CC BY
25
УДК 619:616.98-074:578.833.31
Ситюк М.П., к.вет.н., ст. науковий ствробггник © 1нститут ветеринарногмедициниНААН, м. Кше Напненко О.О., науковий ствроб1тник Державный науково-контролъний тститут бютехнологпг штам1в
м1крооргашзм1в, м. Кше
ВИЗНАЧЕННЯ КУЛЬТУРАЛЬНИХ ВЛАСТИВОСТЕЙ ВИРОБНИЧИХ ШТАМ1В В1РУСУ ХВОРОБИ АУССК1
У статт1 наведет кулътуралъш особливост1 деяких виробничих штам1в в1русу хворобы Ауесю, що збер1гаютъся в депозитарп Державного науково-контролъного тституту бютехнолог1и / штам1в мтрооргашзм1в (ДНК1БШМ). Визначено показники тфекцшног активност1, термшв прояву цитопатичног дИ виробничих штам1в в перещеплюваши культур! клтин ВНК-21.
Ключое1 слова: в1рус хвороби Ауесю, штами, культура клтин, тфекцтна актиетстъ.
Вступ. Хвороба Ауесю вже 110 роюв вщома людству як контагюзне в1русне захворювання ус1х вид1в домашшх тварин, диких тахутрових зв1р1в [1]. В антигенному вщношенш в1рус хвороби Ауесю однорщний [2]. На сьогодш юнують та певним чином вивчеш таю штами в1русу хвороби Ауесю: в1рулентш - П, Арський [3]; атенуйован1 - БУК-622, БУК-900, ВГНКИ, МК-25, МК 49 [4-6]; марковаш - ВК, ВайИа К-61 [7, 8]. У лабораторних умовах в1рус хвороби Ауесю культивують у первинних та перещеплюваних культурах кл1тин р1зного походження, а саме: ППК [5], ВНК-21 СЬ-91 [7], НГУК-1, РК-15 [8, 9], ПСГК-60 [10], де збудник накопичуеться в титрах вщ 8,5 lg ТЦД50/см3 { вище. Прояв ЦПД в1русу хвороби Ауесю в цшому характеризуемся округлениям кл1тин \ скупченням 1х у вигляд1 «грона винограду» [6]. Кр1м культур кл1тин, в ¿рус хвороби Ауесю можна культивувати на курячих ембрюнах [5].
Метою наших дослщжень було провести пор1вняльну оцшку культуральних властивостей (шфекцшно! активное^, строюв прояву ЦПД) виробничих штам1в в1русу хвороби Ауесю: в1рулентних - «Арський», «18 в»; маркованого вакцинного - «Бегошя», а також нового штаму «Петршвський-2006», який був видшений вщ свшських свиней Ситюком М.П. та задепонований у депозитарп ДНК1БШМ.
Матер1али 1 методика дослщжень. Для дослщження були взят1 штами в1русу хвороби Ауесю, яю збер1гаються в депозитарп ДНК1БШМ: «Арський» -в1русовмкна культуральна рщина, пасаж 27/11 вщ 24.07.2011р., титр 6,8 ^ ТЦД50/см3; «18в» - люфшьно висушений УНД1ЕВ вщ 28.07.2001, титр 7,5 lg ТЦД50/см3; «Петршвський-2006» - в1русовмюна культуральна рщина 8-го пасажу вщ 22.07.2011, титр 5,5 ^ ТЦД50/см3; маркована вакцина «Бегошя»
© Ситюк М.П., Напненко О.О., 2012
294
виробництва 1нтервет 1нтернешнл - люфшьно висушена в1русна сировина, що м1стить ßipyc у титр! 5,5 lg ТЦД50/СМ3 в однш дозг
При проведенш дослщжень використовували сучасну апаратуру -ламшарний бокс та С02 шкубатор ф1рми JOUAN, швертований мжроскоп ф1рми ZEISS AXIOVERT 25, пластиков! мжропланшети з плоским та U-под1бним дном ф1рми Sarstedt, inc. Newton, NC 28658 Made in USA, скляш матраци об'емом 50 см3, автопшетку восьмиканальну та одноканальну ф1рми BIOHIT 50 - 250 мкл; ростов! середовища: ДМЕМ, 199, розчин версену 0,02 % для культур кл1тин, сироватку кров1 ВРХ без консерванту нативну, розчин трипсину 0,25 % на фосфатному буфер1 для культур кл1тин виробництва TOB НВП "Бю-Тест-Лаборатор1я". Як бюлопчну модель використовували перещеплювану культури кл1тин ВНК-21.
Кожним штамом Bipycy хвороби AyecKi заражали культуру кл1тин ВНК-21, вирощену в скляних матрацах об'емом 50 см3. Враховували строки прояву ЦПД та проводили чотири послщовш пасаж1 зг1дно з загальноприйнятою методикою [11]. 1нфекц1йну активн1сть штам1в Bipycy визначали шляхом титрування в культур! кл1тин ВНК-21, вирощен1й у пластикових м1кропланшетах.
Результати досл1джень наведеш в таблиц! 1.
Таблиця 1.
Результати пасажування виробничих штам1в Bipycy хвороби AyecKi
в культур! клггин ВНК-21
Назва штаму № пасажу
1-й 2-й 3-й 4-й
строк появи ЦПД, годин титр шфекць ЙН01 актив- HOCTi, lg строк появи ЦПД, годин титр шфекць ЙН01 актив- HOCTi, lg строк появи ЦПД, годин титр шфекць ЙН01 актив- HOCTi, lg строк появи ЦПД, годин титр шфек-ЦШН01 1КТИВНОСТ i, lg
Арський 24 7,2 20 7,95 20 8,2 19 8,2
ПетрЫвсь-кий-2006 16 5,45 16 7,7 16 7,7 15,5 7,7
18 в 40 6,92 38 7,45 32 7,7 31 7,7
Бегон1я 44 3,7 28 5,45 25 5,45 24 5,45
Дан1 таблиц! 1 вказують на те, що протягом чотирьох посл1довних пасаж1в реестрували динам1ку зменшення строку появи ЦПД у культур1 кл1тин ВНК-21. Найб1льш наглядно скорочення терм1н1в прояву ЦПД в1дм1чали теля другого пасажу в марковано! вакцини «Бегон1я». Це, на нашу думку, пов'язано з вив1льненням в1русу вщ компонент1в, що входять до складу захисного середовища при л1оф1льному висушуванш. При проведенн1 посл1довних пасаж1в шших штам1в реестрували менш виражене скорочення строюв появи ЦПД - вщ 4-х до 2-х годин, а при дослщженш штаму «Петр1к1вський-2006» останш практично були незм1нними \ становили 16 годин упродовж трьох пасаж1в \ 15,5 годин п1сля четвертого пасажу. Характер ЦПД проявлявся на
295
початку дисемшованим округлениям кл1тин моношару з подальшим вщриванням 1х вщ скла.
Також реестрували збшьшення титр1в шфекцшно! активност1 вказаних штам1в в1русу хвороби Ауесю протягом трьох пасаж1в. Титри шфекцшно! активное^ штам1в особливо значно пщвищувалися теля проведения другого пасажу. На четвертому пасаж1 шфекцшна актившсть штам1в не вщр1знялася вщ титр1в третього пасажу.
Висновки. При проведенш лабораторних дослщжень депонованих штам1в в1русу хвороби Ауесю встановлено збшьшення титр1в шфекцшно! активносп 1х до третього пасажу з одночасним зниженням строк1в появи ЦПД.
Пщвищено титр ¿нфекц1йно1 активное^ штаму в1русу хвороби Ауеск1 "Петр1ювський-2006" з 5,5 до 7,7 ^ ТЦД50/см3 шляхом проведения чотирьох послщовних пасаж1в у культур! кл1тин ВНК-21.
Одержан! показники ¿нфекц1йно1 активност1 виробничих штам1в в1русу хвороби Ауеск1 дозволять у найближчш перспектив! провести дослщ ¿з встановлення 1хньо! антигенно! спорщненост1 шляхом постановки реакц1! нейтрал1зац1! з пост1йною дозою позитивно! сироватки кров1 та визначення ¿ндексу нейтрал1зац11.
Л1тература
1. Болезнь Ауески - эпизоотическая ситуация и современная система мер борьбы / Коломыцев А. А., Стрижаков А. А., Федоров Д. Г., ФиломатоваВ. А. // Болезни диких животных : труды Междунар. науч.-практич. конф., 28-30 сент. 2004 г. - Покров, 2004. - С. 134-145.
2. Болезнь Ауески // Вирусные болезни животных / Сюрин В. Н., СамуйленкоА. Я., СоловьевБ. В., ФоминаН. В. - М.: ВНПТИБП, 1998. - С. 603-630.
3. Адаптация вируса болезни Ауески на новой культуре клеток / Р. X. Юсупов, В. С. Угрюмова, Г. Ф. Ильясова и др. // Ветеринария. - 2003. -№ 11. - С. 22-25.
4. Оценка некоторых биологических свойств вируса болезни Ауески / В. И. Жестерев, В. А. Мищанин, Р. В. Кошелева и др. // Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии : материалы науч.-практ. конф. ВНИИВВиМ «Классическая чума свиней - неотложные проблемы науки и практики», 9-11 нояб. 1994 г. - Покров, 1995. - С. 131-132.
5. Вклад ВНИИВВиМ в разработку методов диагностики и вирусспецифической профилактики болезни Ауески / Д. Г. Федоров, В. И. Жестерев, Е. М. Хрипунов и др. // Нейроинфекции: бешенство, губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота, Крейтцфелда-Якоба и другие прионные болезни; листериоз, болезнь Ауески, болезнь Тешена : материалы Междунар. науч.-практ. конф. 30-31 мая 2001 г. - Покров, 2001. - С. 152-154.
6. Разработка вакцины против болезни Ауески для орального применения / Е. М. Хрипунов, В. И. Жестерев, В. А. Мищанин и др. // Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии : материалы науч.-практ. конф.
296
ВНИИВВиМ «Классическая чума свиней - неотложные проблемы науки и практики», 9-11 нояб. 1994 г. - Покров, 1995. - С. 130-131.
7. Ясенева Е. А. Динамика накопления полноценного вируса болезни Ауески маркированного штамма "ВК" в перевиваемой линии клеток ВНК-21 / Ясенева Е. А. // Ветеринар. патология. - 2006. - № 4. - С. - 107-108.
8. Schlesinger, K.J., Williams, J.M. and Widel, P.W. Intranasal administration of Pseudorabies (Bartha K.61) vaccine in neonates and grow/finish pigs: safety and efficacy of vaccination and effects of virulent challenge exposure - I.P.V.S. Congress, Lausanne 1990. - p. 260
9. Адаптация вируса болезни Ауески (псевдобешенство) к клеткам невриномы Гассерового узла крысы для биотехнологии вакцин и диагностикумов / Г. X. Ильясова, М. А. Сафин, P. X. Юсупов и др. // Нейроинфекции: бешенство, губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота, Крейтцфелда-Якоба и другие прионные болезни; листериоз, болезнь Ауески, болезньТешена : материалы Междунар. науч.-практ. конф. 30-31 мая 2001 г. - Покров, 2001. - С. 158-160.
10. Иммуногенные и протективные свойства ассоциированной инактивированной вакцины против болезни Ауески и болезни Тешена / Живодеров С. П., Шишкова А. А., Луницин А. В., Ольшанская А. А. // Проблемы профилактики и борьбы с особо опасными, экзотическими и малоизученными инфекционными болезнями животных : труды Междунар. науч.-практ. конф., посвященной 50-летию ВНИИВВиМ 13-14 нояб. 2008 г. -Покров, 2008. - С. 197-199.
11. Лярски 3. Диагностика вирусных болезней животных / Лярски 3. ; пер. Т.Г. Орловой, Я.С. Ляндесберга ; под ред. и с предисл. В.Н. Сюрина. - М. : Колос, 1980. - 400 с.
Summary
Sytyuk N.P. Institute of Veterinary Medicine NAAN, Kyiv, PhD Napnenko A.A. State Scientific and Control Institute of Biotechnology and microorganisms' strains, Kyiv DETERMINATION OF CULTURAL CHARACTERISTICS OF INDUSTRIAL STRAINS OF AUJESZKY 'S DISEASE In the article it is shown cultural characteristics of some industrial strains of Aujeszky 's disease which are stored in the depositories of the State Scientific and Control Institute of Biotechnology and microorganisms' strains (SSCIBMS). It was determined the rates of infectious activity, the terms of cytotoxic effect of industrial strains in the transplantable cell culture BHK-21.
Keywords: virus of Aujeszky's disease, strains, cell culture, infectious activity.
Рецензент - к.вет.н., професор ушверситету Калшша О. С.
297
