 \Л/САСНЯАЬ - СЬ РЯЕРКАЄРСіи Яві*ІНР ЬССІ«*
Рис. 1. Первичные структуры альфа-дефенсинов млекопитающих Инвариантные (консервативные) аминокислотные остатки отмечены жирным шрифтом. Пробелы в аминокислотных последовательностях пептидов введены с целью оптимального сопоставления структур на степень гомологии (сходства). ИКР-1 — дефенсин человека; КМЛЭ-1 — дефенсин обезьяны Масаса тиїаґґа; РНЭ-1 — дефенсин обезьяны Раріо hamadryas; ОТ-1 — дефенсин кролика. А — аланин, С — цистеин, Э — аспарагиновая кислота,
Е — глутаминовая кислота, рЕ — пироглутаминовая кислота, Б — фенилаланин, О — глицин, Н — гистидин,
I — изолейцин, К — лизин, Ь — лейцин, М — метионин, N — аспарагин, Р — пролин, Q — глутамин, Я — аргинин, 8 — серин, Т — треонин, V — валин, W — триптофан, У — тирозин. 1, 2, 3, 4, 5, 6 — порядковый номер
цистеиновых остатков в молекуле.
воспаления и стабилизируют вторичную структуру пептидной молекулы, которая представлена тремя антипараллельными бета-тяжами, образущими бета-складчатый слой. При этом первый цистеин образует S-S связь с последним цистеином (1-6 S-S связь), второй с четвертым (2-4 S-S связь) и третий с пятым (3-5 S-S связь). В дополнение к этому выявлено пространственное разделение в нативной глобуле остатков аминокислот, несущих боковые положительно заряженные и гидрофобные группы, что дает основание характеризовать молекулу как амфипатическую. Подобная амфипатическая (амфифильная) структура дефенсинов делает их активными мембранотропными соединениями, способными не только к взаимодействию с фосфолипидами за счет электростатических свойств своей молекулы, но и внедрению дефенсинов в липидный бислой благодаря гидрофобным взаимодействиям, что в значительной степени способствует проявлению их антимикробных свойств в отношении бактерий, низших грибов, простейших и оболочечных вирусов [28].
В начале 90-х годов были описаны первые представители другого семейства дефенсинов — бета-дефенсинов (рис. 2). На рисунке представлены результаты исследований американских ученых, которые выделили эти пептиды из эпителия трахеи и нейтрофилов крови крупного рогатого скота [21, 34]. Как и альфа-дефенсины представители рассматриваемого семейства дефенсинов являются катионными амфипатическими молекулами, но с отличающимся паттерном расположения цистеинов и их сочетаний в образовании дисульфидных связей (1-5; 2-4; 3-6). В совместном исследовании с американскими коллегами были впервые описаны бета-дефенсины из лейкоцитов кур, получившие в литературе название галлинацинов [24]. В настоящее время в содружестве с немецкими коллегами из университета города Лейпцига (ФРГ) расшифрована первичная структура бета-дефенсина из лейкоцитов крови черепахи Emys orbicularis (см. рис. 2) — представителя класса пресмыкающихся [7, 36].
Авторы неоднократно пытались обнаружить представителей суперсемейства дефенсинов и у беспозвоночных животных. В частности, совместно с сотрудниками кафедры зоологии беспозвоночных СПбГУ (руководитель работ канд. биол. наук доцент Краснодембский Е. Г.) и института Биоорганической химии РАН (руководитель работ канд. хим. наук Овчинникова Т. В.) из тела сцифоидной медузы был выделен антибиотический пептид аурелин AACSDRAHGHICESFKSFCKDSGRNGVKLRANCKKTCGLC. Данный пептид обладает некоторыми структурными признаками дефенсинов и токсинов беспозночных, блокирующих ионные каналы [10, 11, 31]. Интересно, что при исследовании спектра антимикробных пептидов из целомоцитов пескожила Arenicola marina — представителя многощетинковых кольчатых червей (тип Annelida) — де-фенсиноподобные антимикробные пептиды не были обнаружены. Однако были выделены и секвенированы пептиды, а также клонированы их гены, которые кодируют
Названия пептидов Первичные структуры пептидов
BNBD-1 DFASCHTNGGICLPNRCPGHMIQIGICFRPRVKCCRSW
hBD-1 GLGHRSDKYNCVSSGGQCLYSACPIFTKIQGTCYRGKAKCCK
TiD-1 YDLSKNCRLRGGlCYIGKCPRRFFRSGSCSRGNV-CCLRFG
GAL-1 GRKSDCFRKSGFCAFLKCPSLTLISGKCSRFYL-CCKRIW
THP-1 GKREKCLRRNGFCAFLKCPTLSVISGTCSRFOV-CC
Рис. 2. Первичные структуры бета-дефенсинов позвоночных животных Консервативные аминокислотные остатки отмечены жирным шрифтом. TAP — бета-дефенсин из эпителия трахеи коровы; BND-1 — бета-дефенсин из нейтрофилов коровы; hBD-1 — бета-дефенсин человека; TBD-1 — бета-дефенсин черепахи; GAL-1 — бета-дефенсин кур; THP-1 — бета-дефенсин индюка. Обозначения аминокислотных
остатков такие же, как и на рис. 1.
антимикробные пептиды нового структурного семейства — ареницины [8, 9, 30, 32]. Ареницины тоже являются катионными пептидами, но содержит в отличие от дефен-синов и аурелина только одну дисульфидную связь RWCVYAYVRVRGVLVRYRRCW (ареницин 1). По-видимому, в эволюции подобный тип структур антимикробных пептидов был изначальным. В дальнейшем у членистоногих и моллюсков появился тип дефенсинов, доминирующий у других беспозвоночных, у позвоночных же (пресмыкающиеся, птицы) дефенсины представлены семейством бета-дефенсинов [20].
У низших приматов, наряду с альфа- и бета-дефенсинами, в 1999 г. американской группой исследователей были открыты необычные антибиотические пептиды, получившие наименование тета-дефенсинов [37]. Как и представители первых двух семейств дефенси-нов тета-дефенсины содержат три внутримолекулярные дисульфидные связи и являются катионными молекулами. Отличительной же структурной особенностью тета-дефенсинов от других представителей этого суперсемейства является отсутствие у них свободных К- и С-концевых аминокислотных остатков, поскольку их молекула представляет собой замкнутую макроциклическую структуру, образовавшуюся за счет двух пептидных связей между фрагментами двух молекул-предшественниц, за синтез которых ответственны два отдельных гена (см. ст. Л. Е. Леоновой в настоящем выпуске журнала). Совместно с американскими исследователями впервые было установлено наличие для тета-дефенсинов из лейкоцитов обезьяны Macaca mulatta двух дополнительных изоформ [29]. Получены также предварительные данные о присутствии подобных молекул в лейкоцитах узконосой обезьяны другого рода Papio hamadryas [15].
Другой распространенной группой антибиотических пептидов являются кателици-дины. В рассматриваемую группу пептидных соединений входят антимикробные пептиды, различающиеся по первичной структуре активных молекул, но имеющие сходные прочасти их молекул-предшественниц, представляющие собой полипептидные последовательности, гомологичные ингибитору катепсина L (кателину) из лейкоцитов свиньи [38]. К этому структурному семейству пептидов относятся открытые нами протегрины свиньи [25] и бактенецины козы и овцы [35], а также бактенецины (Вас5 и Вас7) нейтрофилов крупного рогатого скота [22], пептид LL-37 лейкоцитов человека [19] и др. (рис. 3). Несмотря на разнообразие первичных структур зрелых кателицидинов, все они являются положительно заряженными молекулами, что обеспечивает тропность рассматриваемых
Ю-1 (С) ОАЬБ ЇНЕАУІіЕиМНЖШЕдаЗЕАІІЬЇіиДіЕЬОО РРКАОЕОКТ РКРУ5 ЕТУКЕ ТТС РНРТВД РРІЬСОРКЕН(ЗК7К0СУКіТУТЬВДІ К ОРІїОІ ТСНЕУОСЇУ
прошеним (С) --———.................................. ...............х...
РИ-39 (С) ---------------------------------------------------------------------------нРБінг--8--1-8-
Ы.-3“7 (Ч) -V К--------І-И-ОИ—П-------О—РЯ-ТМ-Б—О--------------т-О-Я—О---КО-І.—Й-М---М-АЙСЗГ—Б-окомта
Индолицидин (К) ------------О Ь-------------Р---ОМ—Ь—Я---------------ТЮ—Л-0------------------------------К-РБН-ОГ-Ш-Ь-Э-
Вас7 <К> ---------------1—К----------Р---©V—К-АЖ—Т----------------------------------------------Т5Р-О--------Ь------1-БО-ЬГ-ІЛ-Ъ-8-
Вас5 (К) --------------0Р~И-----------РТ-НО-Ь---й----Я-----О™ТЭО—Ь-0------1.---------РЭН-ОР—N--Ь-Б-
Додвхапвптид (К) ------------0-------Р-І---------00---Ов--*--К-----Б-Т-О---©------ІА-К-Е------УИвНГ----НН-8І
ОаВасБ (О) -------------БО—-К-----------РА-ЫОЕУ---К----К-----------ТТф-Е-----Ь---------РБН-^Г—N--Ь-8-
Каталин (С) Е-Я-КО-------ЫР51Н5-5-1-Э-
РЄ-1 «С» префания (С) РК-39 (С) 11.-37 (Ч>
Вас7
Вас5
ОаВасБ (О)
вввяьсхаииисуяпж
аррррыурсря ррррыржю ррррыргвю рррютрсра ррррнєрєрр рррртррєр» грррррпірр ргоррнрр
ЯЯЯРЯРРУЬРЛРЛРРРРРРРЯЬРРЯІРРвРРРЯРРРЯГР
ГкЬІ&>ВТіи(ЗКВКіаКЕРЮІІУОПІКІ>ПМи.УРГІТВЗ
іьрнкнрянртяе
ЯПІИІРРРЛЬРЛРІІРЯРЬРГРЯРбРЯРІРЛРЬРРЯРРвРЯРІРЛРЬРГРЛРвРЯРІРЯР
ярюрінлвртррггррпррінрріррріяррпіввия'р
КІТКОРКАРРОМЛІСАІУУХРУСК
іглгррхішррхкррлгррліррукрріяррпрррвррхсрррбвк
Рис. 3. Первичная структура кателицидинов Курсивом отмечены последовательности зрелых антибиотических пептидов, прямыми буквами — прочасти молекул-предшественников антибиотических пептидов, имеющих высокую степень гомологии с ингибитором катепсина Ь свиньи (кателином). В скобках указано видовое происхождение белков: С — свинья, К — корова, Ч — человек, О — овца. Обозначения аминокислотных остатков такие же, как и на рис. 1.
пептидов к мембранам микроорганизмов и лежит в основе их антимикробного действия. Как правило, кателицидины локализованы в фагоцитах и клетках барьерных эпителиев, что свидетельствует об их участии в иммунных реакциях животных [19, 25, 38].
Протегрины являются антимикробными пептидами в значительной степени определяющими защитную направленность фагоцитарного процесса у свиней [25]. Обладая широким спектром антимикробного действия, они обеспечивают эффективность киллерной стадии процесса фагоцитоза. Интересно, что протегрины структурно не гомологичны дефенсинам, они содержат в своем составе только две дисульфидные связи RGGRLCYCRRRFCVCVGR, но они такие же эффективные антимикробные агенты, как и более крупные молекулы дефенсинов.
Дефенсинами и кателицидинами не исчерпывается перечень структурных семейств антибиотических пептидов у животных. В настоящее время описано более тысячи структур антимикробных пептидов, выделенных из клеток, тканей и жидких сред позвоночных и беспозвоночных животных [4, 5, 20, 28]. Несмотря на структурное разнообразие этой группы физиологически активных молекул, являющихся молекулярной основой врожденного иммунитета животных, для большинства из них, как правило, свойственен катионный заряд и амфипатический характер их молекул, который обеспечивает их эффективную мембранодезорганизующую активность в отношении микробных клеток и оболочечных вирусов [4]. Накопленные к настоящему времени данные о первичных структурах антибиотических пептидов животных, относящихся к разным систематическим группам, позволяют сделать предварительные выводы о закономерностях возникновения и эволюции молекулярных механизмов иммунной защиты. Есть основания считать наиболее распространенной группой антибиотических пептидов суперсемейство дефенсинов, которое включает в себя открытые в теле сцифоидной медузы Aurelia aurita аурелин [31], дефенсины членистоногих и моллюсков [20], а также характерные для позвоночных животных бета- (дефенсин из лейкоцитов крови болотной черепахи [7, 36] и галлинацины [24]) и альфа-дефенсины (дефенсины из лейкоцитов крови обезьяны Papio hamadryas [16]). Особое семейство дефенсинов представляют собой тета-дефенсины, обнаруженные пока только у двух обезьян M. mulatta [29, 37] и P hamadryas [15]. Но, наряду с представителями суперсемейства дефенсинов, практически каждый вид исследованных животных содержит дополнительно целый набор антибиотических пептидов, принадлежащих к другим структурным семействам (цекропины насекомых, кателицидины млекопитающих и др.) и характерных только для конкретного вида животных. Именно их совокупное действие в иммунных реакциях на уровне слизистых барьеров и внешних покровов, а также фагоцитов обеспечивает эффективную защиту животных от микробной и вирусной агрессии, что позволяет рассматривать эти физиологически активные пептиды в качестве эндогенных антибиотиков.
Принципиально важно, что в отличие от конвенциальных антибиотиков микробного происхождения (пенициллин, стрептомицин и др.), рассматриваемые нами пептидные соединения иммунной системы животных, способны осуществлять не только прямое антимикробное действие. В последние 15 лет выявлены новые функции антибиотических пептидов, позволяющие рассматривать их не только как соединения прямого антимикробного действия, но и как обладающие иммуномодулирующими свойствами (дегрануляторы тучных клеток, хемоаттрактанты лейкоцитов, опсонины, адъюванты, стимуляторы продукции провоспалительных цитокинов и т. д.) [5]. Кроме того, они способны взаимодействовать с рецепторами адренокортикотропного гормона на клетках коркового слоя надпочечников [17, 26]. Все это дает возможность рассматривать антибиотические пептиды как молекулы с широким спектром функциональной активности, реализуемым в иммунных и воспали-
тельных процессах. Поэтому работы по изучению структурно-функциональных свойств данной группы физиологически активных пептидных соединений на кафедре биохимии СПбГУ (ЛГУ) вносят вклад не только в фундаментальные медико-биологические исследования, но и обосновывают подходы в создании иммуномодулирующих и антимикробных препаратов нового поколения для медицины и ветеринарии.
Авторы выражают глубокую благодарность старшим научным сотрудникам НИИ экспериментальной медицины РАМН Г. М. Алешиной и О. В. Шамовой, а также старшему научному сотруднику кафедры общей физиологии СПбГУ В. П. Дюбину за участие в проведении совместных научных исследований.
Литература
1. Ашмарин И. П., Ждан-Пушкина С. М., Кокряков В. Н., Самедов А. Ш., Антонова С. А. Антибактериальные и антивирусные функции основных белков клетки и перспективы практического их использования // Изв. АНССР. Сер. биол. 1972. № 4. С. 502-508.
2. Ашмарин И. П., Кокряков В. Н., Пигаревскмй В. Е. Катионные белки лизосом лейкоцитов, деградация и возможности загрязнения гистонами при выделении // Вопр. мед. химии. 1973. Т. 19. Вып. 4. С. 381-386.
3. Зугаирова О. Н., Шамова О. В., Орлов Д. С., Дюбин В. П., Кокряков В. Н. Изучение антимикробных пептидов севрюги (Acipencer stellatus) // Вестн. С.-Петерб. ун-та. Сер. 3. 2007. Вып. 3. С. 89-98.
4. Кокряков В. Н. Биология антибиотиков животного происхождения. СПб., 1999.
5. Кокряков В. Н. Очерки о врожденном иммунитете. СПб., 2006.
6. Кокряков В. Н., Ашмарин И. П., Пигаревский В. Е. О природе некоторых фракций лизосомальных катионных белков лейкоцитов // Биохимия. 1973. Т. 38. Вып. 6. С. 1276-1280.
7. Колобов А. А., Шамова О. В., Кокряков В. Н. Изучение антимикробных пептидов европейской болотной черепахи Emys orbicularis // Вестн. С.-Петерб. ун-та. Сер. 3. 2007. Вып. 3. С. 99-107.
8. Краснодембская А. Д., Алешина Г. М., Кокряков В. Н., Попова В. А., Краснодембский Е. Г. Оценка разнообразия антимикробных пептидов из целомоцитов пескожила Arenicola marina (Annelida, Polychaeta) // Вестн. С.-Петерб. ун-та. Сер. 3. 2004. Вып. 4. С. 93-96.
9. Краснодембская А. Д., Алешина Г. М., Лодыгин П. А., Овчинникова Т. В., Краснодембский Е. Г., Кокряков В. Н. Новые антимикробные пептиды из целомоцитов пескожила Arenicola marina // Вестн. С.-Петерб. ун-та. Сер. 3. 2001. Вып. 4. С. 104-108.
10. Меньшенин А. В., Алешина Г. М., Клушевская Е. С., Леонова Ю. Ф., Овчинникова Т. В., Краснодембский Е. Г., Кокряков В. Н. Новый антимикробный пептид из сцифоидной медузы Aurelia aurita // Вестн. С.-Петерб. ун-та. Сер. 3. 2006. Вып. 4. С. 116-122.
11. Меньшенин А. В., Алешина Г. М., Леонова Е. Е., Овчинникова Т. В., Краснодембский Е. Г., Кокряков В. Н. Дефенсиноподобные пептиды сцифоидной медузы Aurelia aurita // Вестн. С.-Петерб. ун-та. Сер. 3. 2001. Вып. 4. С. 99-103.
12. Мечников И. И. Лекции о сравнительной патологии воспаления. СПб., 1892.
13. Мечников И. И. Невосприимчивость в инфекционных болезнях. СПб., 1903.
14. Пигаревский В. Е. Зернистые лейкоциты и их свойства. М., 1978.
15. Цветкова Е. В. Выделение и изучение физико-химических и функцинальных свойств антимикробных пептидов из лейкоцитов павиана гамадрила: Автореф. дис. ... канд. биол. наук. СПб., 2007. 17 с.
16. Цветкова Е. В., Алешина Г. М., Шамова О. В., Леонова Л. Е., Лерер Р. И., Кокряков
B. Н. а-Дефенсины из лейкоцитов крови обезьяны Papio hamadryas // Биохимия. 2006. Т. 71. Вып. 8.
C. 1083-1090.
17. Шамова О. В., Лесникова М. П., Кокряков В. Н., Шхинек Э. К., Корнева Е. А. Действие де-фенсинов на уровень кортикостерона в крови и иммунный ответ при стрессе // Бюл. экспер. биол. и мед. 1993. Т. 115. № 6. С. 646-649.
18. Шамова О. В., Орлов Д. С., Овчинникова Т. В., Сал Х. Г., Тверьянович И. А., Попова В. А., Орлов С. Б., Дюбин В. П., Кокряков В. Н. Антимикробные пептиды из лейкоцитов русского осетра (Acipenser guldenstadti) // Фундаментальные исследования. 2006. № 1. С. 10-13.
19. Agerberth B., Gunne H., Odeberg J. J., Kogner P., Boman, H. G., Gudmundsson G. H. FALL-39, a putative human peptide antibiotic, is cysteine-free and expressed in bone marrow and testis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. Vol. 92. P. 195-199.
20. BuletPh., StocklinR., MeninL. Antimicrobial peptides: from invertebrates to vertebrates // Immunol. Revs. 2004. Vol. 198. P. 169-184.
21. Diamond G., Zasloff M., Eck H., Brasseur M., Maloy W. L., Bevins C. L. Tracheal antimicrobial peptide. a novel cysteine-rich peptide from mammalian tracheal mucosa: Peptide isolation and cloning of a cDNA // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. Vol. 88. P. 3952-3956.
22. Frank R. W., Gennaro R., Schneider K., Przybylski M., Romeo D. Amino acid sequences of two proline-rich bactenecins. Antimicrobial peptides of bovine neutrophils // J. Biol. Chem. 1990. Vol. 265. P. 18871-18874.
23. Ganz T., SelstedM. E., SzklarekD., Harwig S. S., Daher K., Bainton D. F., Lehrer R. I. Defensins. Natural peptide antibiotics of human neutrophils // J. Clin. Invest. 1985. Vol. 76. P. 1427-1435
24. Harwig S. S. L., SwiderekK. M., Kokryakov V. N., Tan L., Lee T. D., Panyutich E. A., Aleshina G. M., Shamova O. V., Lehrer R. I. Gallinacins: Cystein-rich antimicrobial, peptides of chicken leukocytes // FEBS Lett. 1994. Vol. 342. P. 281-285.
25. Kokryakov V. N., Harwig S. S. L., Panyutich E. A., Shevchenko A. A., Aleshina G. M., Shamova O. V., KornevaH. A., Lehrer R. I. Protegrins: leukocyte antimicrobial peptides combine features of corticostatic defensins snd tachyplesins // FEBS Lett. 1993. Vol. 327. N 2. P. 231-236.
26. KornevaE. A., Kokryakov V. N. Defensins: antimicrobial peptides with a broad spectrum of biological activity // Neuroimmune Biology. 2003. Vol. 3. P. 451-462.
27. KosselA. Ueber einen peptonartigen Bestandtheil des Zellkerns // Z. Physiol. Chem. 1884. Vol. 8. P. 511-515.
28. Lehrer R. I., Ganz T. Defensins of vertebrate animals // Curr. Opin. Immunol. 2002. Vol. 14. P. 96-102.
29. Leonova L. E., Kokryakov V. N, Aleshina G. M., Hong T., Nguyen T., Zhao Ch., Waring A. J., Lehrer R. I. Circular minidefensins and posttranslational generation of molecular diversity // J. Leukocyte Biology. 2001. Vol. 70. P. 461-464.
30. Ovchinnikova T. V., Aleshina G. M., Balandin S. V., Krasnodembskaya A. D., Markelov M. L., Frolova E. I., Leonova Yu. F., Tagaev A. A., Krasnodembsky E. G., Kokryakov V. N. Purification and primary structure of two isoforms of arenicin, a novel antimicrobial peptide from marine polychaeta Arenicola marina // FEBS Lett. 2004. Vol. 577. P 209-214.
31. Ovchinnikova T. V., Balandin S. V., Aleshina G. M., Tagaev A. A., Leonova Y. F., Krasnodembsky E. G., Menshenin A. V., Kokryakov V. N. Aurelin, a novel antimicrobial peptide from jellyfish Aurelia aurita with structural features of defensins and channel-blocking toxins // Biochem. Biophys. Res Commun. 2006. Vol. 348. N 2. P. 514-523.
32. Ovchinnikova T. V., Shenkarev Z. O., Balandin S. V., Nadezhdin K. D., Paramonov A. S., Kokryakov V. N., Arseniev A. S. Molecular insight into mechanism of antimicrobial action of the beta-hairpin peptide arenicin: specific oligomerization in detergent micelles // Biopolymers. 2008. Vol. 89. N 5. P 455-464.
33. Peterson A. Ueber die bacterizeden leukocytens Stoffe und ihre Beziehungen // Immunitat und Bacteriol. Parasitink. 1905. Vol. 139. P. 423-437.
34. SelstedM. E., Tang Y-Q., Morris W. L., McGuire P. A., NovotnyM. J., Smith W., Henschen A. H., Culler J. S. Purification, primary structures, and antibacterial activities of beta-defensins. a new family of antimicrobial peptides from bovine neutrophils // J. Biol. Chem. 1993. Vol. 268. P. 6641-6648.
35. Shamova O. V., Brogden K. A., Zhao C., Nguyen T., Kokryakov V. N., Lehrer R. I. Purification and properties of proline-rich antimicrobial peptides from sheep and goat leukocytes // Infection and Immunity. 1999. Vol. 67. N 8. P. 4106-4111.
36. Stegemann C., Kolobov A., Shamova O., Kokryakov V., Hoffmann R. De novo sequencing of TBD-1, the first beta-defensin isolated from reptiles // J. Proteome Res. in press. 2008.
37. Tang Y-Q., Yuan J., Osapay G., Osapay K., Tran D., Miller C. J., Ouellette A. J., SelstedM. E. A cyclic antimicrobial peptide produced in primate leukocytes by the ligation of two truncated a-defensins // Science. 1999. Vol. 286. P. 498-502.
38. Zanetti M., Gennaro R., Romeo D. Cathelicidins: A novel protein family with a common proregion and a variable C-terminal antimicrobial domain // FEBS Lett. 1995. Vol. 374. P. 1-5.
39. Zeya H. I., Spitznagel J. K. Antibacterial and enzymatic basic protein from leukocyte lysosomes: separation and identification // Science. 1963. Vol. 142. P 1085-1087.
