CC BY
214
ДИНАМИКА БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КРОВИ ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ, ПОЛУЧАВШИХ ЛИПОСИЛ В ПРОЦЕССЕ ВЫРАЩИВАНИЯ
Л.В. Зимовина, Е.Г. Яковлева, О.В. Мерзленко, Г.И. Горшков
Аннотация. Приводятся сведения о том, что липо-сил как добавка к корму (40 и 60 мг/кг) с 5-суточного возраста цыплят по мере их выращивания уменьшал доли альбуминов и р-глобулинов в общем белке, сдерживал наблюдаемое в контроле снижение содержания иммуноглобулинов и активности щелочной фосфатазы сыворотки крови. Эти данные следует учитывать при характеристике гепатопротекторных и ростостимули-рующих свойств липосила.
Ключевые слова: цыплята-бройлеры, общий белок, альбумины, а,Р,у-глобулины, иммуноглобулины (сумма), щелочная фосфатаза, трансаминазы, билирубин, холестерол.
Известно, что современные кроссы сельскохозяйственной птицы характеризуются высокой скоростью роста и продуктивностью. За 35-40 сут живая масса бройлеров увеличивается в 50-60 раз. Для интенсивного роста характерна повышенная восприимчивость к различным стрессорам - нарушению микроклимата, перекорму или недокорму птицы, несбалансированным рационам, высокой плотности посадки, инфекционным и инвазионным заболеваниям, вакцинации и пр. Помимо перечисленных факторов стрессорами могут быть низкого качества корма, содержащие остатки пестицидов, соли тяжелых металлов, продукты перекисного окисления липидов [2]. Особенно опасны микотоксины, существенно снижающие продуктивность сельскохозяйственных животных [3,4].
Мишенью для повреждающего влияния в конечном итоге является печень, функциональные возможности которой небезграничны. Под влиянием токсикантов в печени неизбежно развиваются деструктивные и воспалительные процессы [5], и интенсивно растущий молодняк, без того отличающийся низким уровнем естественной резистентности и иммунологической реактивности [1,6], легко подвергается различным заболеваниям незаразной, инфекционной и инвазионной этиологии.
Для нивелирования отрицательного влияния негативных факторов на организм птиц предлагается вводить в рацион различные БАВ (антиоксиданты, селен, витамины, препараты из морских продуктов и лекарственных растений и т.д.).
Одним из перспективных средств для защиты печени является липосил, полученный в лаборатории С.В.Луценко [7]. Он представляет собой липосомную форму гепатотропного силимарина, выделенного из расторопши пятнистой - Sylibum marianum сем. Сложноцветных, которая издавна применяется в народной медицине и служит источником биофлавоноидов.
Цель настоящего исследования - у цыплят-бройлеров, получавших добавку к корму липосила, определить биохимические показатели крови, по которым можно судить о его гепатозащитных свойствах.
Опыт был проведен на цыплятах-бройлерах кросса Hubbard F-15, содержавшихся в клеточных батареях в условиях физкомплекса БелГСХА. Основной рацион был сбалансирован по всем питательным веществам в соответствии с рекомендациями по кормлению сельскохозяйственных птиц.
Были сформированы 4 группы цыплят, по 35 гол в каждой. Контрольная группа (К) получала только основной рацион (ОР). К ОР первой опытной группы ежедневно с 5-суточного возраста до убоя добавляли липосил в дозе 60 мг/кг корма; во второй группе доза
применяемого липосила составила 40 мг/кг корма, в третьей - столько же, но его применяли дискретно: на 57-е, 12-14-е, 19-21-е и 28-30-е сут выращивания.
На 20-е сут и в конце выращивания (39 сут) для биохимических исследований брали кровь из надреза яремной вены. В полученной сыворотке крови определяли содержание общего белка - рефрактометрическим методом; белковые фракции - нефелометрией; сумму иммуноглобулинов - по реакции с цинка сульфатом (ЦСТ); активность АсТ и АлТ - методом Райтмана-Френкеля; активность щелочной фосфатазы (ЩФ) - по реакции с n-нитрофенилфосфатом натрия; активность гамма-глутамилтранспептидазы (ГГТП) - по реакции с L-y-глутамил-n-нитроанилидом; концентрацию билирубина - по диазореакции; содержание холестерина -методом Илька [8].
Изменения содержания общего белка и его фракций в сыворотке крови представлены в таблице 1.
Как видно из таблицы 1, по результатам исследования в 20- и 39-суточном возрасте среднее содержание общего белка в контрольной и опытных группах не имело достоверных различий. Однако цыплята I опытной группы через 15 суток применения липосила имели более высокие показатели по белку, чем контрольные (на 6,9, р>0,05). К 39-суточному возрасту это различие сглаживалось. Надо отметить, что за период выращивания содержание общего белка в сыворотке крови во всех группах возрастало. Это свидетельствует об интенсивном, возможно предельном, протеосинтезе, и только дискретно применяемая доза липосила могла еще больше его стимулировать: концентрация общего белка повышалась к концу выращивания у цыплят III опытной группы на 27,6% (р<0,05) против 9,7% в контроле.
Относительное содержание альбуминов как на 20-е, так и на 39-е сут выращивания по сравнению с физиологической нормой (33,2% по А.А. Кудрявцеву, 1974) было повышено у цыплят всех групп, что можно объяснить использованием высокопротеиновых кормов и активным протеосинтезом в печени. В 20-суточном возрасте уровень альбуминов имел некоторые различия по группам, но они не подтверждались статистически из-за больших индивидуальных колебаний. В то же время к концу выращивания альбуминов в сыворотке крови опытных цыплят было меньше, чем в контроле на 14,9 (р<0,001), 6,1 (р<0,05) и 11,7% (р<0,05) соответственно. Учитывая преобладание по живой массе цыплят опытных групп над контролем, снижение доли альбуминов в белке можно объяснить более интенсивным расходованием этой фракции на прирост массы тела.
Относительная доля а-глобулинов в белке у 20-суточных цыплят существенно не различалась между группами и была ниже физиологической нормы (18,5% по А.А. Кудрявцеву, 1974). К 39-м сут выращивания доля этих белков повысилась в опытных группах на 61,2 (р<0,002), 25,5 (р>0,05) и 44,7% (р<0,01) соответственно, приближаясь к нормальным значениям, при этом в контроле она практически не изменилась. Сниженное относительное содержание а-глобулинов в белке сыворотки крови у всех животных в 20-суточном возрасте и в 39-суточном возрасте только в контроле может быть следствием падения концентрации а1-глобулинов. Как известно, фракция ai-глобулинов представлена на 90% а1-антитрипсином, который является ингибитором трипсина, эластазы лейкоцитов, ка-тепсинов и других протеаз. При его недостатке могут развиваться ранние формы поражения печени, включая
холестаз и цирроз [9,10]. Протеолитические ферменты лейкоцитов и патогенных микроорганизмов при воспалении активно воздействуют на ткани, защита которых при низком содержании а1-антитрипсина ослабляется [11]. Липосил, обладая гепатозащитным действием, способствовал приближению доли а-глобулинов в общем белке к физиологической границе. Можно полагать, что достаточное количество а1-антитрипсина блокировало действие протеаз на фоне патологических процессов, неизбежно возникающих в организме птиц.
Относительное содержание Р-глобулинов в белке сыворотки крови 20-суточных цыплят I группы было несколько ниже, чем в контроле (на 13,5%), а во II и III группах - выше на 4,5 и 17,1% (во всех случаях р>0,05). В последующем уровень р-глобулинов по сравнению с 20-суточным возрастом снижался как в контроле, так и в опыте - на 24,3 (р<0,01), 26,0 (р<0,05), 33,6 (р<0,05) и 40,0% (р=0,05) соответственно группам. Следовательно, снижение доли р-фракции в опытных группах было больше, чем в контроле.
Как известно, в состав фракции р-глобулинов входят трансферрин, гемопексин, компоненты комплемента, иммуноглобулины. Снижение доли р-глобулинов относится к положительным изменениям в биохимии крови и может отражать их расходование на обезвреживание токсинов, транспорт железа, фосфолипидов, холестерина [11,12].
Уровень у-глобулинов в 20-суточном возрасте цыплят I и III опытных групп существенно не отличался от контроля; у цыплят II опытной группы он превышал контроль на 52,9%, но при низкой статистической достоверности (р>0,05) из-за больших индивидуальных различий как в опытной, так и в контрольной группах. К 39 сут выращивания относительное содержание у-фракции в белке возросло во всех группах на 30,4 (р>0,05), 75,0 (р<0,01), 7,7 (р>0,05) и 94,5% (р<0,01) соответственно.
Таблица 1 - Содержание общего белка и его фракций в сыворотке крови цыплят-бройлеров
Общий белок, г/л Альбумины, % Альфа-глобулины, % Бета-глобулины, % Гамма-глобулины, % Сумма иммуногло-булинов,ед. ЦСТ
20 сут
К 36,1±1,0 66,3±4,21 12,4±1,94 11,1±0,52 10,2±1,75 2,7±0,20
1 38,6±2,4 68,3±0,25 12,1±0,43 9,6±0,95 10,0±0,82 2,0±0,18
2 35,3±1,8 61,8±2,86 11,0±2,04 11,6±0,73 15,6±1,98 2,6±0,27
3 34,1±1,1 66,5±2,86 11,4±0,72 13,0±1,75 9,1±1,94 2,1±0,14
39 сут
К 39,6±1,3 65,7±0,22 12,6±0,57 8,4±0,29 13,3±0,51 1,2±0,03
1 40,4±1,2 55,9±0,71 19,5±0,93 7,1±0,65 17,5±1,25 1,6±0,12
2 38,6±0,3 61,7±0,87 13,8±1,14 7,7±0,58 16,8±1,09 1,7±0,16
3 43,5±2,3 58,0±1,24 16,5±0,84 7,8±0,61 17,7±1,13 2,3±0,19
Таблица 2 - Изменения содержания билирубина, холестерина и активности ферментов в сыворотке крови
цыплят-бройлеров
АсТ, мкмоль/л АлТ, мкмоль/л ГГТП, мкмоль/л Щелочная фосфа-таза, нмоль/л Билирубин, мкмоль/л Холестерол, ммоль/л
20 сут
К 0,603±0,020 0,025±0,011 410,3±37,4 18906,5±30,5 6,3±0,4 1,81±0,01
1 0,721±0,030 0,016±0,0005 675,1±36,7 18852,6±49,6 7,2±0,6 2,40±0,04
2 0,718±0,040 0,012±0,0005 301,2±42,3 18882,3±71,8 5,3±0,4 1,81±0,03
3 0,622±0,020 0,057±0,009 292,1±11,7 18830,5±106,3 4,7±0,3 2,57±0,16
39 сут
К 0,693±0,030 0,019±0,003 602,4±48,6 5581,0±247,0 8,0±0,3 2,07±0,06
1 0,649±0,040 0,015±0,002 557,0±45,1 7847,4±463,5 7,9±0,4 2,60±0,09
2 0,718±0,030 0,010±0,006 689,3±38,0 6944,4±534,3 8,1±0,5 2,50±0,07
3 0,667±0,020 0,010±0,001 649,1±9,7 5469,7±92,7 8,0±0,2 2,90±0,07
В I и II опытных группах на 39-е сут значение активности АлТ уступало контролю на 21,1 (р>0,05) и 47,4%
В целом доля у-глобулинов в общем белке у контрольных и опытных цыплят за период исследования была ниже физиологической нормы (36,3% по А.А. Кудрявцеву, 1974), что можно связать со стимуляцией белоксинтезирующей функции печени и повышением в сыворотке крови альбуминов. Следует также учитывать критический иммунологический период, который приходится на начало третьей недели развития и продолжается до 4-недельного возраста [13]. Липосил несколько сдерживал падение уровня у-глобулинов.
Содержание иммуноглобулинов у 20-суточных цыплят опытных групп было ниже контроля на 25,9 (р<0,05), 3,7 (р>0,05) и 22,2% (р<0,05), а в 39-суточном возрасте, наоборот, выше на 33,3; 41,7 (р<0,05) и 91,7% (р<0,01) соответственно. С возрастом регистрировалось снижение уровня этих метаболитов в I и II опытных группах (на 20,0% при р>0,05 и 34,6% при р<0,05) и особенно в контрольной (на 55,6% при р<0,01), в то время как у цыплят III опытной группы количество иммуноглобулинов возросло на 9,5% (р>0,05).
Под влиянием липосила изменялась активность ферментов сыворотки крови (таблица 2). В 20-суточном возрасте активность АсТ у цыплят опытных групп превышала контроль на 19,6 (р<0,02), 19,1 (р<0,05) и 3,1% (р>0,05) соответственно. За 19 сут последующего выращивания она увеличилась в контроле на 14,9% (р<0,05) и мало изменялась в опытных группах.
Активность АлТ на 20-е сут выращивания у цыплят I и II опытных групп была ниже контроля на 36,0 и 52,0%, но разница не подтверждалась статистически (р>0,05). У цыплят III опытной группы этот показатель в 20-суточном возрасте был повышен в сравнении с контролем (в 2,3 раза, р=0,05), а в дальнейшем за 19 сут снижался на 82,5% (р<0,01), и был ниже контроля на 47,4% (р=0,05).
(р>0,05) соответственно. За период с 20-х по 39-е сут уровень АлТ снизился на 24,0; 6,3 и 16,7 % при р>0,05 и на 82,5% при р<0,01 соответственно группам.
По уровню активности ГГТП у 20-суточных цыплят (через 15 сут применения липосила) наблюдалась пестрая картина: в I группе было превышение контроля на 64,5% (р<0,01); цыплята II и III групп уступали контролю на 26,6 (р>0,05) и 28,8% (р<0,02) соответственно. К 39-м сут выращивания активность этого фермента по сравнению с предыдущим периодом повышалась в контрольной, II и III группах соответственно на 46,8, р<0,05; 128,9 и 122,2%, р<0,001, тогда как в I группе она имела тенденцию к снижению (на 17,5%, р>0,05); по сравнению с контролем в I группе она снизилась на 7,5% (р>0,05), тогда как во II и III группах немного превышала его (на 14,4 и 7,8%, р>0,05).
Активность щелочной фосфатазы в 20-суточном возрасте не имела достоверных различий между контрольной и опытными группами. К 39-м сут выращивания у цыплят I и II группы этот показатель был несколько выше контроля (на 40,6%, р<0,01, и 24,4%, р>0,05). У цыплят III группы существенное различие с контролем не регистрировалось. С возрастом активность щелочной фосфатазы достоверно снижалась во всех группах, включая и контроль (на 70,5; 58,4; 63,2 и 71,0% соответственно при р<0,001).
Таким образом, активность АсТ у цыплят I опытной группы под воздействием липосила с возрастом снижалась, в то время как в контроле она существенно повышалась. Активность АлТ у животных I и II опытных групп была ниже контроля как в 20-, так и 39-суточном возрасте, хотя это различие статистически не подтверждалось. В течение всего периода исследований значение этого показателя падало во всех группах, кроме III, где сначала активность фермента повышалась (за 15 сут применения липосила), а затем к 39 сут снижалась до минимума, наблюдаемого в опыте. Активность ГГТП с возрастом увеличивалась в контроле, II и III опытных группах, в то время как в I группе она снижалась. Активность щелочной фосфатазы от 20-суточного возраста к 39-суточному уменьшалась как в контроле, так и в опытных группах (р<0,001) без существенных различий между ними.
Известны различия между изученными ферментами: АсТ - митохондриальный фермент, присутствующий преимущественно в клетках сердца, печени, скелетной мускулатуры, почек; АлТ - цитоплазматический фермент, содержащийся главным образом в печени; ГГТП обнаруживается в печени, поджелудочной железе, почках. Активность этих ферментов в сыворотке повышается при разрушении тканей и высвобождении их из поврежденных клеток [9,10,12]. Учитывая выраженное снижение активности АлТ во всех опытных группах и снижение активности ГГТП и АсТ в I опытной группе, можно отметить защитное действие липо-сила на клетки тканей, содержащих эти ферменты.
Щелочная фосфатаза - фермент, катализирующий гидролитическое расщепление монофосфорных эфи-ров, участвует непосредственно в обмене фосфора. Ее активность в сыворотке крови коррелирует со скоростью роста цыплят [14]. Снижение активности фермента в I и II опытных группах совпадает с изменением интенсивности роста цыплят этих групп.
Концентрация билирубина в сыворотке крови цыплят-бройлеров опытных групп была выше физиологической нормы (1,8 мкмоль/л - в 15-суточном и 2,7 мкмоль/л - в 30-суточном возрасте). Тем не менее, под действием липосила, животные II и III опытных групп в 20-суточном возрасте имели более низкий уровень билирубина по сравнению с контролем (на 15,9%, р>0,05, и 25,4%, р<0,05 соответственно). Первая опытная группа превышала контроль по этому показателю на
14,3 (р>0,05). К 39-м сут выращивания по сравнению с 20 сут концентрация билирубина имела тенденцию к повышению и была существенно выше в контроле - на 27,0, в опытных группах - на 9,7 (р>0,05), 52,8 (р<0,01) и 70,2% (р<0,001) соответственно.
Увеличение содержания билирубина в сыворотке крови может быть вызвано поражением паренхимы печени [10,12]. У цыплят-бройлеров I опытной группы уровень билирубина увеличивался в меньшей степени, чем в контроле и других опытных группах, у цыплят II и III опытных групп рост концентрации билирубина сдерживался на третьей неделе откорма, что может быть расценено как результат гепатозащитного действия липосила.
Содержание холестерола в сыворотке крови 20-суточных цыплят всех групп было ниже физиологической нормы, которая составляет 3,7 ммоль/л. Однако в I и III опытных группах оно было выше контроля на 32,6 и 42,0% соответственно (р<0,001), а у цыплят II группы мало отличалось от него. К 36 сут выращивания уровень холестерола приближался к физиологической норме, но превышал контроль на 25,6; 20,8 (р<0,05) и 40,1% (р<0,001). С возрастом содержание холестерола возрастало во всех группах - соответственно на 14,4 (р<0,05), 8,3 (р>0,05), 38,1 (р<0,05) и 12,8% (р>0,05).
Холестерол в организме птиц представлен главным образом эфирносвязанной фракцией, которая синтезируется в печени. Поэтому более высокий уровень холестерола чем в контроле у цыплят опытных групп (в особенности I и III) достигается, видимо, за счет активизации липосилом синтетической функции печени. Вероятность такого предположения можно обосновать тем, что во всех случаях уровень холестерола не достигал даже физиологического значения, превышение которого трактуется как патология.
Выводы
Липосил, добавляемый к корму с 5-суточного возраста до конца выращивания, мало влиял на уровень общего белка в сыворотке крови цыплят.
Фракция альбуминов в общем белке к концу выращивания снижалась в пределах физиологических границ от доз 60 мг/кг корма и 40 мг/кг, принимаемых дискретно, что согласуется с изменением интенсивности роста цыплят.
В период с 20- до 39-суточного возраста у интакт-ных цыплят отмечалось уменьшение доли ß-глобули-нов в общем белке. Липосил усиливал эту тенденцию и несколько сдерживал снижение активности щелочной фосфатазы.
Липосил в дозах 60 и 40 мг/кг корма также препятствовал снижению содержания иммуноглобулинов, наблюдаемому в контроле, и способствовал некоторому увеличению их от доз 40 мг/кг, принимаемых дискретно.
Список использованных источников
1 Венгеренко Л.А. Ветеринарно-санитарное обеспечение эпизоотического благополучия в птицехозяйствах Российской Федерации // Ветеринария. - 2009. - №7. - С.3-6.
2 Кавтарашвили А., Колокольникова Т. Проблемы стресса и пути их решения // Животноводство России. - 2010.
- №5. - С.17-20.
3 Бессарабов Б., Мельникова И., Садчиков С. Влияние микотоксинов на продуктивность птицы//Животноводство России. - 2009. - №8. - С. 23-24.
4 Панина О. Потери от микотоксинов можно посчитать // Животноводство России. - 2010. - №12. - С. 9-10.
5 Абрамова Т., Данилевская Н. Состояние печени у цыплят, откармливаемых на мясо//Ветеринария. - 2006. - № 3.
- С. 29-31.
6 Митюшников В.М. Естественная резистентность сельскохозяйственной птицы. - М.: Россельхозиздат, 1985. - 160 с.
7 Луценко С.В., Фельдман Н.Б., Луценко Е.В., Быков В.А. Растительные флаволигнаны. Биологическая активность и терапевтический потенциал. - М., 2006. - 236с.
8 Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: справочник / под ред. И.П.Кондрахина. - М.: КолосС, 2004. - 520 с.
9 Хендерсон Джозеф М. Патофизиология органов пищеварения. Пер. с англ.- М.-СПб.: Бином-Невский Диалект, 1997.287 с.
10 Шерлок Ш., Дули Дж. Заболевания печени и желчных путей: практич. руководство; пер. с англ. - М.:Гэотар Медицина, 1999. - 864 с.
11 Холод В.М. Белки сыворотки крови в клинической и экспериментальной ветеринарии. - Минск: Ураджай, 1983. -78 с.
12 Назаренко Г.И., Кишкун А.А. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. - М.: Медицина, 2006. - 544 с.
13 Болотников И.А., Конопатов Ю.В. Физиолого-биохимические основы иммунитета сельскохозяйственной птицы - М.: Наука, 1987. - 164 с.
14 Зимовина Л.В. Влияние липосила на интенсивность роста цыплят-бройлеров//Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения: мат-лы XIII науч.-произв. конф. - Белгород: Изд-во БелГСХА, 2009. - С.120.
Информация об авторах
Зимовина Лилия Валерьевна, аспирант ФГБОУ ВПО «Белгородская ГСХА», е-mail: [email protected], тел. 8-910320-47-20.
Яковлева Елена Григорьевна, доктор ветеринарных наук, профессор кафедры морфологии и физиологии ФГБОУ ВПО «Белгородская ГСХА», тел.: 8(4722)-39-24-60, 8-910-368-94-52, е-mail: [email protected]
Мерзленко Ольга Валерьевна, доктор ветеринарных наук, профессор, технический директор ЗАО «Евроветагро», моб. 8-926-246-10-37.
Горшков Григорий Иванович, доктор биологических наук, профессор, заведующий кафедрой морфологии и физиологии ФГБОУ ВПО «Белгородская ГСХА», тел.: 8-915-564-77-02.
