CC BY
16
VВсероссийская научно-практическая конференция с международным участием «ГЕНЕТИКА ОПУХОЛЕЙ КРОВЕТВОРНОЙ СИСТЕМЫ -ОТ ДИАГНОСТИКИ К ТЕРАПИИ»
ХЛЛ эта аллель составляет % от всех случаев использования данного гена. Кроме того, при СЛКМЗ, в отличие от ХЛЛ, для ЮНУ1-2 количество мутированных и немутированных случаев одинаково. Возможно, по этой причине, несмотря на столь сильное сужение репертуара как ЮНУ-, так и ЮНО-генов (высоко представлены гены ЮНО3-3 и ЮНО3-10), в нашей подгруппе выявлено всего 2 пары пациентов с последовательностями СОЯ3-регионов, соответствующими признакам САР (перестройки ЮНУ1-2*04/1ОНО3-3/ЮН|5 и ЮНУ1-2*04/1ОНО3-3/ ЮН|5). При сравнении последовательностей САР между рассматриваемыми нозологиями было выявлено, что в подавляющем большинстве случаев они являются специфичными для конкретных заболеваний — не только на уровне
Санкт-Петербург 26-27 апреля 2019 г.
аминокислотных последовательностей, но и на уровне перестраиваемых генов. Единственное совпадение было обнаружено между группами ММ1 и ^#64О. СОЯ3-регионы этих групп образованы одинаковым набором генов, имеют схожие мотивы и отличаются только длиной.
Выводы. Наши результаты подтверждают влияние антигенов на патогенез лимфом и показывают, что эти антигены специфичны к различным нозологиям. Для ХЛЛ некоторые САР являются дополнительным прогностическим признаком. Продолжение изучения САР для других нозологий необходимо для развития представлений о роли антигенной стимуляции в лейкемогенезе и может также способствовать разработке новых диагностических и прогностических маркеров для данных заболеваний.
К. В. Богданов, Е. Г. Ломаиа, О. В. Мерзликина., Т. С. Никулина, Ю. В. Миролюбова, Н. Т. Сиордия, А. Ю. Зарицкий
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный Медицинский Исследовательский Центр имени В. А. Алмазова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Санкт-Петербург
ПРОГРЕССИРОВАНИЕ МИЕЛОИДНОГО ЛЕЙКОЗА АССОЦИИРОВАНО
С ВОЗНИКНОВЕНИЕМ НОВЫХ ОНКОГЕННЫХ МУТАЦИЙ И ИЗМЕНЕНИЕМ ЭКСПРЕССИИ НЕКОТОРЫХ РЕГУЛЯТОРНЫХ ГЕНОВ
Введение. Прогрессия миелолейкоза, сопровождающаяся возникновением нового лейкоз-ного клона клеток с мутацией Cbfb-Myh11/A и полным элиминированием первоначально обнаруженного клона с мутацией Bcr-Abl/p190, описана в научной литературе, но встречается редко. Причина этого явления неизвестна.
Цель исследования. Провести мульти-факторный ПЦР-анализ онкогенных мутаций и уровней экспрессии регуляторных генов у больного ОМЛ. Оценить их возможное влияние на прогрессию заболевания.
Материалы и методы. Костный мозг (КМ) и периферическую кровь (ПК) пациента отбирали в пробирки с напылением ЭДТА: при первичном поступлении, во время лечения, при наступлении ремиссии/рецидива. После экстракции РНК и синтеза кДНК на основе обратной транскрипции было выполнено муль-тифакторное ПЦР-тестирование (TaqMan PCR/ QPCR) для определения уровней экспрессии онкогенов и регуляторных генов. Также проводили цитогенетическое исследование (ЦГ), включая FISH, и иммунофенотипирование поверхностных антигенов (CD-маркеров).
Результаты. Первоначально у больного ОМЛ (38 % бластных клеток) проводили мультифак-торный ПЦР-анализ наиболее распространенных онкогенных мутаций (n=15), что позволило обнаружить слитный онкоген Bcr-Abl/p190. При этом уровень его экспрессии составил 11% и 10 % в КМ и ПК, соответственно. ЦГ исследование, включая FISH, подтвердило наличие Ph-хромосомы или хромосомной транслокации t(9;22)(q34; q11), а также отсутствие каких-либо дополнительных хромосомных нарушений. В это же время количественное определение уровней экспрессии онкогена MycN и некоторых регуляторных генов — Spt16, Apobec3A, Casc5 — позволило обнаружить, что экспрессия первых 3 мишеней, включая MycN, оказалась выше в 1.2, 1.7 и 2.2 раза, а последнего, напротив, ниже в 3.3 раза по сравнению с контрольными образцами (норма). Спустя 1.2 месяца после начала химиотерапии (FLAG+дазатиниб), у пациента была достигнута ПКГ ремиссия и ПМО. При этом уровни экспрессии онкогена MycN и генов-регуляторов вернулись к норме. После выписки пациент продолжал принимать дазатиниб (140 мг) с целью профилактики
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XV, № 2, 2019
лейкоза. Через 5 месяцев больного госпитализировали повторно из-за ухудшения состояния. В миелограмме (КМ) было обнаружено 11 % бластов, что подтвердило развитие рецидива. Мультифакторное ПЦР-тестирование позволило обнаружить в КМ слитный онкоген Cbfb-Myh11/A (83.1 %) вместо первоначально выявленного онкогена Bcr-Abl/p190. ЦГ анализ, включая FISH, показал наличие хромосомной мутации inv(16)(p13; q22) в 80 % клеток КМ и отсутствие каких-либо дополнительных хромосомных аномалий. Проведение иммунофено-типирования поверхностных CD-маркеров позволило обнаружить в КМ популяцию бластных клеток с аберрантным фенотипом (Cd45dimC D34+CD38+CD117+CD13+CD33+), характерную для ОМЛ. Дополнительный анализ уровней экспрессии генов MycN, Spt16, Apobec3A, Casc5 продемонстрировал их увеличение в КМ в 5.1, 4.0, 2.1 и 6.3 раза, соответственно (по сравнению с первоначальными результатами). Следует отметить, что при обнаружении рецидива у пациента также выявили нейролейкоз. В это же время экспрессия MycN, Spt16 и Apobec3A превалировала в ПК по сравнению с КМ. Известно, что повышение экспрессии дезами-назы Apobec3A, как правило, ассоциируется с прогрессией ОМЛ и сопровождается возникновением мутаций (G>A) в онкогене WT1 и его гиперэкспрессией. Ранее увеличенная коэкспрессия Apobec3A и Casc5 была обнару-
жена в клетках КМ первичных больных ОМЛ по сравнению с больными ОЛЛ (В-ОЛЛ, Т-ОЛЛ). Что касается повышенной коэкспрессии МусЫ и Spt16, то впервые она была выявлена у больных с нейробластомой. При этом регулятором онкогена МусЫ оказался транскрипционный фактор Spt16, ответственный за активацию хроматина. Однако неизвестно, может ли Spt16 выступать в роли модулятора МусЫ при лейкозе. Что касается настоящего исследования, то спустя 1 месяц после начала химиотерапии (вО+НШЛС) у пациента отмечалась устойчивость к лечению: нарастание уровня бластов (50 %) в КМ и одновременное превалирование экспрессии генов МусЫ (7.2), СаБс5 (22.0) и (1.9) в клетках СЭ34 после сортировки по сравнению с тотальным КМ.
Выводы. Выявлен случай ОМЛ, сопровождающийся возникновением нового лейкоз-ного клона клеток с мутацией СЫЪ-МуЬ11/Л и полной утратой прежнего опухолевого клона, несущего Всг-ЛЫ/р190. При этом показано, что активация онкогена МусЫ, способствующая самообновлению миелоидных предшественников в КМ, ассоциируется с экспрессией генов-регуляторов: ЛроЬесЗЛ, СаБс5, вовлеченных в клеточную пролиферацию. Таким образом, повышение уровней экспрессии названных генов коррелирует с прогрессией миелолейко-за и способствует поддержанию метаболизма ОМЛ с более агрессивным течением.
Е. Н. Воропаева1, Т. И. Поспелова2, М. И. Воевода1, В. Н. Максимов1
1 Научно-исследовательский институт терапии и профилактической медицины — филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук»
2 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Новосибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Новосибирск
ЧТО МОЖЕТ БЫТЬ СКРЫТО В НЕКОДИРУЮЩИХ УЧАСТКАХ ГЕНА TP53 ПРИ ДВКЛ
Введение. Несмотря на всю сложность картины генетических изменений, происходящих в геноме злокачественной клетки, мутации гена ТР53 являются универсальным нарушением, обнаруживаемым при широком круге злокачественных новообразований. В настоящее время углубленный анализ результатов секвенирования вне кодирующих последовательностей гена ТР53 отсутствует, количество и функциональные эффекты выявляемых в них аберраций не оценены.
Цель. Целью данного исследования было выявить изменения в некодирующих участках ТР53 в опухолевой ткани диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДВККЛ) и провести прогнозирование возможных последствий этих изменений.
Материалы и методы. Геномную ДНК выделяли из парафиновых блоков биоптатов опухолевых лимфоузлов и экстранодальных очагов поражения 92 пациентов с ДВККЛ. Методом прямого капиллярного секвенирования
