CC BY
10
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ
К.А. Сычевская, С.К. Кравченко, Б.В. Бидерман, Е.Е. Никулина, А.Е. Мисюрина, Н.В. Рисинская, А.Б. Судариков
НЕСТАБИЛЬНОСТЬ МИКРОСАТЕЛЛИТОВ И МУТАЦИИ ГЕНОВ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ В ДЕБЮТЕ И РЕЦИДИВЕ/ПРОГРЕССИИ ФОЛЛИКУЛЯРНОЙ
ЛИМФОМЫ
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
Введение. Эффективные протоколы лечения пациентов с резистентным течением фолликулярной лимфомы (ФЛ) на настоящий момент не разработаны. Возможность создания новых лекарственных препаратов зависит от прогресса в понимании патогенеза опухоли. Поэтому изучение закономерностей опухолевой эволюции представляется актуальной задачей. Генетические аберрации, определяющие опухолевую резистентность, могут возникать вследствие различных процессов, изменяющих исходную структуру ДНК. Система репарации неспаренных нуклеотидов представляет собой одно из ключевых звеньев генетического гомеостаза. Известно, что дефект этой системы выражается в микросателлитной нестабильности (MSI -microsatellite instability). В-клеточные лимфомы центра фолликула характеризуются высокой вероятностью соматического мутагенеза генов иммуноглобулинов. Возникновение точечных соматических мутаций в области других генов-мишеней может провоцировать опухолевую прогрессию.
Цель. Изучение роли аберраций микросателлитных повторов и мутаций генов иммуноглобулинов у пациентов с резистентным течением ФЛ.
Материалы и методы. В исследование было включено 19 пациентов с ФЛ. Парные биопсии были выполнены у 10 пациентов в дебюте и рецидиве, у 6 пациентов - в дебюте и прогрессии во время химиотерапии, у 3 пациентов - в дебюте и прогрессии после периода наблюдения без лечения. Все пациенты дали добровольное согласие на участие в исследовании. Исследование микросателлитного профиля выполняли с использованием диагностической панели COrDIS Plus (ООО Гордиз, Россия) в материале опухолевой ткани и клетках периферической крови в качестве контрольного образца. Амплификацию, фрагментный анализ и секвенирование по Сэнгеру генов тяжелых цепей иммуноглобулинов (IGH) проводили на автоматическом термо-циклере DNAEngine (BioRad, США) и генетическом анализаторе Нанофор-05 (ООО Синтол, Россия), соответственно.
Результаты. Выявленные изменения микросателлитного профиля были классифицированы следующим образом: EMAST (elevated microsatellite alterations at selected tetranucleotide repeats) - появление нового аллеля тетрануклеотидного локу-са; LOH (loss of heterozygosity) - аллельный дисбаланс. Принято
считать EMAST частным вариантом MSI. В целом, при ФЛ наблюдается тенденция к увеличению числа генетических событий в материале повторных биопсий. В случае LOH различия между группами дебюта и рецидива/прогрессии были статистически значимы в тесте х2 (p<0,05). Зависимости динамики накопления аберраций микросателлитного профиля от морфологического типа ФЛ, варианта клинического течения заболевания (рецидив VS прогрессия +/- терапия) в данной когорте больных прослежено не было. У большинства пациентов отмечалось появление новых локусов LOH и EMAST дополнительно к существующим в дебюте аберрациям. Однако, в 3 случаях локусы LOH в дебюте и рецидиве/прогрессии не совпадали. У 7 пациентов технически оказалось возможным провести секвенирова-ние генов IGH. В 4 случаях нуклеотидные последовательности в парных образцах были идентичны. У 2 пациентов в прогрессии заболевания появились единичные новые точечные мутации, и в одном случае последовательности генов дебюта/рецидива существенно различались по нуклеотидным заменам в 41 позиции. Поскольку вероятность "потери" клоном рецидива целого ряда генетических аберраций, существующих в дебюте заболевания, низка, представляется более вероятным предположить на основании приведенных примеров, что в ряде случаев опухолевая популяция при возврате заболевания может не быть дочерней по отношению к клону дебюта и происходит из стволовой клетки опухоли независимо.
Выводы. Для ФЛ показано увеличение степени нестабильности микросателлитных повторов и появление новых соматических мутаций по мере прогрессирования опухоли. Доказана возможность развития опухолевых клонов дебюта и возврата заболевания из более ранней опухолевой клетки-предшественницы. Поскольку возникновение новых генетических нарушений было отмечено, в том числе, у пациентов, у которых обе биопсии были выполнены до начала терапии, эволюция опухолевого клона может происходить без лекарственного цито-токсического давления. При сопоставлении изменений микро-сателлитного профиля и соматических мутаций генов IGH не отмечено взаимосвязи между процессами появления и накопления локусов MSI и соматического мутагенеза что может быть связано с недостаточным объемом выборки.
С.А. Треглазова, Е.Е. Никулина, Т.В. Макарик, А.О. Абдуллаев, И.Н. Суборцева, А.Л. Меликян, А.Б. Судариков
ДИНАМИКА МУТАЦИИ CALR У РОССИИСКИХ ПАЦИЕНТОВ С PH-НЕГАТИВНЫМИ МИЕЛОПРОЛИФЕРАТИВНЫМИ НОВООБРАЗОВАНИЯМИ НА ТЕРАПИИ
ИНТЕРФЕРОНОМ-АЛЬФА
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
Введение. Мутации 9 экзона в гене CALR наряду с мутациями гена JAK2 и/или MPL являются рутинными диагностическими маркерами при Р^негативных миелопролиферативных новообразованиях (МПН). Хотя молекулярный мониторинг минимальной остаточной болезни не входит в общепринятые протоколы лечения МПН, многочисленные научные исследования мутационной нагрузки JAK2 (V617F) показали, что терапия интерфероном-а (ИФН) часто индуцирует как гематологические, так и молекулярные ремиссии. В то же время, значение
мониторинга мутационной нагрузки CALR до сих пор остается спорным.
Цель. Оценить клиренс клонов с мутациями гена CALR у российских пациентов с Ph - негативными МПН, получавших ИФН.
Материалы и методы. В исследование были включены пациенты, с установленными диагнозами в соответствии с классификацией ВОЗ (2017) и получавшие терапию ИФН в амбулаторном отделении НМИц гематологии с 2015 по 2020 год
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 2, 2021
(п=27), у которых удалось отследить динамику мутационного клона. Среди 27 пациентов с МПН 16 случаев были эссенциаль-ной тромбоцитемией (ЭТ), 10 случаев - с первичным миелофи-брозом (ПМФ), 1 - с неклассифицированным МПН. Все случаи были проверены на наличие мутаций генов JAK2 (V617F), CALR (экзон 9) и MPL (W515L/K) с помощью аллель-специфической ПЦР или фрагментного анализа. Все пациенты были положительными по CALR (тип 1 или тип 2), при этом JAK2 (V617F) и MPL (W515L/K) мутации отсутствовали на момент диагностики. Соотношение женщины: мужчины - 3,7:1 (22:5; 81%: 19%), средний возраст на момент постановки диагноза составлял 34,6 года (диапазон 18-70 лет). Медиана продолжительности лечения ИФН составила 30,5 мес (диапазон 10-68).
Результаты. Все пациенты в нашем исследовании имели более чем 18% - ный уровень мутантного аллеля CALR исходно (18-62%). На момент второй точки мониторинга (Ме 32 месяца (10-68)) у всех пациентов была констатирована кли-нико-гематологическая ремиссия. Для оценки молекулярного ответа при лечении ИФН использовались следующие значения снижения аллельной нагрузки относительно первой точки измерения (соответствует дебюту заболевания): полный молекулярный ответ - пМо (снижение количества клеток с мутацией CALR на 75% и более относительно количества в дебюте), большой молекулярный ответ - БМО (на 50-75%), частичный молекулярный ответ - ЧМО (менее, чем на 50%), минимальный молекулярный ответ - минМО (менее, чем на
25%). У больных с ЭТ так и ПМФ и 1-ым типом мутации CALR хотя бы минимальный молекулярный ответ был получен у 77 и 33% соответственно. При этом у пациентов с ПМФ аллельная нагрузка в начале заболевания была не более 30%. Только 2 пациента ЭТ и мутацией CALR 2-го типа 2 достигли минимального и частичного молекулярного ответа. Оба имели в начале заболевания начальный уровень аллельной нагрузки не более 45%. У пациентов с ПМФ со вторым типом мутации не было достигнуто никакого молекулярного ответа. У пациента с не-классифицируемым МПН после 30 месяцев лечения доля клеток с мутаций CALR 1-го типа выросла с 33% до 43%.
Выводы. Несмотря на полную гематологическую ремиссию, достигнутую всеми пациентами, включенными в исследование, снижение доли клона с мутацией наблюдалось только в случаях с 1-ым типом мутации CALR. У нескольких пациентов (независимо от типа мутации) отмечено возрастание доли мутированных клеток. Можно предположить, что лечение ИФН затрагивает менее дифференцированные клетки с мутациями CALR, и не затрагивает более дифференцированные, что в сумме не приводит к снижению доли клеток, несущих мутацию. Однако, необходимы дальнейшие исследования на большем количестве пациентов, а также с сортированными клеточными популяциями, чтобы подтвердить эту точку зрения и установить необходимость мониторинга мутаций CALR при терапии МПН.
Г.А. Цаур123, А.М. Попов4, Т.Ю. Вержбицкая12, Л. В. Мовчан5, М.В. Белевцев5, О.В. Алейникова45, Т.О. Ригер12, А.С. Демина12, А.М. Кустанович6, О.Р. Аракаев1,2, Л.И. Савельев1,2,3, Ю.В. Ольшанская4, Ю.В. Румянцева4, А.И. Карачунский4, Л.Г. Фечина1,2
ОЦЕНКА МИНИМАЛЬНОЙ ОСТАТОЧНОЙ БОЛЕЗНИ У ДЕТЕЙ С ОСТРЫМ
ЛИМФОБЛАСТНЫМ ЛЕЙКОЗОМ
1Государственное автономное учреждение здравоохранения Свердловской области «Областная детская клиническая больница», г. Екатеринбург
2 Государственное автономное учреждение здравоохранения Свердловской области «Центр специализированных видов
медицинской помощи «Институт медицинских клеточных технологий», г. Екатеринбург 3Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Уральский
Государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Екатеринбург 4Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии имени Дмитрия Рогачева» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
5Государственноеучреждение «Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и
иммунологии», г. Минск, Республика Беларусь 6Институт онкологии Шаретт, Медицинский Центр Хадасса, г. Иерусалим, Израиль
Введение. Минимальная остаточная болезнь (МОБ) - один из краеугольных показателей, определяющих прогноз острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ) у детей.
Цель. Оценить роль мОб у детей с ОЛЛ старше 1 года.
Материалы и методы. МОБ методом многоцветной (4-10) проточной цитометрии (МПЦ) определяли у 581 пациента в возрасте от 1 до 18 лет, включенных в исследование ALL-MB 2008.
Результаты. Среди 581 пациента с ОЛЛ старше 1 года отсутствие клинико-гематологической ремиссии (КГР) (>5% бла-стов по данным цитологического исследования) на 36-й день было выявлено у 17. Из этого числа у 7 пациентов количество бластов по данным МПЦ было <5%. В этой группе было зафиксировано 2 рецидива (29%). В группе, в которой >5% бластов было выявлено обоими методами (n=10) зарегистрировано 5 рецидивов (50%). В группе, в которой по данным цитологии было менее 5% бластов, а по данным МПЦ>5% (n=3) все пациенты рецидивировали (100%). Таким образом, была сформирована группа с отсутствием КГР и/или величиной МОБ >5% (n=20, 3,44%) с величиной БСВ 38,4%, что было достоверно ниже, чем у пациентов, у которых выявлено менее 5% бластов двумя методами (p<0,0001). Большая часть неудач терапии на 36-й день была выявлена у пациентов с наличием BCR-ABL1-подобного ОЛЛ и делециями IKZF1. Далее мы разделили всех пациентов по величине МОБ на следующие подгруппы менее
0,01%, 0,01%-менее 0,1%, 0,1%-менее 1,0%, 1,0%-менее 10,0%, более 10,0%. При сравнении величины МОБ у пациентов разных генетических подгрупп выявлено, что сходные профили МОБ выявлены у пациентов с высокой гиперплоидией (n=80) и транслокацией t(12;21)/ETV6-RUNX1 (n=115). Эти две группы достоверно отличались от пациентов с транслокацией t(9;22)/ BCR-ABL1 (n=15) и перестройками 11q23/KMT2A (MLL) (n=8) (p<0,001 в обоих случаях). На следующем этапе мы провели RoC-анализ для выявления величины МОБ на 36-й день терапии, которая наиболее эффективно разделяет пациентов с разными исходами терапии, и сравнили эту величину с традиционными пороговыми порогами (ПУ) МОБ, кратными 10 (0,01%, 0,1%). Для пациентов с высокой гиперплоидией и транслокацией t(12;21)/ETV6-RUNX1 эти величины совпали и составили 0,03%. В этой объединенной группе низкого цитогенетическо-го (ЦГ) риска доля пациентов с рецидивами у пациентов с МОБ ниже ПУ составила 2,5%, а >ПУ - 20,0%. Это деление было более эффективным, чем традиционные ПУ (0,01%, 0,1%). В группе высокого ЦГ риска, которая была образована при слиянии пациентов с транслокацией t(9;22)/BCR-ABL1 и перестройками 11q23/KMT2A ПУ рассчитанный методом ROC анализа, составил 0,3%. Ни один из 11 пациентов из этой группы с МОБ ниже ПУ не рецидивировал. Доля рецидивов при МОБ >ПУ составила 75,0%. Также как и для пациентов низкого ЦГ риска было более эффективным, чем традиционные уровни ПУ Для группы дру-
