CC BY
17
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 3, 2021
ФРГ]. HLA типирование проводили методом NGS с использованием наборов AllType NGS Amplification Kits (One Lambda, США] и GenDx (Нидерланды]. Таргетное обогащение проводили с помощью локус-специфиче-ской амплификации. Дальнейшая постановка включала эквимолярное пулирование ампликонов, ферментативную фрагментацию и лигирование адаптеров, очистку и выбор размера полученных фрагментов, индексирующую ПЦР, финальное пулирование и измерение библиотек. Анализ полученных в результате секвенирования последовательностей HLA-генов проводили при помощи компьютерной программы TypeStream Visual Software (TSV] (One Lambda, США], версия V2.0.0.68 (IPD-IMGT/HLA 3.40.0.1.]. Для анализа генетических дистанций было привлечено 8 популяций, включая доноров базы данных ФГБУ НМИЦ Гематологии Минздрава России, которые самоопределились как русские, башкиры и татары, 3 российские популяции, исследованные коллективом авторов из ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России. Также были включены две зарубежные популяции, это поляки и турки. Критерием включения популяции в анализ были данные HLA генов по высокому разрешению, численность популяции > 120 индивидуумов, сумма частот по каждому HLA - гену равна 1. Расчет генетических дистанций и построение филогенетических деревьев, полученных на основании частот групп HLA-аллелей, проводили по методу Нея c помощью программы Phylip 3.695.
Результаты. Доноры ГСК базы данных ФГБУ «НМИЦ Гематологии» Минздрава России, самоопределившиеся как русские, наиболее близки по своему генетическому разнообразию к полякам (варшавянам] (g.d.= 0,160]. Дальше отстоят татары (g.d.= 0,423] и башкиры (g.d.= 0,864]. Более отдаленными от иссле-
дуемой популяции русских были турки (^.= 1,135] и чеченцы (^.= 1,490]. Из российских популяций наибольшее генетическое расхождение у доноров-русских наблюдалось с бурятами из Иркутской области и калмыками 2,145 и 2,217 соответственно]. На филогенетическом дереве отмечена незначительная длина ветвей расположения восточнославянского (русские] и западнославянского (поляки] народов. Ветвь тюркских народов (татары, турки и башкиры] отходит из одного узла филогенетического дерева. Филогенетическая ветвь, на которой располагаются чеченцы - народ Северного Кавказа, относящийся к нахской группе, язык которых относится к ветви нах-ско-дагестанских языков, отпочковывается из единого узла с популяциями Европы и Азии. Своеобразность популяции выражена значительной длиной ветви, на которой располагается популяция чеченцев. Максимально отдаленная от русских монгольская ветвь берет начало из единого узла дерева и представлена популяциями северных (буряты] и западных (калмыки] монгольских групп.
Выводы. HLA-генетические дистанции между включенными в исследование популяциями, типиро-ванными на уровне высокого разрешениями, а также расположение популяций на филогенетическом дереве, в основном совпадают с данными, полученными ранее для популяций, типированных на уровне низкого разрешения. Российские популяции иного этнического происхождения отстоят от русских по аллелям HLA-генов дальше, чем популяция поляков. Наблюдаемое генетическое разнообразие российских популяций разного этнического происхождения говорит о необходимости привлекать в российские регистры доноров различной этнической принадлежности из различных регионов России.
Леонов Е.А., Хамаганова Е.Г., Абдрахимова А.Р., Хижинский С.П., Гапонова Т.В.
ЧАСТОТА АЛЛЕЛЕЙ HLA-A, -DRB1, -DQB1 ГЕНОВ И СТРУКТУРА АЛЛЕЛЬНОГО
РАЗНООБРАЗИЯ У ДОНОРОВ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК РЕГИСТРА ФГБУ «НМИЦ ГЕМАТОЛОГИИ» МИНЗДРАВА РОССИИ, САМООПРЕДЕЛИВШИХСЯ
КАК РУССКИЕ
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации
Введение. Трансплантация аллогенных гемопоэ-тических стволовых клеток является эффективным методом лечения многих тяжёлых гематологических заболеваний. Подбор совместимого НЬА-донора затруднён из-за высокого полиморфизма НЬА-генов. Вероятность найти НЬА-совместимого неродственного донора варьирует в зависимости от частоты встречаемости НЬА-аллелей и гаплотипов в данной популяции, поэтому в России необходимо развивать регистры добровольных, анонимных, безвозмездных доноров гемопоэтических стволовых клеток (ГСК], НЬА-типированных с максимально возможным разрешением.
Цель. Анализ распределения НЬА-аллелей у до-
норов ГСК базы данных ФГБУ «НМИЦ Гематологии» Минздрава России, самоопределившихся как русские.
Материалы и методы. В исследование включено 1510 потенциальных доноров ГСК регистра ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России, самоопределившиеся как русские. Выделение геномной ДНК из образца периферической крови донора производили с помощью наборов QIAamp DNA Blood Mini Kit и автоматизированной системы выделения ДНК QIAcube (Qiagen, ФРГ]. HLA типирование проводили методом NGS с использованием набора AllType NGS Amplification Kits (One Lambda, США]. Анализ полученных в результате секвенирования последова-
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ
тельностей HLA-генов проводили при помощи компьютерной программы TypeStream Visual Software (TSV] (One Lambda, США], версия V2.0.0.68 (IPD-IMGT/HLA 3.40.0.1.] Частоты HLA-аллелей и соответствие наблюдаемого распределения равновесию Харди-Вайнберга определяли с помощью программного обеспечения Arlequin 3.5 методом максимального правдоподобия с использованием алгоритма максимизации ожидания.
Результаты. При полногенном секвенировании генов HLA класса I выявлено 82 аллеля HLA-A, 156 аллелей HLA-B, 85 аллелей HLA-C (на уровне 4-го поля]. Типирование по II классу HLA выявило 45 аллелей HLA-DRB1 и 18 аллелей HLA-DQB1 (на уровне 2-3 полей]. Несмотря на большое разнообразие аллелей гена HLA-A, выявлено всего три аллеля с частотой более 10% (кумулятивная частота 51,7%] - A*02:01:01:01 (27,1%], A*03:01:01:01 (13,0%] и A*01:01:01:01 (11,6%]. Двенадцать аллелей с частотой от 1 до 10% охватывали еще 38,6%, 26 HLA-A аллелей с частотой встречаемости 0,1-1% имели кумулятивную частоту 7,6%. Редко встречаемые аллели (менее 0,1%] составляли группу из 41 аллеля (кумулятивная частота равнялась всего 2,1%]. Среди аллелей HLA-B только один аллель имел частоту более 10% - B*07:02:01:01 (12,9%]. С частотой от 1 до 10% было выявлено 25 HLA-B аллелей, их кумулятивная частота составила 64%. 49 HLA-B аллелей с частотой встречаемости 0,1-1% имели кумулятивную частоту 19%. Аллели с редкой частотой встречаемости (менее 0,1%] представляли группу из 81 аллеля, их кумулятивная частота равнялась 4%. Два аллеля гена HLA-C имели частоту более 10% -
С*07:02:01:03 (13%) и С*07:01:01:01/16 (10,4%). С частотой встречаемости от 1 до 10% было выявлено 17 HLA-С аллелей, их кумулятивная частота была 64%. 26 HLA-С аллелей с частотой встречаемости 0,1-1% имели кумулятивную частоту 10,5%. Аллели с редкой частотой встречаемости (менее 0,1%) представляли группу из 40 аллелей, их кумулятивная частота равнялась 2%. Среди HLA-DRB1 аллелей три имели частоту более 10% - DRB1*07:01:01 (13,4%), DRB1*15:01:01 (13,3%) и DRB1*01:01:01 с частотой 11,7%. 17 аллелей имели частоту встречаемости от 1 до 10 % (кумулятивная частота 56,3%). 13 HLA-DRB1 аллелей с частотой встречаемости 0,1-1% имели кумулятивную частоту 4,9%. Аллели с редкой частотой встречаемости (менее 0,1%) представляли группу из 12 аллелей, их кумулятивная частота равнялась 0,4%. Наиболее встречаемыми аллелями HLA-DQB1 были три: DQB1*03:01P (20,5%), DQB1*05:01 (14,1%) и DQB1*06:02:01 (12,7%). 10 аллелей с частотой встречаемости от 1 до 10% охватывали еще 50,8% HLA-DQB1 аллелей. 4 аллеля с частотой встречаемости от 0,1-1% имели кумулятивную частоту 1,8%. Аллель DQB1*03:30 встретился всего один раз.
Выводы. Впервые получены данные по распределению HLA-аллелей у русских, типированных на уровне аллельного разрешения по генам класса I (и высокого разрешения по генам класса II). Большое разнообразие HLA-аллелей в исследованной популяции связано в основном с присутствием редких аллелей, хотя большинство индивидов в популяции имеет распространенные аллели. Носительство редких и новых аллелей ведёт к сложностям в подборе HLA-совместимого донора.
Макаренко О.А., Кузьмич Е.В., Андрюшкина А.В.
РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ НАЦИОНАЛЬНОГО РЕГИСТРА ДОНОРОВ КОСТНОГО МОЗГА
ИМЕНИ ВАСИ ПЕРЕВОЩИКОВА
БФ Национальный регистр доноров костного мозга имени Васи Перевощикова, Москва
Введение. По данным Минздрава РФ, потребность в трансплантации костного мозга в РФ составляет порядка 5100 трансплантаций в год. Для пациентов, которым показана аллогенная трансплантация гемо-поэтических стволовых клеток (ТГСК] и нет совместимого донора в семье, необходим поиск неродственного донора костного мозга. Эффективность поиска оптимального неродственного донора для пациентов российских клиник зависит от количества, иммуноге-нетического разнообразия потенциальных доноров и скорости обработки запросов в российских донорских базах. Национальный регистр доноров костного мозга имени Васи Перевощикова (далее - «Национальный РДКМ»] создан в 2017 году. Для организации поиска неродственных доноров в Национальном РДКМ создан отдел поиска доноров костного мозга (далее - «отдел поиска»].
Цель. Оценка эффективности работы Национального регистра доноров костного мозга имени Васи
Перевощикова.
Материалы и методы. По состоянию на 25 апреля 2021 года в составе Национального РДКМ 47 005 потенциальных доноров костного мозга. Разработана Информационная система для обезличенного хранения, систематизации, обработки данных и взаимодействия с медицинскими учреждениями. Определение HLA фенотипов 98% доноров выполнено с помощью технологии секвенирования нового поколения (NGS) на уровне высокого разрешения. Привлечение неродственных доноров в регистр ведется по всей территории РФ. Работу по подбору и активации доноров костного мозга по запросам врачей трансплантационных клиник выполняет отдел поиска доноров. Все этапы работы с донором стандартизованы.
Результаты. Поиск неродственных доноров в Национальном РДКМ осуществляют 5 медицинских учреждений, выполняющих аллогенную трансплантацию гемопоэтических стволовых клеток, и два ме-
