CC BY
266. Doi, K. T-2 toxin-induced toxicity in pregnant mice and rats / K. Doi, N. Ishigami, S. Sehata // Int. J. Mol. Sci., - 9. - 2008. - p. 2146.
7. Kotal, F. Determination of trichothecenes in cereals / F. Kotal, K. Holadova, J. Hajslova, J. Poustka, Z. Radova // J. Chromatogr. A, - 830. - 1999. - p. 219.
8. Li, Y. High specific monoclonal antibody production and development of an ELISA method for monitoring T-2 toxin in rice / Y. Li, X. Luo, S. Yang, X. Cao, Z. Wang, W. Shi, S Zhang // J. Agric. Food Chem., - 62. - 2014. - p. 1492.
9. Li, Y. T-2 toxin, a trichothecene mycotoxin: review of toxicity, metabolism, and analytical methods / Z. Wang, R.C. Beier, J. Shen, D. De Smet, S. De Saeger, S. Zhang. // Agric. Food Chem., - 59. - 2011. - p. 3441.
10. Peng, D. Development of a sensitive monoclonal-based enzyme-linked immunosorbent assay for monitoring T-2 toxin in food and feed / D. Peng, F. Chang, Y. Wang, D. Chen, Z. Liu, X. Zhou, L. Feng, Z. Yuan // Food Addit. Contam. Part A Chem Anal Control Expo Risk Assess, - 33. -2016. - p. 683.
11. Semenov, E.I. Joint effect of the mycotoxins T-2 toxin, deoxynivalenol and zearalenone on the weaner pigs against a background of the infection load. / E.I. Semenov, L.E. Matrosova, M.Ya. Tremasov, E.Yu. Tarasova, M.A. Kryuchkova // Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical Sciences - 7 (1). - p. 1860
12. Semenov, E. I. Anaphylaxis Due to Combined Mycotoxicosis in Wister Rats / E. I. Semenov, N. N. Mishina, S. A. Tanaseva, I. R. Kadikov, A. M. Tremasova, K. K. Papunidi, S. Y. Smolentsev // Indian Vet. J. - 2018 .-- Vol. 95. - p. 16.
13. Shinozuka, J. T-2 toxin-induced apoptosis in hematopoietic tissues of mice / J. Shinozuka, M. Suzuki, N. Noguchi, T. Sugimoto, K. Uetsuka, H. Nakayama, K. Doi // Toxicol. Pathol., - 26. -1998. - p. 674.
14. Tanaka, T. Simultaneous determination of trichothecene mycotoxins and zearalenone in cereals by gas chromatography-mass spectrometry / T. Tanaka, A. Yoneda, S. Inoue, Y. Sugiura, Y. Ueno // J. Chromatogr. A, - 882. - 2000. - p. 23.
15. Urusov, A.E. Immunochemical methods of mycotoxin analysis / A.E. Urusov, A.V. Zherdev, B.B. Dzantiev // Appl. Biochem. Micro. - 46. - 2010. - p. 276.
16. Wu, Q. Metabolic pathways of trichothecenes / Q. Wu V. Dohnal, L. Huang, K. Kuca, Z. Yuan // Drug Metab. Rev., - 42. - 2010 .- p. 250.
17. Zhang, Z. Determination for multiple mycotoxins in agricultural products using HPLC-MS / MS via a multiple antibody immunoaffinity column / Z. Zhang, X. Hu, Q. Zhang, P. Li // J. Chromatogr. B analyt. Technol. Biomed. Life Sci., - 1021. - 2016. - p. 145.
УДК 619:616.2-084:636.21 DOI 10.33632/1998-698Х.2021-1-63-71
АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА ВЫСШЕГО ГРИБА COPRINUS COMATUS
Н.Н.Шульга - доктор ветеринарных наук,
И.С.Шульга - кандидат биологических наук, С.С. Дикунина, Е.П. Котельникова,
ФГБНУ Дальневосточный зональный научно-исследовательский ветеринарный институт, 675005, Амурская область, Благовещенск, ул. Северная, 112, dalznivilabvirus@mail.ru
Были проведены исследования по противовирусным препаратам с природным происхождением, с мягким терапевтическим действием и низкой токсичностью по сравнению с синтетическими лекарственными средствами. Если двадцатый век по праву считают «эрой антибиотиков», когда из микромицетов были выделены многие десятки антибиотиков, активных против целого ряда инфекционных заболеваний, то в 21 веке исследования сместились в сторону макромицетов из различных классов. В экспериментах использовали 10%-ю водо-этанольную настойку Coprinus comatus и 5 полевых культур микроорганизмов кишечной группы изолированных от больных диареей телят (Citrobacter diversus, Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginоsа). Суточные культуры, выращенные на питательном агаре подвергались смыву стерильным физиологическим раствором. Бактериальный смыв доводился до плотности соответствующей 0,5 по стандарту мутности МакФарланда. Бактериальную суспензию была засеяна газоном по поверхности чашки Петри с мясопептонным агаром в объеме 1-2 мл, равномерно распределяли по поверхности чашки путем покачивания, избыток культуры удаляли пипеткой. После чего чашки Петри подсушивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем накладывали бумажные диски диаметром 6 мм смоченные настойкой гриба. Инкубацию посевов проводили в термостате при t 37° С в течении суток. В результате экспериментов установлено, что настойка Coprinus comatus задерживает рост на искусственной питательной среде МПА полевых вирулентных штаммов возбудителей Citrobacter diversus, Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginоsа. Применения настойки Coprinus comatus в качестве антибактериальных препаратов показано при кишечных заболеваниях, в патогенезе которых принимают участие патогенные микроорганизмы: Citrobacter diversus, Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginоsа.
Ключевые слова: coprinus comatus, водно-этанольная настойка гриба, тест культуры, задержка роста, антибактериальная активность.
Введение. Если двадцатый век по праву считают «эрой антибиотиков», когда из микромицетов были выделены многие десятки антибиотиков, активных против целого ряда инфекционных заболеваний, то в 21 веке исследования сместились в сторону макромицетов из различных класссов. В странах Юго-Восточной Азии, направление медицины фунго-терапия (лечение грибами) существует не одну сотню лет. В Японии, Китае, Вьетнаме широко используется «золотая тройчатка»: грибы сиитаке, рейши и кордицепс, которые стали популярны в Европейских странах и Америке после открытия в грибах лечебных поли-сахаридов, кордицепина, аденозина, D-манитола, стеролов и также есть много биологически активных веществ, которые оказывают на орга-низм комплексное иммунорегулиру-ющее, антиоксидантное, цитопро-
текторное и другие действия. Кроме трех широкоизвестных грибов, сейчас в разных странах используются еще около двух десятков макромицетов в форме чая, спиртовых и водных экстрактов или выделенных чистых веществ типа полисахаридов, пептидов, гликозидов, антибактериальных препаратов [1,2,3].
В настоящее время проводятся исследования по противовирусным препаратам природного происхождения, во многих грибах есть множества ферментов которые способны блокировать вирусные инфекции. Существуют за последние годы документально заверенные и
подверженные факты о шляпочных грибах и их обладании лекарственными свойствами. Как и положено, при проведении исследований новых видов грибов проводят проверку, какими свойствами при лечении они обладают. На
исследовании по вегетации грибов и их условием хранения уделяется на присутствие антибактериальных и анти-фунгиальных химических соединений. В одном случае ферменты воздействуют на этиологию вирусного происхождения, а в другом воздействие их на фазу адсорбции на фоне рецепторов. Также имеются молекулы стимулирующие иммунитет.
При каждом употреблении гриба в пище в организме наблюдается снижение сахара в крови. Данный гриб часто сопоставляют с медицинскими препаратами. Гриб является настолько удивительным организмом, что люди могут использовать в разных видах и обладает разнообразными целями. Во всем мире широко используется грибы на ряду, с лекарственными препаратами и в качестве биологической добавки.
В природе существует класс высших грибов, которые с помощью особых органов размножения - базидии, имеют свойства размножаться к ним относятся базидиальные грибы можно применять в качестве лечебных и профилактических средств. Представители базидиальных грибов-макромицетов при проведении исследований можно сделать выводы, что многие грибы из этой группы являются природными
источниками с антибактериальными свойствами различных биологически активных веществ (полисахаридов, белков, каротиноидов, тритерпенов) с
антибактериальной, антифунгиальной, противо опухолевой, антивирусной активностью и иммуномодулирующим действием. Не все грибы относящиеся к этой группе могут обладать антибактериальными свойствами. Если при применении ядовитых грибов из этой группы которые относятся к базидиаль-ным их можно использовать в качестве лекарственных средств. В грибах содержатся витамины в их составе также есть макроэлементы обладающие антибактериальными свойствами.
В грибах имеются также как и в других продуктах растительного проис-
хождения есть ряд витаминов необходимых организму. Во многих странах мира ведутся широко исследования в народной медицине по биологическим свойствам базидиальных грибов [4,5].
На сегодняшний существует множество научных изысканий на фоне фармакологии. По медицинским показателям в составе грибов имеются фитонциды помогающие уничтожить вирусы, а антиоксиданты в грибах при низком холестерине в крови помогают снизить этот показатель и могут выводить соли накопившиеся в суставах. При исследовании грибов все факты относящиеся к грибам являются мотиваторами для разработки противовирусных средств. Coprinus comatus относится к семейству шампиньонов, роду Агариковых. Еще одно название (копринус) борется с неприятным состоянием, воздействуя на организм комплексным воздействием. Молодые грибы используются в приго-товлении пищи и только белые. Если гриб приобретает темный цвет, его нельзя использовать далее. При иссле-довании были обнаружены многие полезные свойства, которые норма-лизуют пищеварение и повышают аппетит. Помогают стабилизировать дав-ление и служат природным антиби-отиком. Диабетикам помогают снизить уровень сахара в крови. Обладают кровоостанавливающим и противоопухолевым действием. У грибов есть свойство противостоять воспалительным процесс-сам, которые вызывают патогенные микроорганизмы и бактерии. Грибы, которые растут в естественных природных условиях, содержат тирозин и гистидин. Является хорошим источни-ком по лекарственным веществам, по своему потенциалу обладает лечебным и профилактическим действием благотворно влияет на организм.[6,7,8,9].
Несмотря на хорошо известные свойства гриба противостоять болезнетворным микробам, конкретных исследований на эту тему в доступной нам
литературе не обнаружено. Поэтому перед нами была поставлена цель: по изучению антибактериальных свойств Coprinus comatus на болезнетворные микробы изолированные от больных диареей.
Материалы и методы исследования. Была использована экспериментальная 10% водоэтанольная нас-тойка Coprinus comatus. Настойку гриба получена в соотношении (1:1) свежего гриба и водно - спиртовой смеси на 100 мл. Данный препарат был выдержан в течение трех недель, далее проходила стадию фильтрования а фильтрат кото-рый остался был пригоден для дальней-шего использования в опытах.
Были взяты полевые культуры микроорганизмов изолированных от больных диареей телят кишечной группы (Citrobacter diversus, Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Proteus mirabilis, и сине-гнойная палочка).
Культуры, которые выращены на питательном агаре подверглись смыванию стерильным физиологическим раствором. После чего делался бактериальный смыв который необходимо было довести до плотности соответствующей 0,5 по стандарту мутности МакФарланда. Слегка приоткрывая поверхность чашки Петри на
МПА делался посев бактериальными культурами объемом 1-2 мл культуру легкими покачиваниями распределяли по поверхности, остатки культуры аккуратно удаляли пипеткой при слегка приоткрытой крышкой. Далее чашки Петри оставляли на столе в течение 10-15 минут чтобы успели подсушиться, температура должна быть комнатной, после подсушивания накладывался диск бумажный по центру примерно диаметром 6 мм пропитанный настойкой гриба. В течении суток в термостате при t 370 С была проведена инкубация посевов. После окончания инкубации мы оценивали задержку роста микро-организмов, определяли среднее арифме-тическое значение и есть ли отклонение от него, вычисляли достоверность раз-личия результатов и проводили фотогра-фирование [10,11].
Результаты исследования В эксперименте установлено, что настойка Coprinus comatus задерживает рост на искусственной питательной среде МПА полевых вирулентных штаммов возбудителей Citrobacter diversus, Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeru-ginоsа (рисунок 1,2,3, 4,5).
Рисунок - 1 Задержка роста тест культуры Pseudomonas aeruginоsа настойкой гриба (Coprinus comatus) (II)
В соответствии с рисунком 1 задержка роста настойкой Coprinus
Amatus тест культуры Pseudomonas аег^п^а в диаметре составила 9,0±0,3 мм.
Рисунок - 2 Задержка роста (Coprinus comatus) (II)
тест культуры Citrobacter diversus настойкой гриба
В соответствии с рисунком 2 задержка роста настойкой Coprinus
comatus тест культуры Citrobacter diversus в диаметре составила 8,0±0,2 мм.
Рисунок - 3 Задержка роста тест культуры Enterobacter cloacae настойкой гриба (Coprinus comatus) (II)
В соответствии с рисунком 3 comatus тест культуры Enterobacter cloacae
задержка роста настойкой Coprinus в диаметре составила 9,0 ±0,4 мм.
Рисунок - 4 Задержка роста тест культуры Escherichia coli настойкой гриба (Coprinus comatus) (II)
В соответствии с рисунком 4 comatus тест культуры Escherichia coli в
задержка роста настойкой Coprinus диаметре составила 7,0±0,1 мм.
Рисунок - 5 Задержка роста тест культуры Proteus mirabilis настойкой гриба (Coprinus comatus) (II)
В соответствии с рисунком 5 задержка роста настойкой Coprinus comatus тест культуры Proteus mirabilis в диаметре составила 12,0±0,4 мм.
Для более удобного восприятия данных полученных в результате экспериментов они сгруппированы в таблице (табл. 1).
Таблица 1- Задержка роста тест культур микроорганизмов настойкой Coprinus comatus
Тест культуры Задержка роста в мм
Настойка Coprinus comatus
Escherichia coli 7,0±0,1
Pseudomonas aeruginоsа 9,0±0,4
Citrobacter diversus 8,0±0,2
Enterobacter cloacae 9,0±0,3
Proteus mirabilis 12,0±0,4
M±m 9,0±0,7
В соответствии с таблицей настойка Coprinus comatus более эффек-тивно задерживала рост тест культуры Proteus mirabilis, слабее Pseudomonas aerug^s^ Enterobacter cloacae, более слабо Escherichia coli. В среднем задержка роста тест культур в диаметре составила 9,0±0,7 мм. Что свиде-тельствует об эффективности антибакте-риальных
свойств гриба.
Заключение. Проведенные эксперименты наглядно показали возможность применения настойки Coprinus comatus в
качестве антибактериальных препаратов при кишечных заболеваниях, в пато-генезе которых принимают участие пато-генные микроорганизмы: Citrobacter diversus, Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginоsа. В исследованиях была отме-чена антибактериальная и фунгицидная активность. В экстрактах свежих грибов была показана активность антибактериальных свойств против бактерий Escherichia coli противогрибковую активность.
Литература
1. Огарков, Б.Н., Огаркова Г.Р., Самусенок Л.В. Технологические культуры лекарственных грибов и их биологическая активность / Б.Н.Огарков , Г.Р. Огаркова Л.В. Самусенок //Успехи медицинской микологии. - 2015. - Т. 14. - С. 446.
2. Мазуркова, H.A., Высшие растения как основа для разработки противогриппозных препаратов / H.A. Мазуркова, Е.И. Филиппова, Е.В. Макаревич, И.Е. Лобанова, Г.И. Высочина //Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2014. - № 4. - С. 55
3. Фелиппова, Е.И., Противовирусные свойства водного и этанольного экстрактов навозника лохматого (coprinus comatus) in vitro и in vivo в отношении вируса гриппа / Е.И. Фелиппова, О.Ю. Мазурков, И.А. Горбунова, Н.Е. Костина, Н.А. Мазуркова // Антибиотики и химиотерапия. - 2018. - Т. 63.- № 11. - С. 8.
4. Саркина, И.С., Аннотированный список базидиальных и сумчатых макромицетов Карадагского природного заповедника / И.С. Саркина, Л.П. Миронова //Научные записки природного заповедника «Мыс Мартьян». - 2015. - № 6 - С. 297.
5. Теплякова Т. В. Гриб фарма: грибы против вирусов и опухолей / Т. В. Теплякова // Наука из первых рук. - 2017. - № 5 (76). - С.106.
6. Ломберг, М.Л., Рост культур coprinus comatus (o.f. mull.) pers. на жидких питательных средах. / М.Л. Ломберг, А.С. Бухало, Н.П. Полюх //Успехи медицинской микологии. - 2014. - Т.12. - С. 239.
7. Ефименко, Т.А., Антимикробная активность эндобионтов плодовых тел базидиальных грибов. / Т.А. Ефименко, Б.Ф. Васильева, А.А. Глухова, И.А. Маланичева, И.Г. Сумарукова, О.В. Ефременкова // Успехи медицинской микологии. - 2018. - Т.18. - С. 235.
8. Ефименко, Т.А., Антибиотическая активность бактерий - эндобионтов плодовых тел базидиальных грибов. / Т.А. Ефименко, И.А. Маланичева, Б.Ф. Васильева, А.А. Глухова,
И.Г. Сумарукова, Ю.В. Бойкова, Н.Д. Малкина, Л.П. Терехова, О.В. Ефременкова // Микробиология. - 2016. - Т.85. - № 6. - С. 740-747.
9. Костина, Н.Е., Выделение, характеристика и противовирусные свойства биологически активных веществ из высших грибов Западной Сибири. / Н.Е. Костина, Ж.Б. Ибрагимова, М.А. Проценко, Е.В. Макаревич, М.А.Скарнович, Е.И. Филиппова, И.А. Горбунова, В.А. Власенко, Г.П. Трошкова, Н.А. Мазуркова, Л.Н. Шишкина // Современные проблемы науки и образования. - 2013. - №. 3. - С. 336.
10. Определитель бактерий Берджи. В 2тт. /Хоулд Дж., Криг Н., Снит П., Стелми Дж., Уилльямс С.М.//М.: Мир. 1997.
11. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Федотов В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов // Справочник. Ред. Сидоров М.А. - М.: Колос. 1995.
ANTIBACTERIAL PROPERTIES OF THE HIGHER MUSHROOM COPRINUS COMATUS
N.N.Shulga, Doctor of Veterinary Sciences, I.S.Shulga, candidate of biological sciences
S.S. Dikunina, E. P. Kotelnikova,
FSBNU Far Eastern Zonal Scientific Research Veterinary Institute, 675005, Amur region, Blagoveshchensk, st. Severnaya, 112, dalznivilabvirus@mail.ru
Conducted research on the search and development of antiviral drugs based on compounds of natural origin, with a milder therapeutic effect and low toxicity compared to synthetic drugs. If the twentieth century is rightfully considered the "era of antibiotics" when many dozens of antibiotics that were active against a number of infectious diseases were isolated from micromycetes, then in the 21st century, research shifted towards macromycetes from various classes. In experiments, a 10% tincture of Coprinus comatus and 5 field cultures of microorganisms of the intestinal group isolated from diarrhea-infected calves (Citrobacter diversus, Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa) were used. Diurnal cultures grown on nutrient agar were washed off with sterile saline. The bacterial wash was adjusted to a density corresponding to 0.5 according to the McFarland turbidity standard. A bacterial suspension was sown with a lawn on the surface of a Petri dish with meat peptone agar (MPA) in a volume of 1-2 ml, evenly distributed over the surface of the cup by shaking, the excess culture was removed with a pipette. After that, the Petri dishes were dried at room temperature for 15 minutes, then paper discs with a diameter of 6 mm were preliminarily moistened with tincture of the mushroom. The incubation of crops was carried out at t 370 C for 24 hours. As a result of experiments, it was found that the tincture of Coprinus comatus delays the growth offield virulent strains of the pathogens Citrobacter diversus, Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa on the artificial nutrient medium MPA. The use of tincture of Coprinus comatus as a medicinal product is indicated for intestinal diseases, in the pathogenesis of which pathogenic microorganisms participate: Citrobacter diversus, Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa.
Keywords: coprinus comatus, water-ethanol tincture of the fungus, culture test, growth retardation, antibacterial activity.
References
1. Ogarkov B.N., Ogarkova G.R., Samusenok L.V. Technological cultures of medicinal mushrooms and their biological activity // Advances in medical mycology. - 2015 .- T. 14. - p. 446.
2. Mazurkova N.A., Filippova E.I., Makarevich E.V., Lobanova I.E., Vysochina G.I. Higher plants as a basis for the development of anti-influenza drugs. // Questions of biological, medical and pharmaceutical chemistry. - 2014. - No. 4. - p. 55
3. Felippova E.I., Mazurkov O.Yu., Gorbunova I.A., Kostina N.E., Mazurkova N.A. Antiviral properties of water and ethanol extracts of shaggy dung beetle (coprinus comatus) in vitro and in vivo against influenza virus // Antibiotics and chemotherapy. - 2018. - T. 63. - No. 11. - p. 8.
4. Sarkina I.S., Mironova L.P. Annotated list of basidial and marsupial macromycetes of the Karadag nature reserve. // Scientific notes of the natural reserve "Cape Martyan". - 2015. - No. 6 -p. 297.
5. Teplyakova TV Pharma mushroom: mushrooms against viruses and tumors. // Science first hand. - 2017. - No. 5 (76). - p.106.
6. Lomberg M.L., Bukhalo A.S., Polyukh N.P. Growth of cultures of coprinus comatus (o.f. mull.) Pers. on liquid nutrient media. // Advances in medical mycology. - 2014. - T.12. - p. 239.
7. Efimenko T.A., Vasilyeva B.F., Glukhova A.A., Malanicheva I.A., Sumarukova I.G., Efremenkova O.V. Antimicrobial activity of endobionts of fruit bodies of basidiomycetes. // Advances in medical mycology. - 2018. - T.18. - p. 235.
8.Efimenko T.A., Malanicheva I.A., Vasilyeva B.F., Glukhova A.A., Sumarukova I.G., Boykova Yu.V., Malkina N.D., Terekhova L.P., Efremenkova O.V. Antibiotic activity of bacteria -endobionts of fruit bodies of basidiomycetes. // Microbiology. - 2016. - T. 85. - No. 6. - p. 740.
9.Kostina N.E., Ibragimova Zh.B., Protsenko M.A., Makarevich E.V., Skarnovich M.A., Filippova E.I., Gorbunova I.A., Vlasenko V.A., Troshkova G.P., Mazurkova N.A., Shishkina L.N. Isolation, characterization and antiviral properties of biologically active substances from higher fungi of Western Siberia. // Modern problems of science and education. - 2013. - No. 3. - p. 336.
10. Bergey's guide to bacteria. At 2mm. / Hold J., Krieg N., Snith P., Stelmi J., Williams S.M. // M .: Mir. 1997.
11. Sidorov M.A., Skorodumov D.I., Fedotov V.B. Keys to zoopathogenic microorganisms // Handbook. Ed. Sidorov M.A. M .: Kolos. 1995.
