CC BY
11
VВсероссийская научно-практическая конференция с международным участием «ГЕНЕТИКА ОПУХОЛЕЙ КРОВЕТВОРНОЙ СИСТЕМЫ -ОТ ДИАГНОСТИКИ К ТЕРАПИИ»
с помощью проточной цитометрии по С045. В результате трансфекции экзосомами относительное содержание химерного транскрипта в МСК здоровых доноров (п=9) находилось в интервале от 0,01 до 15,88 % с медианой 0,11 %, что соответствует положительному результату при определении МОБ и указывает
Санкт-Петербург 26-27 апреля 2019 г.
на их непосредственное участие в горизонтальном переносе in vitro.
Выводы. Показана возможность горизонтального переноса мРНК гена BCR-ABL (р210) тирозинкиназы в клетки стромального микроокружения in vitro посредством экзосомальной фракции.
И. С. Пискунова, Т. Н. Обухова, Е. Н. Паровичникова, С. М. Куликов, Г. А. Алимова, Л. А. Шишигина, И. А. Лукьянова, В. В. Троицкая, В. Г. Савченко
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
СТРУКТУРА И ЗНАЧЕНИЕ ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИХ ПЕРЕСТРОЕК У ВЗРОСЛЫХ БОЛЬНЫХ PH-НЕГАТИВНЫМ ОСТРЫМ ЛИМФОБЛАСТНЫМ ЛЕЙКОЗОМ
Введение. С внедрением в клиническую практику новых таргетных препаратов перспективы лечения острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ) стремительно меняются. Это связано с прогрессом в понимании биологических основ заболевания и различных звеньев патогенеза, ключевую роль в которых играют хромосомные нарушения. При ряде хромосомных аберраций выявлена прямая корреляция с иммунологическими, морфологическими и клиническими особенности заболевания. Определение цитогенетических факторов прогноза позволяет стратифицировать больных на группы риска и тем самым снизить токсичность лечения. Вместе с тем, прогностическая значимость отдельных хромосомных аберраций нивелируется в зависимости от выбранного протокола лечения.
Цель. Определить частоту, спектр, структурные особенности и прогностическое значение цитогенетических нарушений у взрослых больных Ph-негативным ОЛЛ на терапии по протоколу ОЛЛ-2009.
Материалы и методы. В исследование включено 115 взрослых пациентов с впервые выявленным Ph-негативным ОЛЛ: 58 мужчин и 57 женщин в возрасте от 15 до 61 года (средний возраст — 26,5 лет), которые проходили лечение с июня 2009 г. по сентябрь 2016 г. в ФГБУ «НМИЦ гематологии» МЗ РФ (n=101) и в гематологических отделениях областных клинических больниц (n=14). Всем пациентам проводили терапию по протоколу ОЛЛ-2009 (ClinicalTrials. gov, NCT01193933). В ретроспективный анализ были включены 100 пациентов, в проспекти-вый — 15. Медиана наблюдения составила 24,5 месяца (0,2-94,4 мес.). В ходе исследования
были проанализированы результаты стандартного цитогенетического исследования (СЦИ) и на архивном биологическом материале всем пациентам выполнено FISH-исследование с использованием ДНК зондов для выявления структурных перестроек в локусах генов MLL/t(l1q23), с-MYC/t(8q24), ТР53/делеция 17p13, СйКЫ2А/делеция 9p21, t(1;19)/E2A-PBX1, t(12;21)/ETV6-RUNX1, iAMP21.
Результаты. При СЦИ кариотип определен у 86% больных, из них нормальный кариотип выявлен у 48,5 %, хромосомные аберрации — у 51,5 % (структурные перестройки выявлены у 19,2 %, гиперплоидия у 27,2 %, гипоплоидия у 5,1 %). У 17,2 % установлен комплексный кариотип. Вне зависимости от результатов СЦИ, всем больным проводилось FISH исследование с применением вышеуказанных зондов. Аберрации выявлены у 67% больных: делеция (9) (p21)/CDKN2A у 24,3 %, перестройки гена MLL/ t(11q23) у 7,8 %, делеция 17p13/TP53 у 5,2 %, перестройки гена c-MYC/t(8q24) у 2-х больных (1,7 %), t(1;19)/E2A-PBX1 и iAMP21 у 1 больного (0,8 %), другие нарушения (дополнительные сигналы/отсутствие сигналов от локусов генов) у 26,4 %, t(12;21)/ETV6-RUNX1 не выявлена. Применение метода FISH в дополнение к СЦИ позволяет увеличить частоту выявления аберрантного кариотипа с 51,5 до 67 %. Показана достоверная корреляция делеции 9р21/ CDKN2A с высокой активностью ЛДГ в крови (р = 0,02); перестроек гена MLL/t(11q23) — с лейкоцитозом и высоким содержанием бласт-ных клеток в крови (р = 0,0016), гиперплои-дии — с нормальным количеством лейкоцитов в крови (р = 0,02). Анализ эффективности лечения по протоколу 0ЛЛ-2009 (сроки достижения
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XV, № 2, 2019
ПР, ранняя летальность и резистентность) в группах с различными цитогенетическими нарушениями не продемонстрировал статистически значимых различий. При анализе связи цитогенетических нарушений и их сочетаний с долгосрочными результатами лечения (БРВ (НЯ176,9; р<0,0001) и ВРР (НЯ6,4; р=0,02)) отмечено статистически значимое неблагоприятное влияние перестроек генов MLL/t(11q23) и c-MYC/t(8q24).
Выводы. Неблагоприятными прогностическими факторами в рамках терапевтического воздействия, предусмотренного протоколом 0ЛЛ-2009, являются перестройки генов МЬЬД(1^23) и с-MYC/t(8q24). Делеции генов СЭКЫ2Л/9р21 и ТР53/17р13, численные и комплексные нарушения кариотипа не являются факторами прогноза у взрослых больных РЬ-негативным ОЛЛ при использовании протокола 0ЛЛ-2009.
Л. Б. Полушкина, В. А. Шуваев, М. С. Фоминых, Е. В. Ефремова, Е. В. Мотыко, Ю. С. Руженкова, А. П. Самородова, Н. Б. Павленко, М. П. Бакай, Л. С. Мартыненко, Е. В. Клеина, С. В. Волошин, С. С. Бессмельцев, А. В. Чечеткин, И. С. Мартынкевич
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», г. Санкт-Петербург
СЕКВЕНИРОВАНИЕ НОВОГО ПОКОЛЕНИЯ В КЛИНИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ: МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ДЕФЕКТЫ У ПАЦИЕНТОВ С РАЗЛИЧНЫМ ТЕЧЕНИЕМ МИЕЛОИДНЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ
Введение. Стандартные молекулярно-гене-тические методы не могут дать полного представления об особенностях миелопролифера-тивных новообразований (МПН), а в отдельных случаях даже подтвердить клональный характер заболевания. При несомненной диагностической и прогностической значимости молекулярных маркеров МПН все более актуальным является использование технологий высокопроизводительного секвенирования следующего поколения (NGS) для анализа большого массива генетических локусов.
Цель. Оценить молекулярно-генетический профиль МПН у пациентов с различным течением заболевания.
Материалы и методы. Нами были исследованы образцы ДНК цельной крови 7 пациентов с МПН. Шести больным установлен диагноз первичный миелофиброз (ПМФ), одному — эссенциальная тромбоцитемия (ЭТ). Всем пациентам проводили исследование на наличие отдельных маркеров клональности традиционными методами: драй-верных мутаций (ДМ) в генахJAK2 (аллель-специфичная ПЦР), MPL (ПЦР-ПДРФ), CALR (секвени-рование по Сэнгеру), а также прогностически значимых аберраций генов ASXL1, EZH2, SRSF2 (секвенирование по Сэнгеру). Также была использована NGS панель из 55 генов, ассоциированных с МПН с применением реагентов AmpliSeq на приборах MiSeq/HiSeq 2500 (Illumina Inc.).
Результаты. При исследовании традиционными методами мутация JAK2 обнаруже-
на у 3 пациентов, CALR — у 3, не обнаружено ДМ — у 1. У 4 больных выявлены аберрации гена ASXL1, в одном случае в сочетании с EZH2. Все выявленные мутации были подтверждены результатами NGS.
У пациента № 1 с предварительным диагнозом ЭТ на первом этапе молекулярно-генетиче-ского исследования маркеры клональности не выявлены. По результатам NGS обнаружены мутации в гене IDH1 (Tyr183Cys, COSM6494783) и KIT (Ile924Thr, rs1000138811), что позволило подтвердить клональную природу заболевания. Благоприятное течение ПМФ с префи-бротической стадией отмечено у пациента № 2 с мутацией в гене JAK2 и единственной дополнительной аберрацией, выявленной NGS, в гене TET2 (Gly355Asp, COSM6494926). Трансформация ПМФ в хронический миеломо-ноцитарный лейкоз (ХММЛ) констатирована у пациента № 3 с мутацией 1 типа в гене CALR. Методом NGS обнаружена мутация в гене KRAS (Gly12Ala, COSM522), встречающаяся у пациентов с ХММЛ. У остальных 4 пациентов при проведении первичной молекулярно-гене-тической диагностики выявлено сочетание драйверной мутации с прогностически неблагоприятными аберрациями в генах ASXL1 и EZH2. Прогрессия заболевания отмечена у всех больных даже на фоне проведения таргетной терапии руксолитинибом, 2 пациента (№ 5 и № 7) умерли. По результатам NGS в образце ДНК пациента №4 с нарастанием лейкоцитоза
