CC BY
103
3
НОМЕР
ISSN 2304-9081
Электронный журнал
On-line версия журнала на сайте
http://www.elmag.uran.ru
БЮЛЛЕТЕНЬ
ОРЕНБУРГСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА УрО РАН
2016
УЧРЕДИТЕЛИ
УРАЛЬСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ РАН ОРЕНБУРГСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР УрО РАН
© Коллектив авторов, 2016 УДК 579.61
О.А. Пашинина, О.Л. Карташова, Т.М. Пашкова, Л.П. Попова
АНТИМИКОТИКОРЕЗИСТЕНТНОСТЬ ГРИБОВ РОДА CANDIDA, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ РЕПРОДУКТИВНОГО ТРАКТА ЖЕНЩИН С ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ГЕНИТАЛИЙ
Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН, Оренбург, Россия
Цель. Охарактеризовать чувствительность к антимикотикам грибов рода Candida, выделенных из репродуктивного тракта женщин с воспалительными заболеваниями гениталий, на уровне фено- и генотипа.
Материалы и методы. В исследовании использовано 47 штаммов грибов рода Candida, изолированных из репродуктивного тракта женщин с воспалительными заболеваниями гениталий. Выделение и идентификацию грибов осуществляли по Ребровой Р.Н. (1989). Чувствительность к антимикотическим препаратам - диско-диффузионным методом. При помощи ПЦР анализа у грибов выявляли гены, кодирующие антимикотикорези-стентность.
Результаты. В скрининговом режиме протестирована антимикотикорезистент-ность грибов рода Candida, выделенных из репродуктивного тракта женщин с воспалительными заболеваниями гениталий. Выявлена высокая резистентность не-albicans видов по сравнению с Candida albicans к изученным препаратам. Изучена резистентность к ан-тимикотикам C. albicans при остром и хроническом течении инфекционного процесса и показана необходимость дифференцированного подхода к лечению разных форм ВЗГ. С помощью ПЦР установлено наличие в изолятах С. аlbicans гена MDR1, кодирующего переносчик MF типа.
Заключение. Полученные данные могут быть использованы для мониторинга распространения резистентных штаммов среди грибов рода Candida и повышения эффективности терапии заболеваний, вызванных этими микроорганизмами.
Ключевые слова: Candida spp., резистентность к антимикотикам, инфекционный процесс/
O.A. Pashinina, O.L. Kartashova, T.M. Pashkova, L.P. Popova
ANTIFUNGAL-RESISTANT FUNGI ON THE GENUS CANDIDA, ISOLATED FROM REPRODUCTIVE TRACT WOMEN WITH INFLAMMOTORY DISEASES OF GENITALS
Institute of Cellular and Intracellular Symbiosis UrB RAS, Orenburg, Russia
Objective. Describe the antifungal susceptibility of Candida isolated from the reproductive tract of women with inflammatory diseases of the genitals, at the level of phenotype and genotype.
Materials and methods. The study used 47 strains of Candida isolated from the reproductive tract of women with inflammatory diseases of the genitals. Isolation and identification of fungi was performed by Rebrova R.N. (1989). The sensitivity to antifungal preparations - disk diffusion method. Using PCR analysis of fungi identified genes encoding resistance antifungals.
Results. In the screening mode tested antimycotic-resistance genus Candida fungi isolated from the reproductive tract of women with inflammatory diseases of the genitals. The high resistance of non-albicans species as compared to the Candida albicans to the study drugs. Studied resistance to antifungal C. albicans in acute and chronic course of the infection process and
shows the need for a differentiated approach to the treatment of various forms of IDG. Using PCR isolates revealed the presence of C. albicans MDR1 gene encoding a transporter type MF.
Conclusion. The data obtained can be used to monitor the spread of resistant strains of fungi including Candida genus and efficiency of the therapy of diseases caused by these microorganisms.
Keywords: Candida spp., resistance to antifungal, infectious process/
Введение
Дрожжевые грибы рода Candida в качестве комменсалов входят в состав естественных микробиоценозов тела человека. В то же время эти мик-ромицеты могут быть причиной широкого спектра воспалительных заболеваний, как правило, эндогенной природы, в том числе инфекционных процессов урогенитальной локализации у женщин [1].
Данные литературы о чувствительности к антимикотикам грибов рода Candida имеют значительные региональные различия и носят противоречивый и разрозненный характер [2-4]. В связи с этим для разработки эффективных схем противогрибковой терапии необходимо учитывать результаты локального мониторинга распространения резистентности у Candida spp.
Наряду с вышеизложенным представляет интерес изучение механизмов генетического контроля за резистентностью грибов к антимикотикам.
Цель исследования - охарактеризовать чувствительность к антимико-тикам грибов рода Candida, выделенных из репродуктивного тракта женщин с воспалительными заболеваниями гениталий, на уровне фено- и генотипа.
Материалы и методы
В работе изучено 47 штаммов грибов рода Candida, изолированных из репродуктивного тракта женщин с воспалительными заболеваниями гениталий (кольпит, сальпингоофорит - острое и хроническое течение). Выделение и идентификацию грибов рода Candida проводили общепринятыми методами [5]. Чувствительность к антимикотическим препаратам определяли диско-диффузионным методом с помощью расширенного набора дисков: нистатин 80 мкг/диск, итраконазол 10 мкг/диск, флуконазол 40 мкг/диск, клотримазол 10 мкг/диск, кетоконазол 20 мкг/диск, амфотерицин В 40 мкг/диск (ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург).
Статистическую обработку осуществляли с использованием параметрических методов [6].
При помощи ПЦР анализа у изолятов грибов рода Candida выявляли
Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН (электронныйжурнал), 2016, №3 гены, кодирующие антимикотикорезистентность: ген CDR1, ассоциированный с устойчивостью к ингибиторам стеролового синтеза, ген полирезистентности MDR1 - кодирующий переносчик MF типа, ген FLU1, обеспечивающий устойчивость к флуконазолу.
Для ПЦР-амплификации использовали известные праймеры [7], синтезированные компанией «Синтол» (г. Москва) (табл.).
Таблица. Праймеры, использованные для определения генов резистентности к антимикотикам
№ Размер
Ген Нуклеотидная последовательность продукта реакции, п.о.
1 MDR1 Forward 5-AGAGCCATCACCGGTAACGACAG Reverse 5-AACCAAAAATGAAAAGACCTGAAG 420
2 FLU1 Forward 5-CACTGCCTTGGCTGGTAAC Reverse 5-ACATCGTGCAAAAGGAAGAAC 510
3 CDR1 Forward 5-TTTCTGGTGCCATGACTCCTGCTAC Reverse 5-ATATAAATGGCCAAAAAGAATACG 446
ПЦР проводили в термоциклере «Терцик» («ДНК технология», Россия). Реакционная смесь состояла из грибного лизата (1 мкл), специфических праймеров (по 1 мкл), дезоксирибонуклеозид-трифосфатов, буфера, фермента Taq-полимеразы, хлорида магния. Реакционную смесь доводили до 25 мкл водой без нуклеаз.
Для обнаружения генов, кодирующих резистентность к антимикотикам, в смесь для ПЦР добавляли 1 мкл каждого праймера соответствующей группы, осуществляли амплификацию фрагмента ДНК по протоколу: 1 цикл - 92°С 5 минут; 30 циклов - 92°С в течение 1 минуты, 1 минута при 65°C, 1 минута при 72°C; 1 цикл элонгации при 72°C в течение 5 минут.
Продукты амплификации генов анализировали путем электрофоретиче-ского разделения в горизонтальном агарозном геле (2%), окрашенном бромистым этидием. В качестве маркеров использовали GeneRuler 1 kbp DNA Ladder и GeneRuler 100 bp DNA Ladder (Fermentas, Литва). Результаты визуализировали в ультрафиолетовом свете. Положительное заключение о наличии гена делали при обнаружении в дорожке специфической светящейся полосы определенной массы, которую устанавливали по линейке молекулярных масс.
Результаты и обсуждение
Из репродуктивного тракта женщин с воспалительными заболеваниями гениталий в 76,5% случаях выделяли C. albicans, в 17,1% - C. glabrata и 6,4% - C. krusei.
При анализе чувствительности этих штаммов к антимикотикам выявили вариабельность микроорганизмов по данному признаку, которая зависела от видовой принадлежности грибов (рис. 1).
100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%
Нистатин Амфотерицин Клотримазол В
Флуконазол Итраконазол Кетоконазол
100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%
Нистатин Амфотерицин В Клотримазол Флуконазол Итраконазол Кетоконазол ■ резистентный □ чувствительный ■ умеренно-устойчивый
Рис. 1. Чувствительность к антимикотикам грибов C. albicans (А) и C. non-albicans (Б), выделенных из репродуктивного тракта женщин с воспалительными заболеваниями гениталий.
Обозначения: * - p<0,01; ** - p<0,001.
Наибольшее число вагинальных изолятов С. albicans оказалось чувствительным к клотримазолу (54,0%), нистатину и итраконазолу (46,0%), несколько меньше - к флуконазолу (38,0%), кетоконазолу и амфотерицину В (31,0%). Резистентность к амфотерицину В проявляли 69,0% выделенных штаммов, нистатину - 54,0%, клотримазолу - 46,0%, кетоконазолу, флукона-золу и итраконазолу по 38,0% культур. Штаммы С. albicans были умеренно-устойчивыми к кетоконазолу в 31,0%, к флуконазолу в 24,0%, к итраконазолу
Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН (электронныйжурнал), 2016, №3 в 16,0% случаев.
Штаммы грибов не-albicans видов, выделенные при воспалительных заболеваниях гениталий (ВЗГ), реже проявляли чувствительность к изученным антимикотикам в сравнении с С. albicans. Так, все выделенные культуры C. glabrata и C. krusei были резистентны к кетоконазолу, амфотерицину В и итраконазолу; к клотримазолу и флуконазолу проявляли чувствительность по 16,5% культур не-albicans видов Candida. По отношению к флуконазолу и итраконазолу штаммы проявляли умеренную устойчивость в 50,0% случаев.
Не отмечали достоверной разницы между количеством штаммов грибов разных видов чувствительных и резистентных к нистатину.
При сравнении чувствительности C.albicans, выделенных при разных формах течения инфекционного процесса, установлены определенные различия (рис. 2).
100 90
)
80 70 60 50 40 30 20 10 0
**
А
_**_ \_
**
Флуконазол Итраконазол Кетоконазол Амфотерицин В Нистатин Клотримазол
100 ■ ¡> 90 80 70 60 50 ■ 40 ■ 30 20 ■ 10 0
Б
Флуконазол Итраконазол Кетоконазол Амфотерицин В Нистатин
□ Резистентный □ Чувствительный □ Умеренно-устойчивый
Клотримазол
Рис. 2. Чувствительность к антимикотикам штаммов С. albicans, выделенных при остром течении (А) и хроническом (Б) течении инфекционно-воспалительного процесса (%).
Обозначения: ** - p<0,001.
Так, при хроническом течении ВЗГ, штаммов, резистентных к флуконазолу, итраконазолу, кетоконазолу, клотримазолу (по 80,0%) было в 2,4-3,6 раза больше, чем при остром течении заболевания (25,0%, 22,0% и по 33,0%,
Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН (электронныйжурнал), 2016, №3 соответственно; p<0,001).
Наоборот, при остром течении заболевания по сравнению с хроническим, в 1,5 раза чаще встречались штаммы, резистентные к амфотерицину В. Кроме того 66,0% штаммов было резистентно к нистатину, тогда как среди C. albicans, выделенных при хроническом течении заболевания, такие штаммы отсутствовали. Также при остром течении заболевания наблюдали наличие культур, умеренно устойчивых к флуконазолу (25,0%), итраконазолу (11,0%) и кетоконазолу (33,0%).
Резистентность культур грибов к изученным антимикотикам, в частности, препаратам из группы азолов, может быть обусловлена усилением оттока препарата из клетки [8]. Анализ генов, кодирующих переносчики - клеточные насосы (efflux pumps), выводящие препарат за пределы грибковой клетки, показал наличие у 100% изученных вагинальных изолятов C. albicans, выделенных при ВЗГ, гена полирезистентности MDR1, кодирующего переносчики MF типа.
Согласно полученным результатам, среди Candida spp., выделенных из репродуктивного тракта при ВЗГ, преобладали C.albicans, что согласуется с другими исследованиями [9], в меньшем проценте случаев выделяются C. glabrata и C. krusei.
Заключение
Проведенными исследованиями показано, что Candida spp., изолированные из репродуктивного тракта женщин, обладают вариабельной антими-котикорезистентностью, частота встречаемости которой зависит от видовой принадлежности грибов: штаммы не-albicans характеризуются более высокой устойчивостью к изученным антимикотикам, по сравнению с C. albicans, что было отмечено и другими авторами [10, 11].
В последние годы среди разных видов грибов рода Candida, особенно C. albicans, все чаще выявляет резистентность к азолам [12,13]. В данном исследовании была оценена их эффективность в отношении штаммов, выделенных при разных формах течения заболевания, и показано, что высоким уровнем резистентности к препаратам этой группы характеризуются штаммы, выделенные при хроническом течении ВЗГ, в отличие от грибов, выделенных при острой форме инфекционного процесса, которые в большем проценте случаев были резистентны к полиеновым антибиотикам. Полученные данные свидетельствуют о необходимости дифференцированного подхода к
Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН (электронныйжурнал), 2016, №3 лечению разных форм ВЗГ, на правомерность подобного подхода при терапии острых и хронических форм вульвовагинального кандидоза указывают [14].
Тем не менее, проведенные исследования показали, что у всех изученных штаммов обнаружен ген полирезистентности MDR1, кодирующий переносчики MF типа, выводящие из клетки флуконазол. При изучении генетических механизмов резистентности к азоловым препаратам у клинических изо-лятов C. albicans ряд авторов [15, 16] отмечали широкую перекрестную резистентность к флуконазолу, клотримазолу, итраконазолу и кетоконазолу. Установленная нами высокая резистентность грибов, выделенных при хроническом течении инфекционного процесса, к азолам, обусловлена, по-видимому, активным эффлюксом препаратов [17], а антимикотики в данном случае выступают в качестве индукторов (или регуляторов) экспрессии гена, кодирующего эффлюкс-систему, и способствуют селективному отбору штаммов, обладающих этими механизмами [18].
Таким образом, в результате проделанной работы в скрининговом режиме протестирована антимикотикорезистентность грибов рода Candida, выделенных из репродуктивного тракта женщин с ВЗГ. Полученные данные могут быть использованы для мониторинга распространения резистентных штаммов среди грибов и повышения эффективности терапии заболеваний, вызванных этими микроорганизмами.
Выводы
1. Штаммы не-albicans видов Candida чаще характеризовались резистентностью к изученным к антимикотикам по сравнению с C. albicans.
2. При остром течении воспалительных заболеваний гениталий эффективными являются антимикотики класса азолов, при хроническом - полиено-вые антимикотики.
3. Механизм устойчивости к азолам у C. albicans определяется наличием гена MDR1, кодирующего MF-переносчик, выводящий препараты за пределы клетки гриба.
ЛИТЕРАТУРА
1. Сергеев А. Ю., Сергеев Ю.В. Кандидоз. Природа инфекции, механизмы агрессии и защиты, лабораторная диагностика, клиника и лечение. М.: Триада-Х, 2001. 345с.
2. Захарова Е.А., Шамбилова Н.А., Азизов И.С. Сравнительная оценка чувствительности к противогрибковым препаратам клинических штаммов грибов рода Candida, выделенных из фекалий и влагалища. Успехи медицинской микологии. 2006. 7: 167-168.
3. Анкирская А.С., Муравьёва В.В., Фурсова С.А. Мониторинг видового состава и чув-
ствительности к антимикотикам дрожжеподобных грибов, выделенных из влагалища женщин репродуктивного возраста. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2009. 8(1): 87-95.
4. Желтикова Т.М., Глушакова А.М. Фунгицидное действие различных системных антими-котиков на грибы рода Candida in vitro. Акушерство и гинекология. 2010. 4: 79-81.
5. Реброва Р.Н. Грибы рода Candida при заболеваниях негрибковой этиологии. М.: Медицина, 1989. 128с.
6. Ашмарин И.П., Воробьёв А.А. Статистические методы в микробиологии. Л.: Гос. изд. мед. лит, 1962. 177с.
7. Niewerth M., Kunze D., Seibold M. et al. Ciclopirox olamine treatment affects the expression pattern of Candida albicans genes encoding virulence factors, iron metabolism proteins, and drug resistance factors. Antimicrob. Agents Chemother. 2003. 47(6): 1805-1819.
8. Vanessa M. S., Caroline J. B., Bernhard H. et al. Exposure of Candida albicans to antifungal agents affects expression of SAP2 and SAP9 secreted proteinase genes. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 2005. 55: 645-654.
9. Дробкова В.А., Карпунина Т.И. Видовой спектр и биологические особенности грибов рода Candida, изолируемых из влагалища женщин репродуктивного возраста. Современные проблемы инфекционной патологии человека. 2009. 2: 244-248.
10. Батырбаева Д.Ж., Рамазанова Б.А., Таурбаева Н.Т. Сравнительный анализ изучения устойчивости Candida spp. к противогрибковым препаратам различными методами. Проблемы медицинской микологии 2015. 17(2): 43-44.
11. Вершинина М.Г., Калугина Е.Ю., Володин О.Б. Анализ встречаемости Candida spp. в отделяемом нижних дыхательных путей больных реанимационного отделения многопрофильного стационара. Проблемы медицинской микологии. 2014. 16(2): 51.
12. Малова И.О., Кузнецова Ю.А. Чувствительность к антимикотикам Candida spp., выделенных от пациенток с хроническим рецидивирующим кандидозом урогенитально-го тракта. Проблемы медицинской микологии. 2013. 15(2): 103.
13. Саперкин Н.В., Широкова И.Ю., Сергеева А.В. и др. Изучение чувствительности Candida spp. к антимикотикам. Проблемы медицинской микологии. 2014. 16(2): 124.
14. Пестрикова Т.Ю., Юрасова Е.А., Воронова Ю.В. и др. Дифференцированный подход к лечению разных форм вульвовагинального кандидоза. Гинекология. 2014. 3: 38-40.
15. White TC, Holleman S, Dy F. et al. Resistance mechanisms in clinical isolates of Candida albicans. Antimicrob Agents Chemother. 2002. 46(6): 1704-1713.
16. Sanguinetti M., Posteraro B., Fiori B. et al. Mechanisms of Azole Resistance in Clinical Isolates of Candida glabrata Collected during a Hospital Survey of Antifungal Resistance. Antimicrobial agent and chemotherapy. 2005. 2: 668-679.
17. Иванова Л.В., Баранцевич Е.П., Шляхто Е.В. Резистентность грибов-патогенов к антимикотикам (обзор). Проблемы медицинской микологии. 2001. 13(1): 14-17.
18. Исаева Г.Ш. Резистентность H. pylori к антибактериальным препаратам и методы ее определения. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2010. 12(1): 57-66.
Поступила 29.09.2016
(Контактная информация: Капустина Ольга Александровна - к.б.н., с.н.с. Института клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН; адрес: 460000, г. Оренбург,
ул. Пионерская, 11; тел/факс 8(3532)774463; e-mail: [email protected])
LITERATURE
1. Sergeev A. Ju., Sergeev Ju.V. Kandidoz. Priroda infekcii, mehanizmy agressii i zashhity, laboratornaja diagnostika, klinika i lechenie. M.: Triada-H, 2001. 345s.
2. Zaharova E.A., Shambilova N.A., Azizov I.S. Sravnitel'naja ocenka chuvstvitel'nosti k protivogribkovym preparatam klinicheskih shtammov gribov roda Candida, vydelennyh iz fekalij i vlagalishha. Uspehi medicinskoj mikologii. 2006. 7: 167-168.
3. Ankirskaja A.S., Murav'jova V.V., Fursova S.A. Monitoring vidovogo sostava i chuvstvitel'nosti k antimikotikam drozhzhepodobnyh gribov, vydelennyh iz vlagalishha zhenshhin reproduktivnogo vozrasta. Klinicheskaja mikrobiologija i antimikrobnaja himioterapija. 2009. 8(1): 87-95.
4. Zheltikova T.M., Glushakova A.M. Fungicidnoe dejstvie razlichnyh sistemnyh anti-mikotikov na griby roda Candida in vitro. Akusherstvo i ginekologija. 2010. 4: 79-81.
5. Rebrova R.N. Griby roda Candida pri zabolevanijah negribkovoj jetiologii. M.: Me-dicina, 1989. 128s.
6. Ashmarin I.P., Vorob'jov A.A. Statisticheskie metody v mikrobiologii. L.: Gos. izd. med. lit, 1962. 177s.
7. Niewerth M., Kunze D., Seibold M. et al. Ciclopirox olamine treatment affects the expression pattern of Candida albicans genes encoding virulence factors, iron metabolism proteins, and drug resistance factors. Antimicrob. Agents Chemother. 2003. 47(6): 1805-1819.
8. Vanessa M. S., Caroline J. B., Bernhard H. et al. Exposure of Candida albicans to antifungal agents affects expression of SAP2 and SAP9 secreted proteinase genes. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 2005. 55: 645-654.
9. Drobkova V.A., Karpunina T.I. Vidovoj spektr i biologicheskie osobennosti gribov roda Candida, izoliruemyh iz vlagalishha zhenshhin reproduktivnogo vozrasta. Sovremennye problemy infekcionnoj patologii cheloveka. 2009. 2: 244-248.
10. Batyrbaeva D.Zh., Ramazanova B.A., Taurbaeva N.T. Sravnitel'nyj analiz izuchenija ustojchivosti Candida spp. k protivogribkovym preparatam razlichnymi metodami. Problemy medicinskoj mikologii 2015. 17(2): 43-44.
11. Vershinina M.G., Kalugina E.Ju., Volodin O.B. Analiz vstrechaemosti Candida spp. v otdeljaemom nizhnih dyhatel'nyh putej bol'nyh reanimacionnogo otdelenija mnogo-profil'nogo stacionara. Problemy medicinskoj mikologii. 2014. 16(2): 51.
12. Malova I.O., Kuznecova Ju.A. Chuvstvitel'nost' k antimikotikam Candida spp., vy-delennyh ot pacientok s hronicheskim recidivirujushhim kandidozom urogenital'nogo trakta. Problemy medicinskoj mikologii. 2013. 15(2): 103.
13. Saperkin N.V., Shirokova I.Ju., Sergeeva A.V. i dr. Izuchenie chuvstvitel'nosti Candida spp. k antimikotikam. Problemy medicinskoj mikologii. 2014. 16(2): 124.
14. Pestrikova T.Ju., Jurasova E.A., Voronova Ju.V. i dr. Differencirovannyj podhod k lecheniju raznyh form vul'vovaginal'nogo kandidoza. Ginekologija. 2014. 3: 38-40.
15. White TC, Holleman S, Dy F. et al. Resistance mechanisms in clinical isolates of Candida albicans. Antimicrob Agents Chemother. 2002. 46(6): 1704-1713.
16. Sanguinetti M., Posteraro B., Fiori B. et al. Mechanisms of Azole Resistance in Clinical Isolates of Candida glabrata Collected during a Hospital Survey of Antifungal Resistance. Antimicrobial agent and chemotherapy. 2005. 2: 668-679.
17. Ivanova L.V., Barancevich E.P., Shljahto E.V. Rezistentnost' gribov-patogenov k antimikotikam (obzor). Problemy medicinskoj mikologii. 2001. 13(1): 14-17.
18. Isaeva G.Sh. Rezistentnost' H. pylori k antibakterial'nym preparatam i metody ee opredelenija. Klinicheskaja mikrobiologija i antimikrobnaja himioterapija. 2010. 12(1): 57-66.
Образец ссылки на статью:
Пашинина О.А., Карташова О.Л., Пашкова Т.М., Попова Л.П. Антимикотикорезистент-
ность грибов рода Candida, выделенных из репродуктивного тракта женщин с воспалительными заболеваниями гениталий. Бюллетень Оренбургского научного центра УрО
РАН. 2016. 3: 9с. [Электронный ресурс] (URL: http://elmag.uran.ru:9673/magazine/
Numbers/2016-2/Articles/P0A-2016-3.pdf).
