потенциал по сравнению с ККМ, кроме того, их можно использовать аутологично [1,2].
К сожалению, до сих пор нет четкого понимания, какие факторы влияют на качество ПК. Нет и четких протоколов по транспортировке и обработке материала. Даже по поводу максимально допустимого времени от получения ПК до ее обработки нет единого мнения [3]. Так, сообщества NetCord и американская ассоциация банков крови (AABB) вообще не упоминают, в какой период кровь должна быть заморожена. FDA, FACT и US state of NY Dept. of Health устанавливают лимит в 48 часов. Для выработки стандартного протокола, позволяющего получить образцы максимального качества, требуется продолжать исследование этих вопросов.
Мы проанализировали 63 образца пуповинной крови, поступившей в коммерческий банк стволовых клеток «Транс-Технологии» (Санкт-Петербург) за 2021 и 2022 годы. Оценивали объем полученного образца, количество лейкоцитов и ГСК. Изучали наличие связи этих параметров с возрастом матери, полом и весом ребенка, сроком и типом родов (осложненные/неослож-ненные, естественные роды/кесарево сечение), а также времени от момента забора ПК до обработки образца.
Обнаружена сильная корреляция (r=0,802, p <0,001) между объемом полученной ПК и количеством лейкоцитов в 1 мкл банкированного образца и корреляция средней силы (rho=0,54, p <0,001) между объемом образца и количеством ГСК в 1 мкл образца. Не обнаружено связи между количеством лейкоцитов и ГСК в 1 мкл образца, возрастом матери и сроком родов. Также не выявлено статистически значимой связи этих параметров с наличием осложнений при родах, путем родоразреше-ния (ЕР ил КС) и полом ребенка. Корреляция количества лейкоцитов и ГСК с весом ребенка при рождении была статистически значимой, но слабой (rho = 0,291, р =
0.022.и rho = 0,291, р = 0,022, соответственно).
Все проанализированные образцы замораживались в течение 24 часов после забора ПК. В пределах этого временного отрезка корреляции между количеством лейкоцитов и ГСК в 1 мкл банкированного образца и временем, прошедшим от забора ПК до ее обработки не обнаружено (rho = 0,122, р = 0,343).
Литература:
1. Михайлова В.А. Инновации и технологии в биомедицине.
Сборник материалов. 2019. C. 141.
2. Ballen K., Gluckman E., Broxmeyer H.E. Blood. 2013. Vol. 122.
№ 4. P.491.
3. Strobel J., Brenner L., Zimmerman R. Clin. Lab. 2015. Vol. 61.
№ 10. P. 1453.
MUSE — МЕТОД СРОЧНОЙ EX-VIVO МИКРОСКОПИИ
А.М. Калиниченко, Г.М. Денисенко,
А.А. Земеров, А.Л. Файзуллин, П.С. Тимашев
Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова, Москва, Россия
e-mail: kalinichenko_a_m@student.sechenov.ru
Ключевые слова: цифровая патология, имплантация, микроскопия с возбуждением поверхности ультрафиолетом, MUSE, ex vivo микроскопия, трансляционная медицина, биофотоника.
Традиционная гистология основана на физическом секционировании замороженных или фиксированных
формалином и залитых в парафин (FFPE) фрагментов ткани. Поскольку метод FFPE является весьма долгим и трудоемким, есть необходимость в более быстром и простом методе ex-vivo микроскопии. MUSE — метод микроскопии, который работает на принципе возбуждения поверхности ткани ультрафиолетом [1]. Отличительной особенностью метода является то, что он не нуждается в стандартной гистологической подготовке, поскольку УФ проникает на несколько микрометров, а спектр возбуждения флуоресцентного красителя лежит в видимом спектре. Такой подход позволяет получить изображение, сопоставимое по информативности со стандартными методами микроскопии [2].
Благодаря проделанной нами работе, был составлен протокол окраски и подобран набор флуоресцентных красителей (растворы Hoehcst и Нильского красного), которые позволяют в высоком качестве идентифицировать гистологические структуры ткани, не требуют специального оборудования, фиксации и занимают около 5 минут.
Поскольку результаты обладают высокой диагностической и прогностической значимостью, возможности традиционных патоморфологических исследований можно существенно расширить. Данный метод диагностики так же прим. м для оценки имплантируемых конструкций и срочной гистологической диагностики процесса регенерации тканей.
Литература:
1. Fereidouni F. et al. Nature Biomedical Engineering. 2017. № 12
(1). C. 957-966.
2. Qorbani A. et al.Journal of Cutaneous Pathology. 2018. № 7
(45). C. 498-503.
ДИНАМИКА ДЕГРАДАЦИИ РЕЦЕПТОРА ЭФР В МЕЗЕНХИМНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТКАХ ЧЕЛОВЕКА
Р.С. Каменцева1, М.В. Харченко1, Г.В. Габдрахманова2, М.А. Котов2, Е.С. Корнилова1, 3
1 Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия
2 Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия
3 Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург, Россия
e-mail: rkamentseva@yandex.ru
Ключевые слова: рецептор эпидермального фактора роста, эндометриальные мезенхимные стромальные клетки, эндо-цитоз, деградация.
Считается, что пролиферация и дифференцировка мезенхимных стромальных клеток (МСК) находятся под контролем специфических для них сигнальных систем. Мы обнаружили, что МСК различного происхождения (из эндометрия, пульпы зуба, Вартонова студня и др.) экспрессируют рецептор эпидермального фактора роста (рЭФР) на высоком уровне, сравнимом с опухолевыми клетками эпителиального происхождения. При этом функционирование этой сигнальной системы в МСК практически не исследовано.
Рецептор ЭФР относится к семейству тирозин-ки-назных (ТК) рецепторов ErbB и имеет 7 лигандов [1]. Общепризнана его роль в регуляции пролиферации, диф-ференцировки и апоптоза соматических клеток, а также участие в эмбриогенезе. В соответствии с принятой
моделью, после связывания с лигандом рЭФР димеризу-ется, что приводит к активации ТК, необходимой для стимуляции сигнальных каскадов. Активированный димер интернализуется в эндосомы. Здесь пути разных лиганд-рецепторных комплексов разделяются: комплексы с низ-коафинными лигандами, такими как ТФР-а, при закис-лении эндосом диссоциируют, в результате чего рЭФР деактивируется и рециклирует обратно на ПМ, в то время как комплексы с высокоафинными лигандами, например, ЭФР, остаются стабильны вплоть до доставки в ли-зосомы, где они деградируют [2].
Целью данной работы было исследовать динамику эн-доцитоза и деградации рЭФР под действием разных ли-гандов в МСК по сравнению с клетками карциномы линии HeLa. В исследовании использовали МСК, полученные из десквамированного эндометрия человека. Показано, что в отличие от клеток HeLa, более 80% интернализо-ванного рЭФР попадает в эндосомы, не несущие маркер ранних эндосом ЕЕА1, и остаются там в течение долгого времени вне зависимости от лиганда. Также проведен анализ деградации рЭФР с помощью ингибиторов лизо-сомального и протеосомного путей деградации, синтеза белка и ТК активности рЭФР. Если в HeLa деградация рЭФР происходит за 1-2 ч, то в энМСК рецептор деградирует в лизосомах не раньше, чем через 6 часов после добавления ЭФР или ТФР-а. Интересно, что в клетках HeLa уровень рецептора через 6 ч полностью восстанавливается за счёт синтеза белка de novo, тогда как в энМСК остается низким в течение как минимум 5 суток.
Таким образом, регуляция функционирования такой «конвенциональной» сигнальной системы, как система рЭФР, существенно различается в трансформированных соматических клетках и в МСК, используемых в качестве модели нормальных клеток. Возможно, что в МСК лиганд-зависимая деградация рЭФР может быть одним из необходимых этапов для перехода от стадии самообновления к программе дифференцировки. Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда (проект № 22-74-10126).
Литература:
1. Singh B., Carpenter G., Coffey R.J. F1000Research. 2016 V. 5,
P. 2270.
2. Kornilova E.S., Kamentseva R.S., Kharchenko M.V. in Reference
Module in Life Sciences, Elsevier, 2022.
ПОИСК И УСТАНОВЛЕНИЕ ФУНКЦИИ МОРФОГЕНЕТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ ГОЛОВНОГО МОЗГА, СОПРЯЖЕННЫХ С РАЗВИТИЕМ КОГНИТИВНЫХ И ПСИХИЧЕСКИХ РАССТРОЙСТВ
М.Н. Карагяур1, 2, А.Л. Примак1, Е.А. Нейфельд1, Е.В. Семина1, 2, П.С. Климович1, М.Н. Скрябина1, Л.М. Самоходская1, 3, В.С. Попов1, 2, С.С. Джауари1, Д.А. Шелег1, Б.Д. Цыганков1, В.А. Ткачук1, 2
1 Факультет фундаментальной медицины, МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
2 Институт Регенеративной медицины, Медицинский научно-образовательный центр, МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
3 Медицинский научно-образовательный центр, МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
e-mail: m.karagyaur@mail.ru
Ключевые слова: морфогенез, ЦЕС, урокиназный активатор плазминогена, полиморфизм.
Множество генеалогических и генетических исследований свидетельствуют в пользу наследственной природы ряда психических заболеваний. Часть генов, мутации в которых ассоциированы с развитием психических заболеваний и когнитивных нарушений, вовлечены в процессы морфогенеза головного мозга, что подтверждает прямую связь структуры головного мозга, а также процессов его закладки и развития с психическим здоровьем человека. Наоборот, повреждения в этих генах приводят к нарушению формирования структур головного мозга и, как следствие, могут приводить к развитию психических и когнитивных нарушений. Наследственные формы психических и когнитивных нарушений обычно характеризуются ранней манифестацией, быстрым прогрессировани-ем, тяжелым течением и устойчивостью к терапии. В то же время, генетическая природа таких нарушений предполагает, что они могут быть диагностированы еще на доклиническом этапе (пренатальный скрининг, при трудоустройстве на объекты социального значения и на опасные производства, получение разрешение на владение оружием и т. п.), а своевременная психологическая и фармакологическая профилактика предположительно позволят отсрочить или предотвратить манифестацию психического заболевания. Все это подталкивает к необходимости поиска и идентификации этих факторов и их патологических вариантов.
В рамках выполнения данного исследования мы планируем идентифицировать характерные для российской популяции полиморфизмы генов PLAUR, PLAU, PLAT, CDH13, ADIPOQ и др. факторов, участвующих в развитии головного мозга, а также установить их взаимосвязь со временем манифестации и тяжестью течения неврологических и психических заболеваний на примере параноидной шизофрении (непрерывный и эпизодический тип) и эндогенной депрессии. Для идентификации геномных вариантов, ассоциированных с развитием когнитивных нарушений и распространенных в РФ, будет проведено полноэкзомное секвенирование генома пациентов, страдающих параноидной шизофренией и эндогенной депрессии (21 человек). Распространенность идентифицированных геномных вариантов, отличных от референсного генома, в группах лиц, страдающих шизофренией и депрессией, а также среди условно здоровых лиц будет оценена путем дополнительного скрининга. Полученные данные будут использованы в качестве основы для создания клеточных и животных моделей для установления функциональной значимости отдельных геномных вариантов в развитии психических и когнитивных нарушений.
Идентификация таких вариантов и установление механизмов их влияния на формирование мозга в перспективе может быть использовано для разработки подходов к пренатальной диагностике психических и когнитивных расстройств (создание генетических тест-систем), подходов к пренатальной/ постнатальной этиотропной и патогенетической терапии (генная терапия, терапия некодирующими РНК) с целью нормализации процессов морфогенеза мозга и профилактики развития неврологических, когнитивных и психических расстройств. Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда № 22-15-00125.