CC BY
146
лзЕЬПу иП111 ЛГЬПу
УДК 616.981.452:612-015
Ж.А. Коновалова, С.В. Балахонов, В.И. Дубровина, Т.П. Старовойтова
АСПАРТАЗА И ФОСФОГЛЮКОМУТАЗА -МАРКЕРЫ ВИРУЛЕНТНОСТИ YERSINIA PESTIS (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока (Иркутск)
В обзоре литературы приведен анализ факторов вирулентности возбудителя чумы. Представлена краткая, характеристика биохимических свойств и питательных потребностей штаммов чумного микроба, циркулирующих на территории Горно-Алтайского высокогорного и Тувинского природных очагов Сибири. Показана необходимость определения аспартазы и фосфоглюкомутазы для дифференциации изолятов Yersinia pestis subsp. pestis и Yersinia pestis subsp. altaica.
Ключевые слова: возбудитель чумы, ферменты, маркеры вирулентности
ASPARTASE AND PHOSPHOGLUCOMUTASE -VIRULENCE MARKERS OF YERSINIA PESTIS (LITERATURE REVIEW)
Sh.A. Konovalova, S.V. Balakhonov, V.I. Dubrovina, T.P. Starovoitova
Irkutsk Antiplague Research Institute of Siberia and Far East, Irkutsk
The literature review contains analysis of virulence factors of plague agent. Brief characteristic of biochemical behaviors and nutritious requirements of Yersinia pestis of Gorny Altai and Tuva natural plague foci of Siberia is representing. We are offering to investigate functional state of aspartase and phosphoglucomutase which are identifying virulence factors so as to differentiate isolates of Yersinia pestis subsp. pestis and Yersinia pestis subsp. altaica.
Key words: plague agent, enzymes, virulence factors
КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БИОХИМИЧЕСКИХ
СВОЙСТВ И ПИТАТЕЛЬНЫХ ПОТРЕБНОСТЕЙ ИЗОЛЯТОВ ЧУМНОГО МИКРОБА, ВЫДЕЛЕННЫХ НА ТЕРРИТОРИИ СИБИРИ
В настоящее время на территории Сибири существуют два действующих активных природных очага чумы: Тувинский и Горно-Алтайский высокогорный. Возбудитель чумы, циркулирующий на территории природных очагов южной Сибири, отличается по степени вирулентности для различных видов диких и лабораторных животных, плазмидному составу, питательным потребностям и ферментативной активности [1, 4]. Наибольшая эпизоотическая активность выявляется в ГорноАлтайском высокогорном очаге [10].
В Тувинском горном очаге циркулирует чумной микроб, который по биологическим свойствам относится к Yersinia pestis subsp. pestis, имеет универсальную высокую вирулентность и эпидемическую значимость [4, 11]. Выявленные в этом очаге штаммы чумного микроба не ферментируют рамнозу и ме-либиозу, не чувствительны к пестицину I, имеют высокий уровень продукции изоцитратлиазы, которая катализирует обратимую реакцию альдольного расщепления изоцитрата на глиоксилат и сукцинат [9, 11].
Отличительными признаками тувинских штаммов чумного микроба являются их питательные потребности в метионине и цистеине, и наличие в геноме дополнительной четвертой плазмиды рТР33 с молекулярной массой 22 МД [4].
Возбудитель чумы, циркулирующий в Горно-Алтайском высокогорном очаге, выделен в самостоятельный подвид Y. pestis subsp. altaica [4, 11]. Штаммы алтайского подвида ферментируют рамнозу и мелибиозу, чувствительны к пестицину
I, не проявляют изоцитратлиазной активности, избирательно вирулентны для лабораторных животных [8, 9].
Многие зарубежные исследователи обозначают штаммы алтайского подвида как Pestoides (А, В, С), которые в большинстве случаев сохраняют обычную способность ферментировать сахара — рамнозу и мелибиозу. Данные штаммы могут также обладать известными факторами вирулентности эпидемичных изолятов. Однако энзоотичные штаммы являются авирулентными или слабовирулентными для многих видов млекопитающих, включая морских свинок и приматов, но сохраняют вирулентность для грызунов семейства Muroidea [24]. Хотя изоляты pestoides обладают полимор-
физмом в V-антигенe [19] и температурозависимой системой секреции III типа, кодирующейся pCD/ pYV, маловероятно, что эти различия влияют на биологическую активность [13].
Основными свойствами, по которым проявляется атипизм выделенных штаммов алтайского подвида, являются отсутствие образования пести-цина и фибринолизин-плазмокоагулазной активности, что сопровождается элиминацией плазмиды pPst-6 МД, нестабильность пигментсорбирующей способности, вплоть до полного отсутствия Psb+-клеток у свежевыделенных штаммов, отсутствие зависимости роста при 37 °С от ионов Са+ + , что также сопровождается элиминацией Cad-плазмиды [3]. С 1990 г. практически ежегодно выделяются штаммы, имеющие дополнительную ауксотроф-ность по триптофану [4, 11]. Причина отсутствия денитрификации у штаммов алтайского подвида связана с наличием вставки нуклеотида тимина в 302 позиции гена ssuA, которая приводит к сдвигу рамки считывания и нарушению структуры кодируемого белка [9]. Возможно, что избирательная вирулентность неосновных подвидов обусловлена либо изменением активности антиокислительных ферментов, либо их изоформ [5].
Наблюдение за циркуляцией Y. pestis subsp. altaica, проявляющих «избирательную» вирулентность, дало повод для сомнения в их способности вызывать заболевания людей типичной чумой, способной к эпидемическому распространению. В литературе отмечается отсутствие случаев антропогенного распространения возбудителя чумы алтайского подвида и сообщается об авирулентности подобных вариантов Y. pestis для людей в опытах на добровольцах [13], что послужило основанием для заключения о нецелесообразности проведения профилактических мер при обнаружении подобных изолятов. Окончательное решение этой проблемы во многом зависит от детального изучения штаммов неосновных подвидов и совершенствования приемов их детекции, дифференциальной диагностики и определения патогенетической активности. Существует обоснованное мнение о том, что наряду с бактериологическими исследованиями и тестированием на различных биологических моделях, применение молекулярно-биологических методов представляется обязательным и незаменимым [15].
Следует отметить, что большинство из фенотипических признаков, используемых для внутривидовой дифференциации возбудителя чумы, не абсолютны. Каждый из них может, как полностью отсутствовать, так и быть выражен в наивысшей степени [13].
В связи с циркуляцией в природе Y. pestis с атипичными свойствами, отличающими их от характерного для конкретного очага варианта возбудителя, вызывает интерес сравнительный анализ реакций макроорганизма на подобные изоляты, основанный на сопоставлении ряда параметров, характеризующих функцию ключевых систем жизнеобеспечения биомоделей при воспроизведении экспериментального инфекционного процесса.
ОБЩИЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О ФАКТОРАХ ПАТОГЕННОСТИ ЧУМНОГО МИКРОБА
Y. pestis — факультативный внутриклеточный патоген. Считается, что он сохраняет внутриклеточное существование только на ранних стадиях инфекции с внеклеточным ростом, доминирующим на поздних стадиях. Тем не менее, детерминанты вирулентности важны как для внутриклеточной, так и внеклеточной защиты. Роль отдельных детерминант в вирулентности чумного микроба установлена, тогда как результаты исследования других детерминант являются спорными, вследствие использования неустановленных или двойных мутантных штаммов, которые могут демонстрировать крайне различные уровни потери вирулентности в зависимости от вида инфицированного животного [1]. Для изучения детерминант вирулентности обычно используют лабораторно пассированные штаммы, которые могут накапливать неопределенные изменения. Тем не менее, эти предполагаемые различия не оказывают, по современным представлениям, неблагоприятных влияний на вирулентность при исследовании на модели мышей [1, 22]. Указанный факт в значительной мере затрудняет оценку характера биологических эффектов тех или иных токсических факторов патогенности возбудителя чумы.
В настоящее время детерминанты вирулентности рассматриваются как факторы, которые обеспечивают выживание, рост и/или передачу, непосредственно заражая хозяина посредством адгезии, нарушения главных защитных ответов хозяина, нарушения клеточного метаболизма или получения основных питательных веществ от хозяина [1].
Принципиальным моментом в развитии представлений о регуляции и проявлении вирулентности является вывод о том, что их экспрессия происходит только в соответствующих условиях. В период пребывания микроорганизмов в окружающей среде факторы патогенности не экспрессируются. При внедрении патогена в организм хозяина у микроорганизма возникает необходимость в синтезе факторов, обеспечивающих его адаптацию к новым условиям. Почти все факторы патогенности бактерий строго регулируются, и их экспрессия связана с различными сигналами окружающей среды (температура, концентрация ионов, осмо-лярность, количество железа, рН, наличие источника углерода, содержание кислорода и др.). Так, экспрессия генов инвазии обычно включается на ранней стадии инфекции, а ее подавление происходит при проникновении бактерии внутрь клеток хозяина [1, 13, 22, 23].
Цикл жизни Y. pestis предполагает, что детерминанты вирулентности, необходимые для выживания в млекопитающих и в блохах — одинаковы. Для энзоотичной циркуляции Y. pestisв природных очагах чумы требуется активное инфицирование хозяев-грызунов и размножение в блохах большого количества бактерий до блокообразования в пред-желудке, в сфинктер-подобном органе, который разделяет желудок и пищевод. Эти факторы имеют
248
лШЛШ 11111111111
решающее значение для продолжительной трансмиссии бактерий новым хозяевам и, следовательно, для сохранения очагов инфекции в природной окружающей среде. Микроорганизм должен быть способным противостоять системам защиты хозяина, размножаться и вызывать бактериемию для дальнейшего переноса блохами новому хозяину. Каждый из этих этапов жизненного цикла Y. pestis зависит от выработки специфических факторов бактериальной вирулентности, которые могут действовать совместно или раздельно [22].
Многие из естественных очагов чумы географически не связаны и поэтому разные экологические условия необходимы для выживания Y. pestis и ее распространения в таких различных экобиосистемах. В результате возникает значительное разнообразие в генотипах и фенотипах среди чумных изолятов в разных природных очагах [1, 6, 11, 13].
Развитие методологии молекулярной микробиологии — возможность определения полной нуклеотидной последовательности генома отдельных микроорганизмов, появление технологии ПЦР и биочипов, разработка новых методов клеточной иммунологии, широкое использование физических методов изучения структурно-функциональной организации отдельных биомолекул и т.д., дало возможность по-новому оценить бактериальные факторы патогенности. Полученные с помощью современных подходов экспериментальные данные легли в основу современных классификаций бактериальных факторов, обеспечивающих патогенность микроорганизмов, их способность к персистенции в организме хозяина или различные формы адаптации болезнетворных бактерий к экологической нише [13, 22, 23].
В работе А.П. Анисимова [1] факторы патогенности Y. pestis предложено разделить на девять групп:
1. Факторы распространения, обеспечивающие генерализацию инфекции: ген активатора плазминогена (Pla), секретируемый белок YopM, нейраминидаза, факультативное внутриклеточное паразитирование и устойчивость к бактерицидному действию сыворотки;
2. Адгезивная активность: пили адгезии, Pla и капсульный антиген фракции I (FI);
3. Факторы, предотвращающие инициирование иммунного ответа хозяина и/или препятствующие опсонизации: экранирование ЛПС, антигенная мимикрия, образование L-форм, факторы, способные инактивировать клеточные элементы или гуморальные факторы иммунной системы (FI, белок «usher» (привратник) капсульного антигена (Caf1A), мышиный токсин (Ymt), V-антиген, Yops, Pla, пили адгезии (pH6), нейраминидаза и иерси-ниа-бактин);
4. Защита бактерий от захвата интактными фагоцитами хозяина: капсула, адгезины, Yops, нейраминидаза, pH6, FI;
5. Внутриклеточное паразитирование: переживание внутри макрофагов (каталаза, суперок-сиддисмутаза, пероксидаза, FI, Ymt, аденилат-ци-
клаза, рН6, белки S-слоя, R форма липолисахарида (ЛПС); проникновение в клетки, не способные к фагоцитозу;
6. Устойчивость к бактерицидному действию сыворотки (ЛПС);
7. Антигенная изменчивость: капсула, V;
8. Отвлечение иммунного ответа на «ложную» цель: Б! Р1а, рН6;
9. Факторы, определяющие развитие инфекционно-токсического шока: ЛПС, Ymt.
Интоксикация при чумной инфекции обусловлена способностью различных ферментных факторов чумного микроба нарушать окислительное фосфорилирование и транспорт электронов в ферментной цепи за счет торможения энзиматической активности дегидрогеназ [2].
Исследования, касающиеся дыхательных ферментов у чумного микроба, в большинстве случаев носят разрозненный характер и связаны, чаще всего, с практическими интересами микробиологов при разработке новых дифференциальных и бактериологических тестов.
Известно, что основной путь распада глюкозы у чумного микроба — гликолитический. С помощью этого механизма утилизируется до 95 % распавшейся глюкозы. На долю гексозомонофосфатного шунта приходится около 5 %. Важно, что по соотношению путей распада вирулентные и авирулент-ные штаммы не отличаются между собой [7, 8].
Активность ферментов гликолиза (гексо-киназы, фосфогексоизомеразы, альдолазы, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы) у чумного микроба значительно выше активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, 6-фосфо-глюконатдегидрогеназы и транскетолазы. Из перечисленных ферментов апотомического пути наиболее низкой активностью обладает глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа. Тем не менее, дегидроге-назная активность и вирулентность клеток чумного микроба не коррелируют между собой [7, 8].
Чумной микроб обладает системой ферментов, катализирующих передачу водорода от окисляемого субстрата на кислород. Показано, что цитоплазматические мембраны и бесклеточный экстракт чумного микроба обладают НАДН и НАДФН-дегидрогеназной активностью и имеют один и тот же кофактор ФАД, но существенно отличаются по прочности связи с мембранами клетки. Дегидрогеназы чумного микроба можно разделить на две группы. К первой относятся растворимые НАД- и НАДФ-зависимые ферменты. Вторую группу составляют дегидрогеназы лактата, сукци-ната, НАД-Н и НАДФ-Н, связанные с мембраной и непосредственно входящие в первый сегмент дыхательной цепи возбудителя чумы. На активность дегидрогеназ чумного микроба влияют условия и сроки его культивирования [7, 8].
У возбудителя чумы выявлены и охарактеризованы антиокислительные ферменты: супероксид-дисмутаза, каталаза и пероксидаза. Установлено, что супероксиддисмутазная и каталазная активности являются термоиндуцибельными признаками,
тем не менее, активность супероксиддисмутазы не связана с носительством собственных плазмид [5].
Известно, что в реализации защитных механизмов чумного микроба от воздействия кислородных радикалов фагоцитов ключевую роль играет ката-лаза и является важным фактором вирулентности Y. pestis и Y. pseudotuberculosis [21]. Тем не менее, корреляция между высокой каталазной активностью и вирулентностью Y. pestis в ряде случаев не установлена [7].
К вышеперечисленным факторам вирулентности чумного микроба предложены также липо-протеин внешней мембраны, адгезины, позволяющие бактериям прикрепляться к эпителиальным клеткам, фосфоглюкомутаза и аспартаза, которые вносят существенный вклад в реализацию патогенных свойств возбудителя [17, 19, 20].
ФОСФОГЛЮКОМУТАЗА
На основании имеющихся в литературе данных установлено, что аутоаггрегация является важным фактором вирулентности чумного микроба. Рядом авторов установлено, что фосфоглюкомутаза требуется для эффективной аутоаггрегации Y. pestis и антимикробной пептидной резистентности [19, 20]. Фосфоглюкомутаза (КФ 2.7.5.1) — фермент, катализирующий взаимопревращение между глюкозо-6-фосфатом и глюкозо-1 -фосфатом и участвующий в процессах анаэробного расщепления глюкозы и синтеза гликогена в организме.
Превращение глюкозо-6-фосфата в глюкозо-1-фосфат инициирует путь, ведущий к формированию нуклеотидных сахаров, таких как уридиндди-фосфат-глюкоза и уридиндифосфат-галактоза. Эти нуклеотидные сахара участвуют в дальнейших модификациях на клеточных компонентах, таких как ЛПС (особенно коровая часть), тейховые кислоты и секретируемые матриксные компоненты. Утрата фосфоглюкомутазной активности у бактерий повышает их чувствительность к антимикробным пептидам и фосфоглюкомутазазависимым модификациям бактериальной поверхности, которые являются основными для вирулентности многих патогенных организмов.
АСПАРТАЗА
Аспартаза (КФ 4.З.1.1.) фермент семейства аммиак-лиаз (AspA), специфически расщепляющий углерод-азотные связи. AspA катализирует деаминирование L-аспартата с образованием фумарата, компонента цикла трикарбоновых кислот, участвующего в катаболизме L-аспартата и метаболически связанных аминокислот. Известно, что низкий кальциевый ответ Y. pestis сопровождается выделением L-аспарагиновой кислоты при расходе экзогенного L-глютомата, вызывая потерю метаболического углерода, который может сохраняться в виде оксалоацетата и его восстановление посредством фосфоенол-пируват карбоксикиназы и фосфоенолпируват карбоксилазы ведет к стимулирующему эффекту CO2 на рост Y. pestis [24].
Утрате гена, кодирующего AspA, оказывает неблагоприятное воздействие на макроорганизм. Эта мутация свидетельствует о pCD/pYV-зависимой питательной потребности чумного микроба в Ca2+ при 37 °С с участием метаболического L-глутамата [15, 16, 18]. Что, в свою очередь, в условиях in vivo способствует выделению L-аспарагиновой кислоты, изменяя равновесие пулов аминокислот с последующим снижением энергетического заряда аденилата и действуя разрушительно на макроорганизм. В связи с этим, активная форма AspA является биомаркером авирулентности Y. pestis для человека. Установлено, что бесклеточные экстракты штаммов Y. pestis subsp. altaica экспрессируют AspA в отличие от Y. pestis subsp. pestis [15].
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, обнаружение дополнительных факторов вирулентности Y. pestis является ключом к пониманию патогенеза чумы. Экспериментальные исследования по установлению патогенных эффектов возбудителя и его токсинов на макроорганизм является актуальной проблемой патологической физиологии, поскольку большая часть патогенного потенциала чумного микроба, циркулирующего в природных очагах, для людей остается неизвестной.
Анализ литературных данных по изучаемой проблеме, свидетельствует о необходимости дальнейшего изучения ферментного спектра возбудителя чумы с разными фенотипическими свойствами с целью выявления новых маркеров вирулентности патогена. Сочетание современных методов исследования, в том числе биохимических и/или структурно-биологический анализ позволит усовершенствовать диагностические приемы и ускорить разработку эффективных и безопасных средств вакцинопрофилактики в борьбе с чумой.
ЛИТЕРАТУРА
1. Анисимов А.П. Факторы Yersinia рestis, обеспечивающие циркуляцию и сохранение возбудителя чумы в экосистемах природных очагов // Журн. молекул. генетика, микробиология и вирусология. — 2002. — № 3. — С. 3 — 23.
2. Афанасьева Г.А., Чеснокова Н.П., Дальва-дянц С.М., Кутырев В.В. Эндотоксин Yersinia pestis: особенности структуры, рецепции и механизмов индукции цитопатогенных эффектов (обзор) // Проблемы особо опасных инфекций — Саратов, 2008. - № 4 (98). - С. 43-48.
3. Балахонов С.В. Геномные маркеры возбудителей чумы, псевдотуберкулеза, холеры, бруцеллеза: дисс. ... д-ра мед. наук. — Саратов, 2000. — 263 с.
4. Балахонов С.В. и др. Современное состояние природных очагов чумы Сибири // Ж. инф. патол. - 2009. - Т. 16, № 3. - С. 16-20.
5. Видяева Н.А. и др. Сравнительная характеристика антиокислительных ферментов штаммов Yersinia pestis различных подвидов и Yersinia pseudotuberculosis // Проблемы особо опасных инф. - 2008. - Вып. 96. - С. 29-32.
6. Галактионов В.Г. и др. Генетика и биохимия вирулентности возбудителей особо опасных инфекций // Материалы Российской научной конференции: тез. докл., Волгоград, 21-22 октября 1992 г. - Волгоград, 1992. - С. 85.
7. Голубинский Е.П. Дыхательный аппарат и окислительный метаболизм чумного микроба: дисс. ... д-ра мед. наук. - Саратов, 197З. - 417 с.
8. Домарадский И.В. Чума: современное состояние, гипотезы, проблемы. - Саратов: Изд-во Саратовского медицинского ин-та, 199З. - 1З0 с.
9. Одиноков Г.Н. Генетический анализ биохимических особенностей штаммов Yersinia pestis основного и неосновных подвидов: дисс. ... канд. биол. наук. - Саратов, 2010. - 157 с.
10. Попов Н.В. и др. Эпизоотическая активность природных очагов чумы Российской Федерации в 2010 г. и прогноз на 2011 г. // Проблемы особо опасных инф. - 2011. - Вып. 1 (107). - С. З1-З7.
11. Природные очаги чумы Кавказа, Прика-спия, Средней Азии и Сибири / под ред. Г.Г. Онищенко, В.В. Кутырева. - М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2004. - 192 с.
12. Abramov V.M. et al. Attachment of LcrV from Yersinia pestis at dual binding sites to human TLR-2 and human IFNc receptor Khlebnikov // J. Proteome. Res. - 2007. - Vol. 6. - P. 2222-22З1.
13. Anisimov A.P., Lindler L.E., Pier G.B. Intraspecific diversity of Yersinia pestis // Clinical Microbiology Reviews. - 2004. - Vol. 17, N 2. -P. 4З4-464.
14. Anisimov A.P., Panfertsev E.A., Svetoch T.E., Dentovskaya S.V. Variability of the protein sequences of LcrV between epidemic and atypical rhamnose-positive strains of Yersinia pestis // Adv. Exp. Med. Biol. - 2007. - N 60З. - Р. 2З-27.
15. Bearden S.W. et al. Attenuated enzootic (pestoides) isolates of Yersinia pestis express active aspartase // Microbiology. — 2009. — Vol. 155, Part 1. - P. 198-209.
16. Brubaker R.R. Influence of Na+ dicarboxylic amino acids, and pH in modulating the low-calcium response of Yersinia pestis // Infection and Immunity. - 2005. - Vol. 73, N 8. - P. 4743-4752.
17. Butler T. Plague into the 21st Century // Clin. Infect. Dis. - 2009. - Vol. 49. - P. 736-742.
18. Dreyfus L.A., Brubaker R.R. Consequences of aspartase deficiency in Yersinia pestis // J. Bacteriology. - 1978. - Vol. 136, N 2. - P. 757-764.
19. Felek S. et al. Phosphoglucomutase of Yersinia pestis Is Required for Autoaggregation and Polymyxin // Infection and Immunity. - 2010. - Vol. 78, N 3. -P. 1163-1175.
20. Felek S., Lawrenz M.B., Krukonis E.S. The Yersinia pestis autotransporter YapC mediates host cell binding, autoaggregation and biofilm formation. Microbiology. - 2008. - Vol. 154. - P. 1802-1812.
21. Garcia E. et al. Molecular characterization of KatY (Antigen 5), a thermoregulated chromosomally encoded catalase-peroxidase of Yersinia pestis // J. Bacteriology. - 1999. - Vol. 181, N 10. - P. 3114-3122.
22. Perry R.D., Fetherston J.D. Yersinia pestis -etiologic agent of plague // Clinical Microbiology Reviews. - 1997. - Vol. 10, N 1. - P. 33-66.
23. Robinson J.B. et al. Evaluation of a Yersinia pestis Mutant Impaired in a Thermoregulated Type VI-Like Secretion System in Flea, Macrophage and Murine Models // Microb. Pathog. - 2009. - Vol. 47, N 5. - P. 243-251.
24. Viola R.E. et al. A missense mutation causes aspartase deficiency in Yersinia pestis. // Microbiology. - 2008. - Vol. 154. - P. 1271 -1280.
Сведения об авторах
Коновалова Жанна Анатольевна - к.б.н., старший научный сотрудник лаборатории патофизиологии Иркутского научноисследовательского противочумного института Сибири и Дальнего Востока (664047, г. Иркутск, ул. Трилиссера, 78; тел.: 8 (3952) 22-01-35, факс: 8 (3952) 22-01-40; e-mail: [email protected])
Балахонов Сергей Владимирович - д.м.н. профессор, директор Иркутского научно-исследовательского противочумного института Сибири и Дальнего Востока (664047, г. Иркутск, ул. Трилиссера, 78; тел.: 8 (3952) 22-01-35, факс: 8 (3952) 22-0140; e-mail: [email protected])
Дубровина Валентина Ивановна - д.б.н., старший научный сотрудник, зав. лабораторией патофизиологии Иркутского научно-исследовательского противочумного института Сибири и Дальнего Востока (664047, г. Иркутск, ул. Трилиссера, 78; тел. 89025100004; e-mail: [email protected])
Старовойтова Татьяна Пантелеевна - научный сотрудник лаборатории патофизиологии Иркутского научно-исследовательского противочумного института Сибири и Дальнего Востока (664047, г. Иркутск, ул. Трилиссера, 78; тел.: 8 (3952) 22-01-35, факс: 8 (3952) 22-01-40; e-mail: [email protected])
