CC BY
143
ISSN 2304-9081
Учредители: Уральское отделение РАН Оренбургский научный центр УрО РАН
Бюллетень >ренбургского научного центра
УрО РАН
2015 * № 1
Электронный журнал On-line версия журнала на сайте http://www.elmag.uran.ru
© Коллектив авторов, 2015 УДК 579.62
12 1 А.С. Акжигитов , Т.М. Пашкова , Р.М. Нургалиева
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К ПРОТИВОГРИБКОВЫМ ПРЕПАРАТАМ ГРИБОВ РОДА MALASSEZIA, ВЫДЕЛЕННЫХ ПРИ РАЗНЫХ ФОРМАХ ТЕЧЕНИЯ ОТИТОВ У СОБАК
1 Оренбургский государственный аграрный университет, Оренбург, Россия Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН, Оренбург, Россия
Цель. Определить чувствительность грибов рода Malassezia, выделенных от собак c острым и хроническим течением отита, к антимикотикам.
Материалы и методы. Определена чувствительность 24 штаммов грибов рода Malassezia, выделенных от собак с разным течением отита, к 6 антимикотикам диско-диффузионным методом.
Результаты. Установлены различия в чувствительности/резистентности к антимикотикам у разных видов грибов рода Malassezia, а также штаммов, выделенных при остром и хроническом течении отита у собак.
Заключение. Полученные в ходе исследования данные могут быть использованы при выборе препаратов для эмпирической терапии собак больных отитом.
Ключевые слова: грибы рода Malassezia, отит, антимикотики.
J 7 1
A.S. Akzhigitov1, T.M. Pashkova2, R.M. Nurgalieva1
SENSITIVITY TO ANTIFUNGAL AGENTS OF THE GENUS MALASSEZIA, ISOLATED FROM DOGS WITH VARIOUS FORMS OF OTITIS
1 Orenburg State Agrarian University, Orenburg, Russia Institute of Cellular and Intracellular Symbiosis UrB RAS, Orenburg, Russia
Purpose. To define sensitivity of fungi of the genus Malassezia allocated from dogs with acute and chronic otitis to antifungal agents.
Materials and methods. Sensitivity of 24 strains of fungi of the genus Malassezia allocated from dogs with various forms of otitis to 6 antifungal drugs by disco-diffusive method was defined.
Results. The differences in the sensitivity/resistance of different species of fungi of the genus Malassezia and also different strains of fungi isolated from external auditory canal of dogs with acute and chronic otitis to antifungal drugs have been found.
Conclusion. The obtained data can be used to select drugs for empirical therapy of otitis in dogs.
Key words: Malassezia spp., otitis, antifungal agents, Введение
Наличие широкого спектра факторов патогенности и персистенции у грибов рода Malassezia определяет их этиологическую роль в возникновении и развитии кожных заболеваний у человека и животных [1]. При лечении Ma-
Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН (электронный журнал), 2015, № 1 lassezia-инфекций обычно применяют противогрибковые препараты. Рядом авторов установлено, что малассезии высокочувствительны к азоловым анти-микотикам (итраконазолу, кетоконазолу, вориконазолу) [2, 3], но устойчивы к 5-фторцитозину [4]. С другой стороны, исследования последних лет показали возможность формирования у грибов резистентности к этим препаратам [5]. Кроме того установлено, что чувствительность грибов рода Malassezia к триазолам (кетоконазол, итраконазол) варьирует в зависимости от вида [6]. Существуют данные о различиях в чувствительности к антимикотикам среди штаммов M. pachydermatis [7]. Вместе с тем остается неизвестным отношение к антимикотикам грибов, выделенных при разных формах течения отита.
В связи с вышеизложенным представляет интерес определение чувствительности к антимикотикам грибов рода Malassezia, выделенных от собак с острым и хроническим течением отита.
Материалы и методы
Материалом для исследования послужили 24 штамма грибов рода Malassezia: Malassezia pachydermatis (21 штамм), Malassezia obtusa (1 штамм), Malassezia furfur (2 штамма), выделенных от 24 собак, из них 16 собак с острой формой отита и 8 - с хронической формой.
Исследуемый материал получали методом смывов с помощью тампона из наружного слухового прохода собак [8], засевали на среду Лиминга-Нотманна (посевы инкубировали при 37оС в течение 48 часов). Идентификацию грибов осуществляли по морфологическим и культуральным характеристикам [9]. Чувствительность к антимикотикам: амфотерицину В, нистатину, флуконазолу, клотримазолу, итраконазолу, кетоконазолу определяли диско-диффузионным методом согласно инструкции по использованию дисков с противогрибковыми препаратами научно-исследовательского центра фармакотерапии (ЗАО «НИЦФ», Санкт-Петербург).
Статистическую обработку данных осуществляли с помощью параметрических методов [10]
Результаты и обсуждение
Грибы M. pachydermatis составляли 87,5% от числа культур, выделенных при остром и хроническом отите. При остром инфекционном процессе 12,5% штаммов принадлежали к виду M. furfur, при хроническом течении отита в 12,5% изолятов относилось к виду M. obtusa.
Результаты изучения чувствительности к антимикотикам изолятов M. pachydermatis, выделенных при остром течении инфекционного процесса представлены на рисунке 1.
%100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
Установлено, что 92,9% штаммов M. pachydermatis были чувствительны к амфотерицину B, 85,7% - к нистатину и кетоконазолу, 78,6% - к клот-римазолу, 57,1% - к итраконазолу и лишь 50% изолятов проявляли чувствительность к флуконазолу.
К нистатину, итраконазолу и флуконазолу устойчивыми оказались 14,3% штаммов M. pachydermatis, к амфотерицину В и клотримазолу - 7,1% изученных изолятов. Резистентные к кетоконазолу культуры среди грибов M. pachydermatis отсутствовали.
В то же время 35,7% штаммов M. pachydermatis были умеренно-устойчивы к флуконазолу, 28,6% штаммов грибов - к итраконазолу и 14,3% штаммов M. pachydermatis - к кетоконазолу и клотримазолу. К амфотерици-ну В и нистатину умеренно-устойчивых штаммов M. pachydermatis выявлено не было.
При этом оба штамма M. furfur, выделенные при остром течении отита, проявляли резистентность к нистатину, клотримазолу, итраконазолу, но были умеренно-устойчивы к амфотерицину В. 1 штамм резистентен к флуконазо-
лу, 1 штамм умеренно-устойчив к флуконазолу и кетоконазолу и 1 штамм M.
3
Амфотерицин В Нистатин Клотримазол Итраконазол Флуконазол Кетоконазол
□ чувствительные □ умеренно-устойчивые И резистентные
Рис 1. Частота встречаемости резистентных/чувствительных к антимикотикам штаммов M. pachydermatis, выделенных при остром течении отита.
Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН (электронный журнал), 2015, № 1 furfur чувствителен к кетоконазолу.
M. pachydermatis, выделенные от животных с хроническим течением отита, проявляли разное отношение к антимикотикам (рис. 2).
%100
90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
Рис 2. Частота встречаемости резистентных/чувствительных к антимикотикам штаммов M. pachydermatis, выделенных при хроническом течении отита.
Показано, что 85,7% штаммов M. pachydermatis, выделенных при хроническом течении отита, были чувствительны к клотримазолу и кетоконазолу, 71,4% штаммов - к амфотерицину В, нистатину и итраконазолу, а 42,8% изученных штаммов проявляли чувствительность к флуконазолу.
Отмечено, что 14,3% штаммов M. pachydermatis были резистентны к нистатину и итраконазолу. К остальным изученным антимикотикам резистентность у культур грибов отсутствовала.
К флуконазолу умеренную устойчивость проявили 57,2% штаммов M. pachydermatis, к амфотерицину В - 28,6%, к нистатину, клотримазолу, итра-коназолу и кетоконазолу - 14,3% изученных изолятов грибов.
При этом штамм M. obtusa, выделенный при хроническом течении отита, был резистентен ко всем изученным антимикотикам, за исключением ке-токоназола, к которому он был умеренно-устойчив.
Проведенные исследования позволили установить, что выделенные штаммы M. pachydermatis отличались по чувствительности к изученным антимикотикам. Так, при острой форме заболевания в 1,3 раза чаще высевались штаммы M. pachydermatis чувствительные к амфотерицину В и в 1,2 раза чаще - чувствительные к нистатину и флуконазолу. Тогда как при хроническом
Амфотерицин Нистатин Клотримазол Итраконазол Флуконазол Кетоконазол В
□ чувствительные □ умеренно-устойчивые ■ резистентные
Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН (электронный журнал), 2015, № 1 отите в 1,3 раза чаще регистрировались культуры чувствительные к итрако-назолу.
При остром течении процесса высевались штаммы M. pachydermatis, резистентные к амфотерицину В, клотримазолу и флуконазолу, а при хроническом течении процесса таких штаммов выявлено не было. В обоих случаях не было выявлено штаммов M. pachydermatis резистентных к кетоконазолу.
Вместе с тем, были зарегистрированы и умеренно-устойчивые к изученным антимикотикам штаммы M. pachydermatis. Причём, при остром течении процесса в 2 раза чаще высевались штаммы, умеренно-устойчивые к ит-раконазолу, тогда как при хроническом отите в 1,6 раза чаще высевались штаммы умеренно-устойчивые к флуконазолу. И только при хроническом течении отита выделялись штаммы умеренно-устойчивые к амфотерицину В и нистатину. Доли штаммов M. pachydermatis, проявлявших умеренную устойчивость к клотримазолу и кетоконазолу, при разных формах течения заболевания не отличались.
Установлены и межвидовые различия в чувствительности/резистентности грибов рода Malassezia к изученным антимикотикам.
Так, штаммы M. furfur, выделенные при остром течении процесса, были резистентны к нистатину, клотримазолу и итраконазолу, тогда как штаммы M. pachydermatis, выделенные при этой форме патологии, были чувствительны к данным антимикотикам в 85,7, 78,6 и 57,1% случаев соответственно.
Штамм M. obtusa, выделенный при хроническом течении процесса, оказался резистентным ко всем изученным антимикотикам, за исключением кетоконазола, тогда как изоляты M. pachydermatis, выделенные при этом заболевании, достаточно часто (71,4-85,7%) были чувствительны к амфотери-цину В, нистатину, клотримазолу, итраконазолу и кетоконазолу.
Заключение
Таким образом, штаммы M. pachydermatis, изолированные при остром течении отита, были максимально чувствительны к амфотерицину В, нистатину и кетоконазолу, а при хроническом - к клотримазолу и кетоконазолу. Штаммы, выделенные при остром течении отита, резистентны к пяти изученным антимикотикам, тогда как при хроническом течении заболевания - к двум. Среди штаммов, выделенных при остром течении заболевания, не обнаружено штаммов умеренно-устойчивых к амфотерицину В и нистатину.
Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН (электронный журнал), 2015, № 1 При этом виды M. furfur и M. obtusa характеризовались более высоким уровнем антимикотикорезистентности в сравнении с M. pachydermatis.
Проведенные исследования показали, что препаратом выбора может быть кетоконазол, так как резистентности к этому антимикотику у изученных грибов рода Malassezia выявлено не было.
Поскольку противогрибковая терапия должна проводиться с учётом региональных особенностей антимикотикорезистентности грибов рода Malas-sezia, полученные нами данные могут быть использованы при выборе препаратов для эмпирической терапии собак, страдающих отитом.
ЛИТЕРАТУРА
1. Уткина Т.М., Акжигитов А.С., Нургалиева Р.М. Видовой состав и факторы персистен-ции микроорганизмов, выделенных от собак с отитами. Вестник ветеринарии. 2014. 2: 47-49.
2. Rincón S.A., Cepero de Garcia M., Espinel-Ingroff A. Modified christensen's urea and CLSI broth microdilution method for testing susceptibilities of six Malassezia species to voriconazole, itraconazole and ketoconazole. Journal of Clinical Microbiology. 2006. 44(9): 34293431.
3. Van Custem J., Van Cergen F., Van Peer A. Ketoconazole: activite in vitro sur Pityrospo-rum. Efficacity daans la pityrosporuose experimentale du cobaye et dans le pityriasis capitis humain. Bull. Soc. Fr. Mycol. Med. 1988. 17: 282-294.
4. Yurayart C., Nuchnoul N., Moolkum P. et al. Antifungal agent susceptibilities and interpretation of Malassezia pachydermatis and Candida parapsilosis isolated from dogs with and without seborrheic dermatitis skin. Med Mycol. 2013. 51: 721-730.
5. Nijima M., Kano R., Nagata M. et al. An azole-resistant isolate of Malassezia pachydermatis. Vet Microbiol. 2011. 149: 288-290.
6. Carrillo-Muñoz A.J., Rojas F., Tur-Tur C. et al. In vitro antifungal activity of topical and systemic antifungal drugs against Malassezia species. Mycoses. 2013. 56: 571-575.
7. Ершов П.П. Этиологическая значимость дрожжевых грибов рода Malassezia при кожных заболеваниях животных: дис.... канд. вет. наук. М., 2008. 165 с.
8. Ивченко О.В. Диагностика малассезиозов животных: дис. ... канд. вет. наук. Москва, 2010. 152 с.
9. Mason I.S. A review of the biology of canine skin with respect to the commensals Staphylococcus intermedius, Demodex canis and Malassezia pachydermatis. Vet. Derm. 1996. 7: 119-132.
10. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Медгиз, 1962. 180 с.
Поступила 26.03.2015
(Контактная информация: Акжигитов Абай Сарсенгалиевич - аспирант кафедры микробиологии и заразных болезней Оренбургского государственного аграрного университета; E-mail: abaj akz@mail.ru;
Пашкова Татьяна Михайловна - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории по изучению механизмов и регуляции персистенции микроорганизмов Института клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН; E-mail: lab-persist@mail.ru;
Нургалиева Рахима Мукташевна - к.в.н., доцент кафедры микробиологии и заразных болезней Оренбургского государственного аграрного университета; E-mail: Nurga-
lieva_rahima@mail.ru)
LITERATURA
1. Utkina T.M., Akzhigitov A.S., Nurgalieva R.M. Vidovoj sostav i faktory persisten-cii mikroorganizmov, vydelennyh ot sobak s otitami. Vestnik veterinarii. 2014. 2: 47-49.
2. Rincon S.A., Cepero de Garcia M., Espinel-Ingroff A. Modified christensen's urea and CLSI broth microdilution method for testing susceptibilities of six Malassezia species to voriconazole, itraconazole and ketoconazole. Journal of Clinical Microbiology. 2006. 44(9): 34293431.
3. Van Custem J., Van Cergen F., Van Peer A. Ketoconazole: activite in vitro sur Pityrospo-rum. Efficacity daans la pityrosporuose experimentale du cobaye et dans le pityriasis capitis humain. Bull. Soc. Fr. Mycol. Med. 1988. 17: 282-294.
4. Yurayart C., Nuchnoul N., Moolkum P. et al. Antifungal agent susceptibilities and interpretation of Malassezia pachydermatis and Candida parapsilosis isolated from dogs with and without seborrheic dermatitis skin. Med Mycol. 2013. 51: 721-730.
5. Nijima M., Kano R., Nagata M. et al. An azole-resistant isolate of Malassezia pachydermatis. Vet Microbiol. 2011. 149: 288-290.
6. Carrillo-Muñoz A.J., Rojas F., Tur-Tur C. et al. In vitro antifungal activity of topical and systemic antifungal drugs against Malassezia species. Mycoses. 2013. 56: 571-575.
7. Ershov P.P. Jetiologicheskaja znachimost' drozhzhevyh gribov roda Malassezia pri kozh-nyh zabolevanijah zhivotnyh: dis____kand. vet. nauk. M., 2008. 165 s.
8. Ivchenko O.V. Diagnostika malasseziozov zhivotnyh: dis. ... kand. vet. nauk. Moskva, 2010: 152.
9. Mason I.S. A review of the biology of canine skin with respect to the commensals Staphylococcus intermedius, Demodex canis and Malassezia pachydermatis. Vet. Derm. 1996. 7: 119-132.
10. Ashmarin I.P., Vorob'ev A.A. Statisticheskie metody v mikrobiologicheskih issle-dovanijah. L.: Medgiz, 1962. 180 s.
