Научная статья на тему 'Биологически активные вещества антиязвенного растительного средства «Вентрофит»'

Биологически активные вещества антиязвенного растительного средства «Вентрофит» Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
149
59
Поделиться

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Лубсандоржиева П. Б., Ажунова Т. А., Шантанова Л. Н., Унагаева А. А., Муханова Л. Х.

На основе рецептуры антиязвенного сбора получено новое комплексное растительное средство, состоящее из отдельных экстрактов компонентов сбора и порошка кориандра. Антиязвенное средство «Вентрофит» содержит 1,30дубильных веществ, 0,18 % антоцианов, 15,0% водорастворимых полисахаридов, 2,12 % глицирризиновой кислоты, 6,16 мг % каротиноидов. Хроматографическими методами в «Вентрофите» идентифицированы рутин, гиперозид, олеаноловая, урсоловая, кофейная, феруловая, глицирризиновая кислоты, в-каротин. На основе изучения качественного и количественного состава основных групп биологически активных веществ «Вентрофита» для его стандартизации выбраны спектрофотометрические методики определения флавоноидов и каротиноидов.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Лубсандоржиева П. Б., Ажунова Т. А., Шантанова Л. Н., Унагаева А. А., Муханова Л. Х.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Текст научной работы на тему «Биологически активные вещества антиязвенного растительного средства «Вентрофит»»

Химия растительного сырья. 2006. №1. С. 59-64.

УДК 633.88

БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА АНТИЯЗВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА «ВЕНТРОФИТ»

© П.Б. Лубсандоржиева , Т.А. Ажунова, Л.Н. Шантанова, А.А. Унагаева, Л.Х. Муханова

Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, ул Сахьяновой, 6, Улан-Удэ, 670047 (Россия) E-mail bpunsic@mail.ru

На основе рецептуры антиязвенного сбора получено новое комплексное растительное средство, состоящее из отдельных экстрактов компонентов сбора и порошка кориандра. Антиязвенное средство «Вентрофит» содержит 1,30% дубильных веществ, 0,18% антоцианов, 15,0% водорастворимых полисахаридов, 2,12% глицирризиновой кислоты, 6,16 мг % каротиноидов. Хроматографическими методами в «Вентрофите» идентифицированы рутин, гиперозид, олеаноловая, урсоловая, кофейная, феруловая, глицирризиновая кислоты, Р-каротин.

На основе изучения качественного и количественного состава основных групп биологически активных веществ «Вентрофита» для его стандартизации выбраны спектрофотометрические методики определения флавоноидов и каро-тиноидов.

Введение

На основе изучения опыта традиционной медицины ранее был разработан состав антиязвенного сбора из 9 видов растительного сырья [4]. Для повышения фармакотерапевтической эффективности антиязвенного сбора было получено комплексное растительное средство, представляющее собой смесь экстрактов из отдельных компонентов сбора и порошка кориандра в тех же весовых частях, что и исходный сбор, и условно названное «Вентрофитом».

Цель данной работы - установление качественного и количественного содержания биологически активных веществ полученного средства для выбора методик стандартизации.

Экспериментальная часть

В состав «Вентрофита» входят: сухой экстракт из соцветий календулы лекарственной (Calendula officinalis L.) - 25 ч; сухой экстракт из листьев подорожника большого (Plantago major L.) - 10 ч; сухой экстракт из травы сушеницы топяной (Gnaphalium uliginosum L.s.l.) - 5 ч; сухой экстракт из корней солодки (Glycyr-rhiza glabra L.) - 10 ч; сухой экстракт из корней девясила (Inula helenium L.) - 5 ч; сухой экстракт из плодов боярышника (Crataegus L.) - 15 ч; сухой экстракт из плодов шиповника (Rosa L.) 20 ч; сухой экстракт из плодов облепихи (Hippophae rhamnoides L.) - 5 ч; мелкоизмельченный порошок плодов кориандра (Co-riandrum sativum L.) - 5 ч. Сухие экстракты из отдельных компонентов сбора получены в лаборатории медико-биологических исследований Института общей и экспериментальной биологии СО РАН. Параметры экстракции приведены в таблице 1.

Для получения сухих экстрактов растительный материал измельчали до размера частиц 1-2 мм, загружали в экстрактор, заливали экстрагентом в объеме, соответствующем соотношению сырье : экстрагент для каждого вида сырья, экстрагировали при температуре, подобранной для каждого вида, при постоянном помешивании. Извлечение фильтровали в сборник, к шроту добавляли экстрагент в объеме, равном слитому. Экстракцию повторяли в условиях, указанных в таблице 1. Извлечения фильтровали, объединяли, концентрировали до 1/10 первоначального объема, высушивали в вакуум-сушильном шкафу при определен-

* Автор, с которым следует вести переписку.

ной температуре. Полученный сухой экстракт измельчали. Плоды Coriandrum sativum L. измельчали до размера частиц 0,25-0,5 мм и использовали в виде порошка, так как при экстракции, удалении растворителя, вакуумной сушке основные действующие вещества - эфирные масла могут улетучиться. Взвешенные количества сухих экстрактов смешивали с порошком кориандра и тщательно перемешивали.

Экстрактивные вещества, извлекаемые из антиязвенного сбора последовательной экстракцией, составляют: гексаном - 4,38%; хлороформом - 2,01%; 96%-ным спиртом - 14,37%; водой - 19,44% (в сумме -40,40%). Из исходного антиязвенного сбора методом мацерации 40% этанолом (I экстракция при температуре 18-20 °С, II - 60 °С, III - 90 °С, соотношение сырье :экстрагент - 1:10) получен сухой экстракт. Выход экстракта из сбора - 38,0% от исходной массы сбора.

Для изучения качественного состава «Вентрофита» и экстракта из сбора хроматографическими методами получены гексановая (каротиноиды), хлороформная (тритерпеновые кислоты, агликоны флавоноидов), этилацетатная (гликозиды флавоноидов, фенолокислоты) фракции. Использованы системы растворителей: для тонкослойной хроматографии на силикагеле (ТСХ) - бензол - этилацетат - метанол (50 : 1 : 1) - I; бензол - ацетон (8 : 2) - II; бензол - метанол (9 : 1) - III; бензол - диэтиловый эфир (1 : 1) - IV); гексан -этилацетат (7 : 3) - V; гексан - этилацетат - муравьиная кислота (15 : 9 : 2) - VI; этилацетат - муравьиная кислота - уксусная кислота - вода (100 : 11 : 11 : 26) - VII; бензол - этилацетат (2 : 1) - VIII; толуол - этил-ацетат (93 : 7) - IX; для бумажной двумерной хроматографии (БХ) - 15% уксусная кислота - X; 1-бута-нол - уксусная кислота - вода (4 : 1 : 2) - XI; Для обнаружения сесквитерпеновых лактонов использованы 20% раствор фосфорномолибденовой кислоты, 1% раствор ванилина в концентрированной серной кислоте, тритерпеновых соединений - 20% раствор фосфорновольфрамовой кислоты - ФВК, фенолокислот - пары аммиака. Для идентификации БАВ использованы достоверные образцы химически чистых веществ.

Таблица 1. Условия экстракции отдельных компонентов антиязвенного сбора для получения сухих экстрактов из них

Наименование Степень измельче- Тип экстрагента, Соотношение Температура Кратность и время экстракции

сырья ния сырья, мм концентрация сырье : экстрагент экстракции, оС

Calendula offi- 1-2 мм Этанол -80% (1-11 экс- 1:10 18-20 (I- IV экс- По 2 ч четыре

cinalis L.(со- тракции), 50% (Ш-1У тракции) экстракции

цветия) экстракции)

Rosa L. 0,5-1,0 мм Этанол 96%(1—11 экс- 1 :1 0 18-20 (I-II экс- По 2 ч четыре

(плоды) тракции), вода (Ш-1У) тракции), 30-40 (III-IV) экстракции

Crataegus L. 2,0 мм Этанол 1:20-1:21 35-40 По 6 ч две экс-

(плоды) I пример -38% II пример -40% III пример -42% тракции

Plantago major 3,0 мм Вода очищенная 1:18-1:20 95 ± 2 По 1,5 ч две

L. (листья) экстракции

Glycyrrhiza 1,0-2,0 мм Этанол 1:14-1:15 95 ± 2 По 1 ч две экс-

glabra L. Кор- I пример - 40% тракции

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

ни и корне- II пример -42%

вища III пример -45%

Gnaphalium 1,0-2,0 мм Этанол 1:10-1:12 95 ± 2 По 1 ч две экс-

uliginosum I пример -40% тракции

L.s.l. (трава) II пример - 43% III пример-45%

Hippophae 0,5-1,0 мм Этанол 1:10-1:12 95 ± 2 По 1 ч три экс-

rhamnoides L. I пример -38 % тракции

(плоды) II пример -40% III пример -45%

Inula helenium 2,0 мм Этанол 1:20-1:22 95 ± 2 По 2 ч две экс-

L. (корни и I пример -35% тракции

корневища) II пример -40% III пример-45%

Количественное определение БАВ в «Вентрофите» и экстракте из сбора проведено по описанным в литературе методам: флавоноидов, дубильных веществ, антоцианов, водорастворимых полисахаридов - по методикам Государственной Фармакопеи СССР XI изд. (ГФ XI); аскорбиновой кислоты - фотоколоримет-рическим методом [9]; каротиноидов [2], тритерпеновых сапонинов [7], кумаринов [11] - спектрофотометрическим методом; глицирризиновой кислоты [12], рутина, гиперозида [3, 5] - хроматоспектрофотометрическим методом. Данные анализов приведены в таблице 2.

Определение флавоноидов. 5,0 г (точная навеска) «Вентрофита» обработали 200 мл гексана (4 раза по 50 мл), затем хлороформом (4 раза по 100 мл), остаток экстракта растворяли в горячей воде, отфильтровали, после охлаждения обработали этилацетатом (4 раза по 50 мл). Извлечения концентрировали на роторном испарителе, сухой остаток растворяли в 50 мл 70%-ного этанола. В извлечениях определяли содержание флавоноидов спектрофотометрическим методом с использованием реакции комплексообразования флавоноидов с хлоридом алюминия при 410 нм (ГФ XI).

Для определения содержания гиперозида и рутина 0,5 г экстракта растворяли в 50 мл 70 %-ного этанола. Хроматографическую пластинку с закрепленным слоем силикагеля делили на четыре полосы. Первая полоса служила фоном (холостой опыт), на вторую наносили 0,2 мл спиртового раствора экстракта, на третью - пробы стандартных веществ - гиперозида и рутина. Для хроматографического разделения флаво-ноидов на тонком слое силикагеля использована система растворителей этилацетат - муравьиная кислота -уксусная кислота - вода (100 : 11 : 11 : 26). Параллельно хроматографировали аликвоты «свидетелей» - по 0,1 мл 0,05% спиртовых растворов рутина и гиперозида. Пятна флавоноидных гликозидов рутина (Rf -

0,35) и гиперозида (Rf - 0,6) на уровне «свидетелей» соскабливали с пластинки, элюировали 10 мл 50% этанола. В УФ спектре элюатов наблюдаются максимумы поглощения при 363-365 нм, характерные для рутина и гиперозида. Данные анализов приведены в таблице 3.

Результаты и обсуждение

В отдельных фракциях экстрактов хроматографическими методами в присутствии достоверных образцов идентифицированы: рутин, Rf - 0,35 (ТСХ, VII); 0,48 (БХ, X); 0,18 (БХ, XI); гиперозид, Rf - 0,60 (ТСХ, VII); 0,30 (БХ, X); 0,41 (БХ, XI); олеаноловая кислота, Rf - 0,40 (ТСХ, II); 0,65 (ТСХ, VIII); урсоловая кислота, Rf - 0,55 (ТСХ, VIII); кофейная кислота, Rf - 0,46 (ТСХ, VI); 0,48 (БХ, X); 0,70 (XI); феруловая кислота, Rf - 0,28 (ТСХ, VI), 0,23 (БХ, X); 0,78 (БХ, XI); глицирризиновая кислота, Rf - 0,36 (ТСХ, XIII); Р-каротин, Rf - 0,9 (ТСХ, II, IV, V).

Гексановая фракция «Вентрофита» составила 7,95%, хлороформная - 26,73%, этилацетатная - 11,92%, водная - 38,65% от исходной массы. В «Вентрофите» содержание липофильных веществ больше, чем в экстракте, полученном из сбора (табл. 2).

Известно, что антиязвенными свойствами обладают сумма флавоноидов из соцветий календулы (Ка-лефлон); плантаглюцид - полисахаридный комплекс из листьев Plantago major L.; облепиховое масло из плодов Hippophae rhamnoides L.; холосас и каротолин из плодов Rosa L. [6]; сумма сесквитерпеновых лак-тонов Inula helenium L. - Алантон [10]. Антиязвенными и противовоспалительными свойствами обладают и индивидуальные соединения, содержащиеся в компонентах сбора. Так, урсоловая кислота оказывает противовоспалительное действие, ограничивает распространение язв, ингибирует рост раковых клеток, проявляет антивирусные, иммуномодулирующие свойства [8]. Глицирризиновая кислота Glycyrrhiza glabra L. обладает противовоспалительной и антиязвенной активностью [1]. Наиболее эффективны при язвенной болезни флавоноиды, обладаюшие широким спектром фармакологической активности: антиязвенной, спазмолитической, антимикробной, противовоспалительной [13, 14].

Для стандартизации «Вентрофита» с учетом вклада отдельных групп веществ в антиязвенный эффект выбраны спектрофотометрические методы определения флавоноидов (ГФ XI) и каротиноидов в пересчете на Р-каротин [2]. Выбранные методы в отличие от других менее трудоемки и не требуют дорогостоящих реактивов, сорбентов и растворителей.

Большая часть флавоноидных веществ содержится в водорастворимой фракции «Вентрофита»: в экстракте после удаления липофильной фракции гексаном и хлороформом содержание флавоноидов не уменьшается (табл. 3). Доминирующие флавоноидные гликозиды в «Вентрофите» - рутин и гиперозид содержатся в соотношении 2,3:1,0 и в качестве стандартного вещества выбран рутин.

Таблица 2. Количественное содержание биологически активных веществ в экстрактах

Наименование Биологически активные вещества в экстрактах

«Вентрофит» Сухой экстракт из сбора

Дубильные вещества, в пересчете на таннин, % Антоцианы, в пересчете на цианидин- 3,5-диглюкозид, % Тритерпеновые сапонины, в пересчете на урсоловую кислоту, % Водорастворимые полисахариды, % Кумарины, в пересчете на скополетин, % Глицирризиновая кислота, % Каротиноиды, в пересчете на Р-каротин, мг % 1,30 ± 0,06 0,18 ± 0,01 0,072 ± 0.001 15,0 ± 0,4 0,078 ± 0.001 2,12 ± 0.02 6,16 ± 0,11 1,33± 0.05 0,38 ± 0.02 0,058 ± 0,001 3,46 ± 0.10 0,070 ± 0,001 6,79 ± 0,10 0,90 ± 0,01

Таблица 3. Количественное содержание флавоноидов в извлечениях из экстрактов

Наименование Флавоноиды, в пересчете на рутин, в %

Вентрофит Экстракт сухой из сбора

Исходный экстракт 2,26 ± 0.01 2,74 ± 0.01

Хлороформная фракция 0,062 ± 0.001* 0.007 ±0.001*

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Этилацетатная фракция 1,54 ± 0.01 1,03 ± 0.01

Водная фракция 1.38 ± 0.01 0,94 ± 0,01

Экстракт, после удаления липофильных 2,23 ±0.02 1,88 ±0.02

веществ

Рутин в экстракте 0.39 ± 0.02 0.38 ± 0.02

Гиперозид в экстракте 0,17 ± 0.01 0.19 ± 0.01

* В пересчете на лютеолин.

Для количественного определения флавоноидов в «Вентрофите» достаточно 2-кратной экстракции 70% этанолом в соотношении сырье : экстрагент (1 : 50) и при температуре водяной бани 80-90 °С. Относительная ошибка среднего результата количественного определения флавоноидов в «Вентрофите» составляет 0,62%, отдельного - 2,07%.

В УФ спектрах гексановых извлечений «Вентрофита» наблюдается максимум поглощения при 450 нм, характерный для Р-каротина. Подобраны оптимальные условия для наиболее полной экстракции кароти-ноидов из «Вентрофита». Данные анализа приведены в таблице 4. При однократной экстракции кароти-ноидов гексаном в соотношении 1 : 20 извлекается 74,5%, при второй экстракции (соотношение сырье : экстрагент - 1 : 20) извлекается 15,2% каротиноидов от содержания в исходном экстракте. Третья экстракция (1 : 20) извлекает 9,0% каротиноидов, поэтому для максимального извлечения каротиноидов достаточно 2-кратной экстракции при соотношении сырье : экстрагент 1 : 20, первая экстракция проводится в течение 2 ч, вторая - 0,5 ч. Относительная ошибка среднего результата определения каротиноидов в «Вентрофите» составляет 1,18%, отдельного определения - 3,03%.

Таблица 4. Подбор условий для количественного определения каротиноидов в «Вентрофите»

Испытуемый параметр Каротиноиды, в пересчете на Р-каротин, мг % (а..с.с.)

1 2

1. Соотношение сырье : экстрагент

1 : 10, время экстракции - 2 ч 5,67

1 : 20 6,20

1 : 25 6,64

2. Кратность экстракции, время каждой экстракции - 2 ч

I. 1). 1 : 10 5,678

2) 1 : 10 1,627

3) 1 : 10 0,474

Итого : 1 : 30 Итого: 7,778 мг%

II. 1) 1 : 15 5,832

2) 1 : 15 0,985

3) 1 : 15 0,576

Итого: 1 : 45 Итого : 7,394

III. 1) 1 : 20 6,277

2) 1 : 20 1,283

3) 1 : 20 0,763

Итого: 1 : 60 Итого : 8,323

Продолжение таблицы 4

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

1 2

IV. 1). 1 : 25 6,643

2). 1 : 25 1,308

3). 1 : 25 0,475

Итого: 1 : 75 Итого: 8,436 мг%

3. Время экстракции, соотношение 1 : 20

1. 60 мин 5,22

2. 90 мин. 5,35

3. 120 мин 5,44

4. 150 мин 5,41

Время второй экстракции, первая - 2 ч

1. 30 мин 1,253

2. 60 мин 1,254

3. 90 мин 1,259

Таблица 5. Количественное содержание флавоноидов и каротиноидов в «Вентрофите»

Серия Влажность, % Флавоноиды, в пересчете на рутин, % Каротиноиды, в пересчете на Р-каротин, мг%

07.06.04. 3,92 2,26 6,18

10.05.04. 3,45 2,98 6,57

14.06.04. 3,87 2,09 5,98

02.07.04. 3,55 2,23 6,50

13.09.04. 3,82 2,42 6,36

В таблице 5 приведены данные о содержании флавоноидов и каротиноидов в «Вентрофите» в разных сериях. Полученные данные показывают, что содержание флавоноидов в суммарном экстракте должно быть не менее 2%, каротиноидов - не менее 5 мг%.

Выводы

Антиязвенное средство «Вентрофит» содержит 1,30% дубильных веществ; 0,18% антоцианов; 15,0% водорастворимых полисахаридов; 2,12% глицирризиновой кислоты; 6,16 мг % каротиноидов. Хроматографическими методами в «Вентрофите» идентифицированы рутин, гиперозид, олеаноловая, урсоловая, кофейная, феруловая, глицирризиновая кислоты, Р-каротин.

На основе изучения качественного и количественного состава основных групп биологически активных веществ «Вентрофита» для его стандартизации предлагаются спектрофотометрические методы определения флавоноидов и каротиноидов.

Список литературы

1. Давыдова В.А., Балтина Л.А., Сердюк Н.Г. и др. Противовоспалительные и противоязвенные свойства новых эфиров глицирризиновой кислоты // Химико-фармацевтический журнал. 1997. №8. С. 23-25.

2. Евдокимова О.В., Самылина И.А., Нестерова О.В. Определение содержания суммы фосфолипидов и каротиноидов в плодах некоторых видов боярышника // Фармация. 1992. № 6. С. 70-72.

3. Левашова И.Г., Комиссаренко В.П., Жданова В.П., Шатунов Л.В. Гиперозид - как стандарт для контроля качества лекарственных средств и средств медицинского микроанализа // Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств. М., 1991. Т. 2, ч. 2. С. 37-38.

4. Лубсандоржиева П.Б., Унагаева А.А., Муханова Л.Х., Шантанова Л.Н., Ажунова Т.А. Создание антиязвенно-го сбора и содержание в нем биологически активных веществ // Развитие традиционной медицины в России. Улан-Удэ, 2004. С. 71-72.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

5. Лукьянчиков М.С. Количественное определение флавоноидов в некоторых представителях семейства Fa-baceae // Химия природных соединений. 1984. №1. С. 43.

6. Машковский М. Д. Лекарственные средства: В 2 т. 14-е изд. М., 2000. Т. 1. 540 с.; Т. 2. 608 с.

7. Муравьев И.А., Шатило В.В., Семенченко В.Ф. Спектрофотометрический метод количественного определения урсоловой кислоты // Химия природных соединений. 1972. №6. С. 738.

8. Покровский А.Г., Ильичева Т.Н., Проняева Т.Р. и др. Иммуномодулирующая активность производных урсоловой кислоты //Доклады Академии наук. 1999. Т. 369. №3. С. 414-415.

9. Приступа Е. А., Понов Д. М. Совершенствование технологии приготовления и контроля качества витаминных чаев // Актуальные проблемы фармацевтической технологии: Науч. труды ВНИИФ. М., 1994. Т. XXXII. С. 151-159.

10. Соколов С.Я., Замотаев И.П. Справочник но лекарственным растениям {Фитотерапия). М., 1990. 428 с.

11. Чемесова И.И., Чубарова С.Л., Саканян Е.И. и др. Спектрофотометрический метод количественной оценки содержания полифенолов в сухом экстракте из надземной части Melilotus officinalis {L.) Pall. и в его лекарственной форме {таблетках) // Растительные ресурсы. 2000. Т. 36. Вып. 1. С. 86-91.

12. Якубова М. Р., Генкина Г.Л., Шакиров Г.Г. УФ спектрофотометрическое определение глицирризиновой кислоты в Glycyrrhiza glabra // Химия природных соединений. 1977. №6. С. 802-806.

13. Brasseur T. Medikaments renfermant des flavonoids // J. Pharm. Belg. 1989. V. 44. №6. P. 403-410.

14. Elliott Middleton Jr. The flavonoids // Trends in Pharmac. Sci. 1984. Vol. 5. №8. P. 335-338.

Поступило в редакцию 11 октября 2005 г.

После переработки 24 марта 2005 г.