CC BY
184
579.674:577.181
АНТИБИОТИКОУСТОЙЧИВОСТЬ ПРОБИОТИЧЕСКИХ КУЛЬТУР, ВХОДЯЩИХ В СОСТАВ СИНБИОТИКОВ
А.С. БАГДАСАРЯН, Э.С. ТОКАЕВ, Е.А. НЕКРАСОВ, Е.А. ОЛЕЙНИК
Московский государственный университет прикладной биотехнологии,
109316, г. Москва, ул. Талалихина, 33; тел.: (495) 677-07-40, электронная почта: info@ac-t.ru
Определена антибиотикоустойчивость бифидобактерий и лактобактерий, а также их консорциумов, к наиболее часто применяемым при лечении антибиотикам. Установлено, что большинство исследованных штаммов пробиотиков не обладают устойчивостью к антибиотикам, поэтому для достижения эффекта препараты с данными культурами рекомендуется применять после завершения курса антибиотикотерапии.
Ключевые слова: пробиотические культуры, пребиотики, синбиотики, бифидобактерии, лактобактерии, антибиотики, антибиотикоустойчивость, антибиотикочувствительность, зона задержки (ингибирования) роста.
Современными принципами лечебной коррекции дисбиотических сдвигов и восстановления нормофло-ры являются селективная деконтаминация патогенной и условно-патогенной микрофлоры с помощью антибактериальных препаратов и коррекция нормофлоры с применением препаратов и продуктов, содержащих живые культуры пробиотиков и пребиотики (синбиотики) [1-4].
Важное значение при подборе культур микроорганизмов для пробиотических, синбиотических продуктов и препаратов придается их устойчивости к антибиотикам. Известно, что совместное применение антибиотиков и антибиотикоустойчивых штаммов микроорганизмов способствует эффективному восстановлению нормальной микрофлоры кишечника уже в процессе антибиотикотерапии [1, 5].
Анализ имеющихся данных свидетельствует, что устойчивость бактерий к антибиотикам является характерным признаком конкретного штамма микроорганизма и это необходимо учитывать при отборе культур, применяемых в биотехнологии продуктов и препаратов с пробиотическими, синбиотическими свойствами. Данный принцип необходимо использовать при подборе пробиотических культур в составе синбиотических продуктов или препаратов, что повысит их профилактическую и терапевтическую ценность.
Цель настоящей работы - изучение антибиотико-устойчивости пробиотических культур: бифидобактерий и лактобактерий, а также их консорциумов для включения в дальнейшем состав синбиотиков.
Объектами исследований были культуры бифидобактерий и лактобактерий Bifidobacterium bifidum № 1, Bifidobacterium adolescentis 58, Bifidobacterium longum № 1-п, Lactobacillus acidophilus 79, Lactobacillus plantarum 8Р-А3, Lactobacillus casei и Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB-12.
При определении антибиотикочувствительности пробиотических культур использовали диски с антибиотиками (Merck, Германия). Определение чувствительности пробиотических бактерий к антибиотикам проводили диско-диффузионным методом [6]. Диски с антибиотиками накладывали на поверхность плотной питательной среды, засеянной суспензией клеток для получения газона. В основе метода - определение зоны задержки роста бактерий при посеве на агар в присут-
ствии бумажных дисков, пропитанных разными антибиотиками. Перед наложением дисков на каждую чашку с агаризованной средой наносили 1 см3 суспензии культуры или консорциума культур определенной плотности 1,5 • 108 (обычно эквивалентную стандарту мутности по 0,5 McFarland), равномерно распределяли ее по поверхности среды и слегка подсушивали в ламинарном потоке. Чашки с дисками инкубировали в течение 3 сут в анаэростате при температурных режимах, оптимальных для роста микроорганизмов в ЖКТ (37 ± 1)°С.
Антибиотикограмму (информация о чувствительности или устойчивости данного микроорганизма к серии антибиотиков) составляли по диаметру зоны задержки роста микроорганизмов.
Изучили 4 штамма бифидобактерий - В. longum,
B. bifidum, В. adolescentis, B. animalis subsp. lactis BB-12, 3 штамма лактобактерий - L. acidophilus, L. plantarum, L. casei, а также консорциумы бифидобактерий - консорциум 1, лактобактерий - 2, бифидобактерий и лактобактерий - 3.
Предварительно на базе сведений из аптек Москвы был составлен перечень антибиотиков, наиболее часто применяемых при лечении различных патологий человека. В исследованиях использовали диски со следующими антибиотиками: оксациллин, ампициллин, ам-пициллин/сульбактам, амоксациллин с разной активностью, амоксациллин/клавулановая кислота, азло-циллин, цефотаксим, цефтриаксон, цефамандол, цефа-золин, цефоперазон, эртрапенем, канамицин, гентами-цин с разной активностью, неомицин, олеандомицин, амикацин, офлоксацин, ципрофлоксацин, норфлокса-цин, хлорамфеникол, тетрациклин с разной активностью, доксициклин, миноциклин, азитромицин, кла-ритромицин, эритромицин, рокитамицин, фосфоми-цин+глюкозо-6-фосфат, пристиномицин. В основном это антибиотики широкого спектра действия, активные в отношении грамположительных и грамотрицатель-ных бактерий [7]. Следует отметить, что сведения об отношении лактобактерий и бифидобактерий к антибиотикам крайне ограничены.
Полученные данные по антибиотикоустойчивоости бифидобактерий, лактобактерий и их консорциумов выборочно приведены в таблице (выбраны наиболее показательные антибиотики).
Таблица
Диаметр зоны ингибирования, мм
Антибиотик, активность, мкг В. adoles- centis B. bifidum B. longum B. animalis subsp. lactis L. acido-phillus L. casei L. plan-tarum Консорциум 1 Консорциум 2 Консор циум 3
Ампициллин/сульбактам 20 16 ± 1 43 ± 2 56 ± 2 27 ± 2 42 ± 2 46 ± 2 32 ± 1 17 ± 2 38 ± 2 18 ± 2
Амоксациллин 25 Без зоны 38 ± 2 32 ± 2 42 ± 2 42 ± 2 50 ± 2 30 ± 2 24 ± 2 35 ± 2 40 ± 1
Азлоциллин 30 » 42 ± 2 40 ± 2 38± 1 40 ± 2 55 ± 2 34 ± 2 Без зоны 32 ± 2 44 ± 2
Цефотаксим 30 10 ± 2 30 ± 2 44 ± 2 40 ± 2 37 ± 2 36 ± 2 33 ± 2 12 ± 2 40 ± 2 18 ± 2
Цефамандол 30 Без зоны 30 ± 2 24 ± 2 35 ± 2 35 ± 1 50 ± 2 16 ± 2 10 ± 1 20 ± 2 14 ± 2
Цефазолин 30 12 ± 2 26 ± 2 27 ± 1 28 ± 2 30 ± 2 40 ± 2 20 ± 2 20 ± 2 20 ± 1 12 ± 2
Цефоперазон 30 Без зоны 32 ± 2 18 ± 2 32 ± 2 31 ± 2 46 ± 1 18 ± 2 8 ± 1 21 ± 1 15 ± 2
Эртрапенем 10 20 ± 2 32 ± 2 32 ± 1 38 ± 2 34 ± 2 40 ± 2 31 ± 2 20 ± 1 33 ± 2 19 ± 2
Гентамицин1 20 16 ± 2 15 ± 2 19 ± 2 21 ± 1 33 ± 1 28 ± 2 14 ± 1 16 ± 1 13 ± 1 16 ± 2
Олеандомицин 15 17 ± 2 30 ± 2 28 ± 2 32 ± 2 24 ± 1 30 ± 2 16 ± 2 17 ± 1 18 ± 2 30 ± 1
Хлорамфеникол 30 19 ± 2 34 ± 2 42 ± 2 40 ± 2 35 ± 2 38 ± 2 25 ± 2 19 ± 2 27 ± 1 20 ± 2
Доксициклин 30 Без зоны 38 ± 2 33 ± 2 30 ± 2 37 ± 2 45 ± 2 22 ± 2 22 ± 1 25 ± 2 35 ± 2
Миноциклин 30 » 36 ± 2 27 ± 2 26 ± 1 38 ± 2 44 ± 2 30 ± 1 25 ± 2 25 ± 1 36 ± 1
Азитромицин 15 22 ± 2 27 ± 2 35 ± 1 30 ± 2 19 ± 1 32 ± 2 14 ± 2 26 ± 1 17 ± 2 21 ± 2
Кларитромицин 15 25 ± 1 36 ± 2 40 ± 2 39 ± 2 32± 2 50 ± 2 26 ± 2 40 ± 1 28 ± 1 33 ± 1
Эритромицин 15 21 ± 2 36 ± 2 41 ± 2 37 ± 1 28 ± 2 36 ± 1 22 ± 2 37 ± 2 25 ± 2 32 ± 2
Рокитамицин 30 17 ± 1 35 ± 2 42 ± 2 37 ± 2 34 ± 2 46 ± 2 31 ± 2 20 ± 1 31 ± 2 18 ± 1
Пристиномицин 15 17 ± 1 26 ± 2 22 ± 2 34 ± 1 26 ± 2 31 ± 2 22 ± 1 22 ± 2 24 ± 2 26 ± 2
Анаэробные бактерии образуют чрезвычайно разнородные группы, которые сильно отличаются по скорости роста колоний. Тесты на чувствительность этих микроорганизмов in vitro до сих пор плохо стандартизированы. Оценка чувствительности анаэробов к антибиотикам крайне затруднена тем, что размеры зон, рекомендованные для других бактерий, не применимы для анаэробов. В дополнение к указанным причинам вероятных ошибок добавляются специфические условия культивирования анаэробов: обогащенная среда, сложный состав атмосферы, длительная инкубация повышают риск возникновения ошибок.
Интерпретацию результатов определения чувствительности анаэробных грамположительных бактерий к антибиотикам проводили согласно рекомендациям СА-SFM (Комитет по антибиотикам Французского общества микробиологов) и интерпретациям, разработанным в лаборатории биологии бифидобактерий МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского [7, 8].
Все штаммы бифидобактерий и лактобактерий были устойчивы к оксацилину, амикацину, офлоксацину, норфлоксацину, неомицину. К канамицину, гентамици-ну (10 мкг) были резистентны все штаммы, кроме L. casei. Все штаммы были устойчивы к фосфоми-цин+глюкозо-6-фосфату 50, кроме B. bifidum. Все лактобактерии и B. adolescentis были резистентны к ци-профлоксацину. Бифидобактерии обладали промежуточной устойчивостью к ципрофлоксацину и гентами-цину с активностью 120 мкг.
Штамм бифидобактерий B. adolescentis 58 проявлял устойчивость к большинству антибиотиков. Кроме вышеуказанных антибиотиков, данный штамм был резистентен к амоксациллину с разной активностью, амоксациллин/клавулановой кислоте (30 мкг), азло-циллину (30 мкг), цефотаксиму (30 мкг), цефтриаксону
(30 мкг), цефамандолу (30 мкг), цефазолину (30 мкг), цефаперазону (30 мкг), тетрациклину с разной активностью, доксициклину (30 мкг), миноциклину (30 мкг).
После В. айоЫзсепЫз сравнительно наименьшей чувствительностью к антибиотикам выделялся штамм Ь. р1аЫагиш. По сравнению с другими лактобактерями и бифидобактериями он проявил устойчивость к цефамандолу, олеандомицину, азитромицину, тетрациклину (5 мкг).
Кроме указанных штаммов, остальные пробиотические культуры были чувствительны к большинству антибиотиков.
Консорциумы проявляли устойчивость к оксацил-лину, канамицину, гентамицину с разной активностью, неомицину, амикацину, офлоксацину, ципрофлоксацину, норфлоксацину, фосфомицин+глюкозо-6-фосфату.
Полученные нами данные свидетельствуют, что большинство исследованных штаммов пробиотиков не обладали устойчивостью к антибиотикам, поэтому эффект от их применения может наблюдаться только тогда, когда препараты с данными культурами будут применяться после завершения курса антибиотикотера-пии.
Из изученных нами пробиотических штаммов только В. айо1езсеМ1з 58 являлся устойчивым к большинству антимикробных препаратов. На втором месте по этому показателю Ь. р1аЫагиш 8Р-А3. Необходимо отметить, что консорциумы обладали большей устойчивостью к антибиотикам, чем отдельные культуры, что объясняется разницей чувствительности к антибиотикам между штаммами, входящими в состав консорциумов.
На основании проведенного исследования следует заключить, что одновременное применение пробиотиков, в частности лакто- и бифидобактерий, с большин-
ством используемых в клинической практике антибиотиков нецелесообразно, поскольку пробиотические микроорганизмы чувствительны ко многим антимикробным препаратам. В настоящее время необходимо создание антибиотикоустойчивых бактерийных препаратов в сочетании с пребиотиками или отдельно, использование которых совместно с антибиотиками позволило бы исключить возможность развития дисбактериозов и сократить сроки лечения.
ЛИТЕРАТУРА
1. Алешкин В.А. Новое поколение иммунологических и бактерийных препаратов в лечении дисбактериозов и инфекций различной этиологии // Медицинская картотека. - 1997. - № 4. -С.420-425.
2. Григорьев П.А., Яковленко Э.П. Диагностика и лечение хронических болезней органов пищеварения. - М., 1990. -160 с.
3. Гриневич В.Б., Захаренко С.М., Осипов Г.А. Принципы коррекции дисбиозов кишечника // Лечащий врач. -2008.-№6.-С. 42-45.
4. Collins M.D., Gibson G.R. Probiotics, prebiotics, and synbiotics: approaches for modulating the microbial ecology of the gut // Am. J. Clin. Nutr. - 1999. - Vol. 69 (5). - P. 1052-1057.
5. Захарова Ю.В. Биологические свойства бифидобактерий в ассоциативном симбиозе толстой кишки // Науч.-практ. журн. «Медицина в Кузбассе». - 2010. - № 1. - С. 14-16.
6. МУК 4.2.1890-04. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. - М., 2004. - 47 с.
7. Comite de l' antibiogramme de la societe francaise de micro-biologie. Recommandations 2010 // Edition de Janvier 2010. Societe Francaise de microbiology. - P. 49.
8. Субботина М.Е. Разработка методики генотипирова-ния бифидобактерий на основе двухлокусного секвенирования с целью видовой идентификации штаммов: Автореф. дис. ... канд. техн. наук. - М.: ВНИИСБ РАСХН. - 25 с.
Поступила 22.03.11 г.
ANTIBIOTIC RESISTANCE OF PROBIOTIC CULTURES INCLUDED IN THE SYNBIOTIC
A.S. BAGDASARYAN, E.S. TOKAEV, E.A. NEKRASOV, E.A. OLEYNIK
Moscow State University of Applied Biotechnology,
33, Talalikhina st., Moscow, 109316;ph.: (495) 677-07-40, e-mail: info@ac-t.ru
Identified antibiotic resistance of bifidobacteria and lactic acid bacteria and their consortia to the most frequently used antibiotics to treat. Found that most of the strains of probiotics are not resistant to antibiotics, so in order to achieve the effect of drugs with these cultures are recommended after completion of antibiotic therapy.
Key words: probiotic cultures, prebiotics, synbiotics, bifidobacteria, lactic acid bacteria, antibiotics, antibiotic resistance, antibiotic susceptibility, zone delays (inhibition) of growth.
641.1:613.24:519.855
РАЗРАБОТКА КОМПОЗИЦИЙ МЯСОПРОДУКТОВ ДЛЯ ИНДИВИДУАЛЬНОГО ПИТАНИЯ
Г.И. КАСЬЯНОВ \ Т.В. ЩЕДРИНА2, М.А. СЕЛИМОВ3, В.В. САДОВОЙ4
1 Кубанский государственный технологический университет,
350072, г. Краснодар, ул. Московская, 2; факс: (861) 259-65-92, электронная почта: kasyanov@kubstu.ru
2 Пятигорский государственный технологический университет,
357500, г. Пятигорск, ул. 40лет Октября, 56
3 Северо-Кавказский государственный технический университет,
355029, г. Ставрополь, пр-т Кулакова, 2; тел.: (865) 223-34-32
4 Ставропольский технологический институт сервиса (филиал) Южно-Российского государственного университета экономики и сервиса (ЮРГУЭС),
355035, г. Ставрополь, пр-т Кулакова, 41/1; факс: (865) 239-69-97, электронная почта: vsadovoy@yandex.ru
Представлены материалы по разработке композиций мясопродуктов для различных категорий граждан в зависимости от типа телосложения, веса, пола, возраста и характера трудовой деятельности. Разработанные мясопродукты рациональны по аминокислотному составу, имеют высокие органолептические и технологические характеристики, соответствуют рекомендациям врачей-диетологов.
Ключевые слова: индивидуальное питание, мясопродукты, нормы потребления, аминокислотный состав, рациональные композиции, компоненты рецептуры.
При разработке пищевых продуктов для индивиду- В современных технологиях мясопродуктов важ-
ального питания необходимо учитывать индивидуаль- ное значение имеет компонентный состав используе-
ные нормы по калориям, жирам, белкам, углеводам, а мого сырья, позволяющий регулировать пищевую цен-
также по широкому спектру нутриентов: холестерин, ность и функционально-технологические свойства го-
биологически активные добавки, клетчатка, витамины, тотьк издeлий, а также прогн°зировать ожидае^ш те-
минеральные вещества и т. п. Эти нормы зависят от по- рапевтический эффект.
ла, возраста, типа телосложения, образа жизни, привы- В зависимости от типа телосложения, веса, пола,
чек, индивидуальных особенностей организма челове- возраста и характера трудовой деятельности выполнен
ка. расчет энергозатрат и суточного потребления основ-
