CC BY
24
УДК: 619: 616.98:578.831:636.596
Кононенко 1.О.1, Пархоменко Л.1.2©
1 «Бю-Тест-Лабораторгя», м. Кит 2Лугансъкий нацюнальний аграрнийушверситет
ДЕТЕКЦ1Я В1РУСУ НЬЮКАСЛСЬКО! ХВОРОБИ У ПАПУГ
Детекщя парам1ксов1русу в патолог1чному матер1ал1 в/д папуг гз використанням курячых ембр1отв та пол1меразногланцюговогреакцИ', показала наявтстъ типовых для розмноження в1русу патолог1чних змт / наявтстъ генетичного матер1алу в1русу нъюкаслсъкогхвороби.
Ключое1 слова: парам1ксов1рус, папуги, ембрюни курей, пол1меразна ланцюгоеареакщя.
Вступ. Еколопчною та епщемюлопчною проблемою е циркулящя етзоотичних штам1в парам1ксов1рус1в серед декоративно! птищ. Це обумовлено завозом птищ з-за кордону та вщсутшстю контролю И на в1русоносшство[2]. Така птнця може бутн джерелом особливо небезпечних хвороб, таких як ньюкаслсько! хвороби (НХ), парамксов1рус1в (ПМВ) р1зних серотишв, грипу, синдрому снижения несучост1 (СЗН), шфекцшного енцефалом1ел1ту та анеми, хламщюзу, шфекцшного бронх1ту та шших. Таким чином, з 8000 оиисаних вид1в птищ НХ виявлена у 236 декоративних вид1в птах1в (2,5%). Високий р1вень чутливост1 виявлено у папуг, голуб1в та страуЫв [8]. Вщ ¿мпортних декоративних птах1в, голуб1в, яю знаходяться на карантиш, ¿золювали збудниюв ньюкаслсько! хвороби, грипу та шше [3].
Ешзоотичне значения для популяцп голуб1в та папуг ¿з уЫх серовар1ант1в в1русу мають парам1ксов1руси 1, 2, 3 та 5 - го серотишв [1].
У папуг при шф1куванш парам1ксов1русом 1-го серотипу частше виникае нервова форма захворювання у вигляд1 судом, порушення координацп рух1в. За гостро! форми переб1гу захворювання загибель настае за 3 доби, перед загибеллю розвиваеться атакая, що супроводжуеться скручуванням ши!, парал1чем крил та юнщвок, судомами. При патологоанатом1чному розтиш рееструють набряк легень, головного мозку, серозний перикардит [10].
Парам1ксов1рус 3-го серотипу був видшений вщ папуг ¿з ознаками ураження центрально! нервово! системи, гострим панкреатитом. Смертшсть при шф1куванш цим серотипом в1русу становить близько 100% [6].
АРМУ-5 серолопчно та антигенно в1др1зняеться вщ шших вщомих серотипу парам1ксов1русу, який викликае захворювання у папуг, що характеризуемся пригшченням, задухою, проносом, отстотонусом. Експериментальна шфекщя, викликана парам1ксов1русом 1-го серотипу не викликала захворювання у молодих та дорослих курей та голуб1в, тод1 як спричиняла 100% загибель папуг [5].
© КононенкоЮ., Пархоменко Л.1., 2013
145
Парам1ксов1рус 1-го та 2-го серотишвкультивуються в аланто1Сншпорожниш 9-ти добовихкурячих ембрюшв (КЕ) за температури 370С, та викликае !хзагибельчерез 3 - 4 доби [4, 9].
1ндикащя парам1ксов1рус1в серед декоративно! птищ за допомогою в1русолопчного мошторингу, а також вивчення бюлопчних властивостей ¿золят1в в1руЫв, що належать до р1зних серолопчних груп е необхщним у виршенш питания ешзоотично! стабшьност1 у аматорському птах1вництв1.
Мета роботи иолягала в ¿ндикаци парамшсов1русу в патолопчному матер1ал1 вщ иаиуг ¿з ириватних господарств Лугансько! область
Матер1али 1 методи.У робот1використовувалиматер1ал, отриманийвщхворихта загиблих папугр1зного в1ку з аматорськихгосиодарств Лугансько! области
Видтення в1русу. 3 метою ¿золяци в1русу НХ ¿з патолопчного матер1алу готували суспенз1ю на стерильному ф1зюлопчному розчиш (рН7,2 - 7,4) з додаванням антибютиюв (100 од/млбензилпенщилшу натр1ево! сол1, 150 од/мл стрептомщину сульфату) та використовували для культивування у КЕ.
1нф1кували 9-добов1 КЕ, як1 отримували вщ благополучного щодо шфекцшних захворювань стада птищ, не вакцинованого проти НХ. Було проведено 3 послщовш пасаж1згщно ДСТУ25587-83
«Методилабораторно!д1агностикихвороби Ньюкасл а»[ 11], уоб'емЮ,2 мл. Ввдбраний матер1ал збер1гали в морозильнш шаф1 за температури м1нус 200С.
1золяцш сумарних нукле!нових кислот проводили за допомогою набор1в для екстракци РНК «Рибосорб» виробництва ф1рми АплЮенс, Москва. Зворотню транскрипцш проводили за допомогою набору «Реверса Л» виробництва ф1рми АплЮенс, Москва, Росшська Федеращя.
Реакцш ампл!ф1каци проводили у два етапи за допомогою базових набор1в виробництва ф1рми АплЮенс та системи праймер!вКОУГш_Е/Я.
Електрофоретичний анал1з проведений за допомогою набору для електрофорезу виробництва ф1рми АплЮенс, Москва, Росшська Федеращя. Концентращя агарози в гел1 1 %, напруга 120 В [12].
Результати дослщжень. При проведенш патологоанатом1чного розтину трутв папуг р1зного в1ку, у яких за життя спостер1гали порушення координацп рух1в, тремор м'яз1в, викручування ши!, вщсутшсть апетиту, д1арея, були виявлеш змши, характерш для НХ. Патолопчш змши у папуг характеризувалися виснаженням, геморапчним запаленням кишковика, наявшстю урем1чних солей у сечоводах, крововиливами пщ черепною коробкою та запаленням мозкових оболонок (рис.1).
146
Рис. 1. ПатолоНчш змши у хвилястих папуг: а - ураження головного мозку; б - характеры! крововиливи у кишечнику у синьо - жовтих Ар (Агаагаипа): в -загибл1 папугп; г-крововиливи у головному мозку.
Сшввщношення патолопчних ознак залежно вщ вжу папуг наведен! у таблиц! 1.
У 100 % випадюв реестрували г!перем!ю оболонок головного мозку, 12 -пало! кишки. У дорослих папуг виявляли гемораг!чне запалення у товстому в!дд!л! кишковика на р!вш 100 %, тод! як у пташенят хвилястих папуг ця ознака була виявлена у 50 % дослщжених. Наявн!сть урем!чних солей у сечоводах була найвищою у пташенят (100 %), на вщмшу вщ дорослих папуг (0 - 5 %).
147
1нф1кування КЕ патолопчним матер1алом вщ папуг не викликало загибел1, але деяю патолопчш змши в КЕ е характерними для репродукци
в1русу ньюкаслсько! хвороби.
Таблиця 1
_Результати патологанатом1чного розтину папуг, п = 5_
Патолопчш змши Пташенята Доросл1 папуги
хвилястих
папуг, В1к, доба
15 28 хвилясп корели розели
Гшерем1я оболонок та розм'якшення - 100 100 100 100
головного мозку
Гшерем1я залозистого шлунку - 100 80 20 20
Геморапчне запалення у 12-палш кишщ - 100 100 100 100
Геморапчне запалення у товстому ввддш 50 50 100 100 100
кишковика
Наявшсть урапв у сечоводах 100 100 - 5 5
Виснаження трушв папуг 50 100 70 50 20
Примтка : « - » е1дсуттстъ ознаки
Анал1з патолопчних змш в шфжованих КЕ у 3-х пасажах вказуе на р1зний вщсоток 1х та штенсившсть прояву (таблиця 2).
Найбшьш стабшьною ознакою впродовж 3-х пасаж1в був застш кров1 в судинах хорюналантоюно! оболонки (ХАО), вщставання ембрюшв у розвитку, збшьшення печшки та нирок.
1з збшьшенням пасаж1в у КЕ вщм1чали появу крововилив1в на голов1 (100 %), тш зародка (80 %) та потилищ (20 %)
Таблиця 2
ПатолоНчш змши в курячпх зародках, ¡ндуковаш ¡золятом в1русу НХ ввд
папуг(п=10)
Патолопчш змши в курячих зародках Ввдсоток патолопчних змш
I пасаж,% 2 пасаж,% 3 пасаж, %
Наявшсть урапв в екстра ембрюнальнш рвдиш 80 20 -
Застш кров1 в судинах ХАО 100 100 100
Утруднене вщдшення ХАО в1д шкаралупи - 20 60
Ввдставання ембрюну в розвитку 100 100 40
Крапчасп крововиливи на голов1 - 100 100
Крапчасп крововиливи в обласп потилищ - 20 20
Крапчасп крововиливи на тш - 80 80
Зб1льшення печшки 100 100 100
Нер1вном1рний кол1р печшки - 40 20
Венозний застш у печшщ 100 80 80
Зб1льшення нирок 80 100 100
Венозний застш у нирках 100 60 100
Нер1вном1рний кол1р нирок 40 20 -
Венозний застш у легенях 60 - 40
Примака: « - » вщсутшсть ознаки.
148
Проведениям пол1меразно! ланцюгово! реакцп за для виявлення Bipycy ньюкаслсько! хвороби в патолопчному MaTepiani вщ синьо - жовтих Ар пщтверджена наявшсть генетичного матер1алу даного Bipycy.
Рис. 2. Результати виявлення генетичного матер1алу Bipycy НХ у зразках
ввд папуг Ар.
Висновки.
1. Серед типових для розмиожения Bipycy ньюкаслсько! хвороби у КЕ патолопчних змш зареестровано вщставання у розвитку та крововиливи на головг
2. 1ндикащя Bipycy у патолопчному MaTepiani вщ папуг i3 використанням КЕ та пол1меразно1 ланцюгово! реакцп пщтверджуе ет1олог1чне значения Bipycy ньюкаслсько! хвороби у розвитку шфекци та загибел! папуг.
Л1тература
1. Alexander D.J. Newcastle disease and other avian paramyxoviruses/D.J. Alexander [et al.]//A laboratory manual for the isolation and identification of avian pathogens. American Association of Avian Pathologists, USA - 1998. - pp. 156 -163.
2. Clavijo A. Velogenic Newcastle disease in imported caged birds /A. Clavijo, Y. Robinson // Can Vet J. - 2000. - №41. - V.5. - p. 404 - 406.
3. Gilchrist P.Involvement of free-flying wild birds in the spread of the viruses of avian influenza, Newcastle disease and infectious bursal disease from poultry products to commercial poultry /P. Gilchrist// World's poultry science journal. - 2005. - Vol.61. - № 2 June. - P. 198-214.
4. King D.J. Avian paramyxovirus type 1 from pigeons: isolate characterization and pathogenicity after chicken or embryo passage of selected isolates /D.JKing // Avian Dis. - 1996. - pp. 707 - 714.
149
5. Samuel A.S. Complete sequence of the genome of avian paramyxovirus type 5 and comparison with other paramyxoviruses/A.S. Samuel// Virus Res. - 2009. -Vol. 142.- pp. 10-18.
6. Kumar S. Experimental avian paramyxovirus serotype-3 infection in chickens and turkeys /S. Kumar [et al.]// Vet. Res. - 2010. - Vol. 41 (5) - P. 72.
7. Madadgar O. A study of ND virus obtained from exotic caged birds in Tehran between 2009 and 2010 /O. Madadgar// Avian Pathol. 42 (1) - 2013. - pp. 27 - 31.
8. Herrera, I.Serological status for Chlamydophilapsittaci, Newcastle disease virus, avian polyoma virus, and Pacheco disease virus in scarlet macaws (Aramacao) kept in captivity in Costa Rica/ I Herrera, M.S.R Khan, E.F Kaleta, H. Muller// Journal of Veterinary Medicine. Series B. - 2001. - Vol. 48 (10) - pp. 721-726.
9. Zhang G.Z. Isolation, identification, and comparison of four isolates of avian paramyxovirus serotype 2 in China /G.Z. Zhang, J.X. Zhao, H.W. Wang, A.M. Yang// Avian disease.- 2006. - Vol. 50.- pp.386 - 390
10. Nerome K. Isolation of a new avian paramyxovirus from budgerigar (Melopsittacusundulatus) /K. Nerome, M. Nakayama, M. Ishida, H. Fukumi// J. Gen. Virol.-1978. - Vol. 38, pp. 293 - 301.
11. ДСТУ25587-83 «МетодилабораторновдагностикихворобиНьюкасла».
12. Стегнш Б.Т. Пол1меразна ланцюгова реакщя у практищ ветеринарно! медицини та бюлопчних дослщженнях/Б.Т. Стегнш, А.П. Герилович, О.Ю. Лимарська, В.О. Головко [та ш.]. - Харюв, «НТМТ»,- 228 с.
Summary I. Kononenko1, L. Parkhomenko2
«Bio-Test-Laboratoriya», Kiev, Ukraine1 Lugansk National agrarian university, Lugansk, Ukraine2
DETECTION OF NEWCASTLE DISEASE VIRUS IN PARROTS
Detection of paramyxovirus in the pathological material from parrots using chicken embryos and polymerase chain reaction showed the presence of typical for the reproduction of the virus of pathological changes and the presence of genetic material of the virus Newcastle disease.
Key words: paramyxovirus, parrots, embryos of chickens, polymerase chain reaction.
Рецензент - к.вет.н., доцент Калшша О.С.
150
