CC BY
6
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XV, № 2, 2019
лейкоза. Через 5 месяцев больного госпитализировали повторно из-за ухудшения состояния. В миелограмме (КМ) было обнаружено 11 % бластов, что подтвердило развитие рецидива. Мультифакторное ПЦР-тестирование позволило обнаружить в КМ слитный онкоген Cbfb-Myh11/A (83.1 %) вместо первоначально выявленного онкогена Bcr-Abl/p190. ЦГ анализ, включая FISH, показал наличие хромосомной мутации inv(16)(p13; q22) в 80 % клеток КМ и отсутствие каких-либо дополнительных хромосомных аномалий. Проведение иммунофено-типирования поверхностных CD-маркеров позволило обнаружить в КМ популяцию бластных клеток с аберрантным фенотипом (Cd45dimC D34+CD38+CD117+CD13+CD33+), характерную для ОМЛ. Дополнительный анализ уровней экспрессии генов MycN, Spt16, Apobec3A, Casc5 продемонстрировал их увеличение в КМ в 5.1, 4.0, 2.1 и 6.3 раза, соответственно (по сравнению с первоначальными результатами). Следует отметить, что при обнаружении рецидива у пациента также выявили нейролейкоз. В это же время экспрессия MycN, Spt16 и Apobec3A превалировала в ПК по сравнению с КМ. Известно, что повышение экспрессии дезами-назы Apobec3A, как правило, ассоциируется с прогрессией ОМЛ и сопровождается возникновением мутаций (G>A) в онкогене WT1 и его гиперэкспрессией. Ранее увеличенная коэкспрессия Apobec3A и Casc5 была обнару-
жена в клетках КМ первичных больных ОМЛ по сравнению с больными ОЛЛ (В-ОЛЛ, Т-ОЛЛ). Что касается повышенной коэкспрессии МусЫ и Spt16, то впервые она была выявлена у больных с нейробластомой. При этом регулятором онкогена МусЫ оказался транскрипционный фактор Spt16, ответственный за активацию хроматина. Однако неизвестно, может ли Spt16 выступать в роли модулятора МусЫ при лейкозе. Что касается настоящего исследования, то спустя 1 месяц после начала химиотерапии (вО+НШЛС) у пациента отмечалась устойчивость к лечению: нарастание уровня бластов (50 %) в КМ и одновременное превалирование экспрессии генов МусЫ (7.2), СаБс5 (22.0) и (1.9) в клетках СЭ34 после сортировки по сравнению с тотальным КМ.
Выводы. Выявлен случай ОМЛ, сопровождающийся возникновением нового лейкоз-ного клона клеток с мутацией СЫЪ-МуЬ11/Л и полной утратой прежнего опухолевого клона, несущего Всг-ЛЫ/р190. При этом показано, что активация онкогена МусЫ, способствующая самообновлению миелоидных предшественников в КМ, ассоциируется с экспрессией генов-регуляторов: ЛроЬесЗЛ, СаБс5, вовлеченных в клеточную пролиферацию. Таким образом, повышение уровней экспрессии названных генов коррелирует с прогрессией миелолейко-за и способствует поддержанию метаболизма ОМЛ с более агрессивным течением.
Е. Н. Воропаева1, Т. И. Поспелова2, М. И. Воевода1, В. Н. Максимов1
1 Научно-исследовательский институт терапии и профилактической медицины — филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук»
2 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Новосибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Новосибирск
ЧТО МОЖЕТ БЫТЬ СКРЫТО В НЕКОДИРУЮЩИХ УЧАСТКАХ ГЕНА TP53 ПРИ ДВКЛ
Введение. Несмотря на всю сложность картины генетических изменений, происходящих в геноме злокачественной клетки, мутации гена ТР53 являются универсальным нарушением, обнаруживаемым при широком круге злокачественных новообразований. В настоящее время углубленный анализ результатов секвенирования вне кодирующих последовательностей гена ТР53 отсутствует, количество и функциональные эффекты выявляемых в них аберраций не оценены.
Цель. Целью данного исследования было выявить изменения в некодирующих участках ТР53 в опухолевой ткани диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДВККЛ) и провести прогнозирование возможных последствий этих изменений.
Материалы и методы. Геномную ДНК выделяли из парафиновых блоков биоптатов опухолевых лимфоузлов и экстранодальных очагов поражения 92 пациентов с ДВККЛ. Методом прямого капиллярного секвенирования
VВсероссийская научно-практическая конференция с международным участием «ГЕНЕТИКА ОПУХОЛЕЙ КРОВЕТВОРНОЙ СИСТЕМЫ -ОТ ДИАГНОСТИКИ К ТЕРАПИИ»
по Сэнгеру определена нуклеотидная последовательность участков интронов примыкающих к 5-10 экзонам гена (n=74), а также фрагмента З'-нетранслируемой последовательности ТР53 (n=92), содержащего сигнал полиаденилирова-ния. Теоретическое прогнозирование возможных последствий обнаруженных мутаций проводилось с применением программы NetGene2.
Результаты. В опухолевом материале 74 больных ДВККЛ выявлены 12 типов мутаций в интронных участках: g.7675266A>G, g.7675010C>A, g.7674988A>G, g.7674326C>G, g.7674153C>G, g.7673691G>T, g.7673681T>C, g.7673664T>C и g.7673523A>G. Мутация g.7674326C>G, имеющая доказанную биологическую значимость по данным экспериментов in vitro, согласно данным The Human Cancer Mutation Database, относится к изменениям, влияющим на сплайсинг. Согласно прогнозу NetGene2, из выявленных нами в группе больных ДВККЛ интронных замен, g.7675010C>A приводит к образованию дополнительного акцепторного сайта сплайсинга, что может приводить к включению в последовательность м-РНК части интрона 5.
Санкт-Петербург 26-27 апреля 2019 г.
В 9 случаях в образцах опухолевой ткани ДВККЛ был выявлен г$78378222, разрушающий сигнал полиаденилирования ТР53 и приводящий к нарушению трансляции белка р53. В 5/9 случаев определен гомозиготный минорный генотип С/С по Г878378222, что свидетельствовало о потере гетерозиготно-сти в данном локусе, которая способствует значительному приросту злокачественного потенциала клеток.
Выводы. До настоящего времени при изучении ТР53 в опухолевой ткани больных ДВККЛ исследования были сосредоточены на поиске мутаций в 5-8 экзонах гена, кодирующих ДНК-связывающий домен белка р53. По этим причинам, безусловно, требуется дальнейшее исследование спектра изменений в не-кодирующих последовательностях гена ТР53 и определение их функционального эффекта при ДВККЛ. Полученные нами данные свидетельствуют о функциональной селекции на этапах опухолевой прогрессии ДВККЛ изменений в интронах и в З'-нетранслируемой последовательности гена ТР53.
О. А. Гаврилина, Е. Н. Паровичникова, Т. В. Абрамова, Л. А. Гребенюк, Л. А. Шишигина, Г. А. Алимова, Т. Н. Обухова, В. В. Троицкая, Г. А. Басхаева, В. Г. Савченко
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
ЗНАЧЕНИЕ FISH ИССЛЕДОВАНИЯ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ФИЛАДЕЛЬФИЙСКОЙ ХРОМОСОМЫ У БОЛЬНЫХ ОСТРЫМИ ВЛИМФОБЛАСТНЫМИ ЛЕЙКОЗАМИ В РАМКАХ РЕГИСТРАЦИОННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ОЛЛ2016.
Введение. Больные РЬ-позитивным острым лимфобластным лейкозом (РЬ+ОЛЛ) составляют около 25% среди всех ОЛЛ взрослых, причем заболеваемость этим вариантом В-ОЛЛ увеличивается с возрастом больного. Несмотря на появление ингибиторов тирозинкиназ и увеличение эффективности терапии РЬ+ОЛЛ, эта группа больных по-прежнему относится к высокому риску рецидива и должна рассматриваться как группа пациентов, нуждающихся в траснплантации аллогенного костного мозга. В связи с этим становится актуальной точная верификация этого заболевания в дебюте с целью проведения адекватного эффективного лечения.
Цель. Оценить частоту встречаемости РЬ+ОЛЛ в рамках регистрационного исследования и определить необходимость выполнения
прицельного FISH исследования для выявления t(9;22) у больных В-ОЛЛ.
Материалы и методы. С декабря 2016 г. начато регистрационное исследование для всех больных в возрасте старше 18 лет с впервые установленным ОЛЛ в 11 центрах Российской Федерации (Москва, Санкт-Петербург, Киров, Нижний Новгород, Волгоград, Сургут, Екатеринбург, Калуга, Ярославль, Саранск). С декабря 2016 по февраль 2019 года зарегистрировано 187 больных с ОЛЛ: медиана возраста 36 лет (18-74 года); 112 (60 %) мужчин и 75 (40 %) женщин; 115 (61 %) с В-ОЛЛ (из них 17 (15 % от всех В-ОЛЛ) с Ph+ОЛЛ), 67 (36 %) с Т-ОЛЛ и 5 (3 %) с лейкозом смешанного фенотипа. 124 (66 %) больных включены в протокол лечения ОЛЛ-2016, остальные 63 (34 %) пациента лечились по другим протоколам в связи
