CC BY
9
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XV, № 2, 2019
ними сроками начала терапии. Нежелательные явления на фоне терапии ИТК зафиксированы у 11 (18 %) больных. При этом проявления гематологической токсичности 3-4 степени наблюдались лишь у 3 из них. Анализ этой группы пациентов показал, что у 8 обследуемых выявлены сопутствующие заболевания органов пищеварения и эндокринной системы.
Недостаточная эффективность или проявления токсичности 3-4 степени при применении иматиниба потребовали перевода на 2 и 3 линию терапии 15 (25 %) больных. 8 пациентов из них достигли полного цитогенетического и молекулярного ответов.
Выводы. Терапия ИТК первого поколения позволяет достичь полного ответа у большин-
ства больных ХМЛ. В случае неэффективности терапии иматинибом или развития нежелательных явлений на фоне лечения применение ИТК 2 и 3 линии терапии позволяет добиться эффекта более чем у 50% пациентов. Риск развития нежелательных реакций на прием ИТК и их выраженность повышены у пациентов с сопутствующими заболеваниями. В связи с этим, необходимо тщательно подходить к выбору терапии для каждого пациента, проводя необходимое обследование до начала лечения с целью выявления и оценки риска развития коморбидной патологии, а также проводить мониторинг состояния пациентов в процессе проведения таргетной терапии.
А. Н. Парфененкова, А. А. Кремлев, И. М. Бархатов
Научно-исследовательский институт детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, г. Санкт-Петербург
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Первый Санкт-Петербургский Государственный Университет имени академика И. П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Санкт-Петербург
ЭКЗОСОМЫ КАК МЕЖКЛЕТОЧНЫЕ ПЕРЕНОСЧИКИ ХИМЕРНОГО ТРАНСКРИПТА BCR-ABL Р210 И ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ МАРКЕРЫ МИНИМАЛЬНОЙ ОСТАТОЧНОЙ БОЛЕЗНИ У ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОИДНЫМ ЛЕЙКОЗОМ
Введение. Экзосомы — экстраклеточные микровезикулы, размеры которых находятся в интервале от 30 до 150 нм. Они способны выступать в качестве межклеточных переносчиков генетической информации и могут рассматриваться как потенциальный субстрат для оценки минимальной остаточной болезни.
Цель. Оценка потенциального вклада экзо-сом в результаты определения минимальной остаточной болезни посредством горизонтального переноса химерного транскрипта BCR-ABL p210 на мезенхимные стромальные клетки (МСК) костного мозга здоровых доноров в модели in vitro.
Материалы и методы. Выделение экзосом производили методом дифференциального ультрацентрифугирования конденсированной среды культуры клеток хронического мие-лоидного лейкоза линии К-562. Полученные частицы анализировали методом лазерной корелляционной спектроскопии. Для проверки стабильности частиц и способности их взаимодействия с биологическими системами был определен Дзета-потенциал. Эксперимент по переносу химерного транскрипта проводился в 24-луночном планшете. Клетки инкубировали
24 часа при 37°С с 5% CO2. После этого вносили 300 мкл бессывороточной питательной ростовой среды с экзосомами (выделенных с порядка 70 х 106 клеток на лунку) и инкубировали клетки в течение 24 часов при тех же условиях. Кокультивирование К-562 и МСК проводили в 24-луночном планшете с полунепроницаемыми перегородками (диаметр пор — 0,4 мкм) при аналогичных условиях.
Результаты. Наибольшее количество везикул в пробе соответствует размерам экзосом. Результаты исследования 15-ти образцов показали, что распределение среднего размера проб по диаметру находится в диапазоне 51,8^107,0 нм со средним значением 78,96±20,03 нм. Дзета-потенциал соответствует стабильным частицам и в среднем равен -29,3±7,4 мВ. По результатам Real-Time ПЦР содержание химерного транскрипта BCR-ABL в экзосомах колебалось в интервале 44,42-863,79 копий/мл кондиционной среды со значением медианы 154,42 копий. После кокультивирования К-562 и МСК относительный уровень экспрессии транскрипта BCR-ABL в клетках-реципиентах составило от 0,03 до 11,4 %. Контроль проницаемости мембраны для клеток проводили
VВсероссийская научно-практическая конференция с международным участием «ГЕНЕТИКА ОПУХОЛЕЙ КРОВЕТВОРНОЙ СИСТЕМЫ -ОТ ДИАГНОСТИКИ К ТЕРАПИИ»
с помощью проточной цитометрии по С045. В результате трансфекции экзосомами относительное содержание химерного транскрипта в МСК здоровых доноров (п=9) находилось в интервале от 0,01 до 15,88 % с медианой 0,11 %, что соответствует положительному результату при определении МОБ и указывает
Санкт-Петербург 26-27 апреля 2019 г.
на их непосредственное участие в горизонтальном переносе in vitro.
Выводы. Показана возможность горизонтального переноса мРНК гена BCR-ABL (р210) тирозинкиназы в клетки стромального микроокружения in vitro посредством экзосомальной фракции.
И. С. Пискунова, Т. Н. Обухова, Е. Н. Паровичникова, С. М. Куликов, Г. А. Алимова, Л. А. Шишигина, И. А. Лукьянова, В. В. Троицкая, В. Г. Савченко
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
СТРУКТУРА И ЗНАЧЕНИЕ ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИХ ПЕРЕСТРОЕК У ВЗРОСЛЫХ БОЛЬНЫХ PH-НЕГАТИВНЫМ ОСТРЫМ ЛИМФОБЛАСТНЫМ ЛЕЙКОЗОМ
Введение. С внедрением в клиническую практику новых таргетных препаратов перспективы лечения острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ) стремительно меняются. Это связано с прогрессом в понимании биологических основ заболевания и различных звеньев патогенеза, ключевую роль в которых играют хромосомные нарушения. При ряде хромосомных аберраций выявлена прямая корреляция с иммунологическими, морфологическими и клиническими особенности заболевания. Определение цитогенетических факторов прогноза позволяет стратифицировать больных на группы риска и тем самым снизить токсичность лечения. Вместе с тем, прогностическая значимость отдельных хромосомных аберраций нивелируется в зависимости от выбранного протокола лечения.
Цель. Определить частоту, спектр, структурные особенности и прогностическое значение цитогенетических нарушений у взрослых больных Ph-негативным ОЛЛ на терапии по протоколу ОЛЛ-2009.
Материалы и методы. В исследование включено 115 взрослых пациентов с впервые выявленным Ph-негативным ОЛЛ: 58 мужчин и 57 женщин в возрасте от 15 до 61 года (средний возраст — 26,5 лет), которые проходили лечение с июня 2009 г. по сентябрь 2016 г. в ФГБУ «НМИЦ гематологии» МЗ РФ (n=101) и в гематологических отделениях областных клинических больниц (n=14). Всем пациентам проводили терапию по протоколу ОЛЛ-2009 (ClinicalTrials. gov, NCT01193933). В ретроспективный анализ были включены 100 пациентов, в проспекти-вый — 15. Медиана наблюдения составила 24,5 месяца (0,2-94,4 мес.). В ходе исследования
были проанализированы результаты стандартного цитогенетического исследования (СЦИ) и на архивном биологическом материале всем пациентам выполнено FISH-исследование с использованием ДНК зондов для выявления структурных перестроек в локусах генов MLL/t(l1q23), с-MYC/t(8q24), ТР53/делеция 17p13, СйКЫ2А/делеция 9p21, t(1;19)/E2A-PBX1, t(12;21)/ETV6-RUNX1, iAMP21.
Результаты. При СЦИ кариотип определен у 86% больных, из них нормальный кариотип выявлен у 48,5 %, хромосомные аберрации — у 51,5 % (структурные перестройки выявлены у 19,2 %, гиперплоидия у 27,2 %, гипоплоидия у 5,1 %). У 17,2 % установлен комплексный кариотип. Вне зависимости от результатов СЦИ, всем больным проводилось FISH исследование с применением вышеуказанных зондов. Аберрации выявлены у 67% больных: делеция (9) (p21)/CDKN2A у 24,3 %, перестройки гена MLL/ t(11q23) у 7,8 %, делеция 17p13/TP53 у 5,2 %, перестройки гена c-MYC/t(8q24) у 2-х больных (1,7 %), t(1;19)/E2A-PBX1 и iAMP21 у 1 больного (0,8 %), другие нарушения (дополнительные сигналы/отсутствие сигналов от локусов генов) у 26,4 %, t(12;21)/ETV6-RUNX1 не выявлена. Применение метода FISH в дополнение к СЦИ позволяет увеличить частоту выявления аберрантного кариотипа с 51,5 до 67 %. Показана достоверная корреляция делеции 9р21/ CDKN2A с высокой активностью ЛДГ в крови (р = 0,02); перестроек гена MLL/t(11q23) — с лейкоцитозом и высоким содержанием бласт-ных клеток в крови (р = 0,0016), гиперплои-дии — с нормальным количеством лейкоцитов в крови (р = 0,02). Анализ эффективности лечения по протоколу 0ЛЛ-2009 (сроки достижения
