Активность перекисного окисления липидов при пероральном введении флавоноидсодержащего экстракта бессмертника песчаного на фоне перевиваемого рака печени РС-1 Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»



42 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

тетразолилбромидом (МТТ) по отношению к культуре Цель исследования — разработка мышиного гомологич-клеток карциномы легких человека А549 (CCL-185). Эф- ного биспецифичного анти-СВ3-анти-СВ19-антитела и его фект на микротубулярную сеть тех же клеток определен характеристика in vitro. иммунофлуоресцентным методом с использованием мо- Материалы и методы. Дизайн гена гомолога выполнен ноклональных антител мышей к а-тубулину (Sigma, США) в соответсвии с дизайном гена биспецифичного антитела и флуоресцентно меченных AlexaFlour488 козьих вторич- GNR-047. Все работы, связанные с получением образца ных антител к иммуноглобулинам мышей (Invitrogen, Гер - гомологичного антитела, выполняли в соответствии с вну-мания). тренними операционными процедурами. Связывание го-Результаты. Аналоги тубулокластина с модифициро- мологичной молекулы с рецепторами CD3 и CD19 на по-ванным адамантановым фрагментом проявляют цитоток- верхности клеток мышиных линий Bcl-1 и ТК-1, клеток сичность в наномолярном интервале концентраций, при- крови и селезенки мышей контролировали методом прочем большинство из них более активны (IC50 = 6 — 21 нМ), точной цитометрии. Специфическую активность гомолога чем колхицин (IC50 = 27 ± 2 нМ). Гидрофобные и объемные определяли в тесте антителозависимой клеточно-опосре-заместители в адамантане независимо от их расположения дованной цитотоксичности (ADCC). мало влияют на величину цитотоксичности, которая оста- Результаты. При использовании последовательностей ется во всех случаях высокой. Уменьшение активности антител, специфичных к мышиным рецепторам CD3 производного аминоадамантана (IC50 = 400 ± 20 нМ), по- и CD19, проведен дизайн гена гомологичного биспеци-видимому, связано с высокой степенью его ионизации фичного антитела. Сконструированы экспрессионные и низкой способностью проникновения в клетку. Все со- векторы с синтетическим целевым геном. Образец мыши-единения данной серии проявляют сильный кластеризую- ного гомолога соответствующего качества получен в ре-щий эффект. Цитотоксичность производных тубулокласти- зультате хроматографического выделения из культуральной на с модифицированным линкером зависит от числа жидкости стабильно трансфицированных клеток CHO. метиленовых групп в различных фрагментах цепи. Показано связывание гомолога с рецепторами CD3 и CD19 Заключение. Для ряда аналогов тубулокластина с вари- на поверхности клеток мышиных линий Bcl-1 и ТК-1, лим-ациями каркасной группировки продемонстрировано уси- фоцитов и спленоцитов мышей. Гомологичное мышиное ление цитотоксичности по отношению к клеткам карци- антитело обладает соответствующей разрабатываемому номы легких А549 по сравнению с колхицином. препарату высокой ADCC-активностью при использова-Работа поддержана грантами РФФИ (№ 15-03-04894) и РАН нии спленоцитов мыши в качестве эффекторных клеток. (ОХНМ 9). Заключение. Получен и охарактеризован образец мышиного биспецифичного анти-CD3-анти-CD19-антитела. С.В. Иванов, В.М. Симонов, Р.Л. Анисимов, Данные проведенных исследований свидетельствуют, о том, А.А. Пискунов, Г. Н. Порошин, Е. В. Сазонова, что полученное гомологичное биспецифичное антитело по сво-И.П. Фабричный, С. Г. Аббасова, А. П. Карпов им in vitro характеристикам соответствует о том, что разраба-РАЗРАБОТКА ГОМОЛОГИЧНОЙ МОЛЕКУЛЫ тываемому препарату GNR-047 и может быть использовано ИННОВАЦИОННОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ для проведения токсикологических исследований на мышах. БИСПЕЦИФИЧНОГО АНТИТЕЛА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ В-КЛЕТОЧНЫХ ЛИМФОМ С ЦЕЛЬЮ ПРОВЕДЕНИЯ А.В. Ивличев, Д.А. Мудрак, Н.А. Наволокин, ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ Г.А. Афанасьева, С.А. Тычина, М. О. Корчаков, НА МЫШАХ Н.В. Полуконова, А.Б. Бучарская, Г.Н. Маслякова ООО «МБЦ«Генериум», Москва АКТИВНОСТЬ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ Введение. Несмотря на достигнутые успехи в лечении ЛИПИДОВ ПРИ ПЕРОРАЛЬНОМ ВВЕДЕНИИ В-клеточных лимфом, потребность в разработке новых ФЛАВОНОИДСОДЕРЖАЩЕГО ЭКСТРАКТА препаратов и подходов для их лечения остается довольно БЕССМЕРТНИКА ПЕСЧАНОГО НА ФОНЕ острой. Инновационный отечественный препарат нового по- ПЕРЕВИВАЕМОГО РАКА ПЕЧЕНИ РС-1 коления GNR-047 на основе биспецифичных моноклональ- ГБОУ ВПО «Саратовский ГМУ им. В. И. Разумовского» ных антител открывает новые перспективы для успешного Минздрава России, Саратов лечения В-клеточных лимфом, устойчивых к стандартной Цель исследования — изучить влияние флавоноидсо-таргетной терапии. Препарат GNR-047 связывается с ре- держащего экстракта бессмертника песчаного на актив-цептором CD3 Т-клеток и с рецептором CD19 опухолевых ность перекисного окисления липидов (ПОЛ) в экспери-В-клеток, что приводит к их физическому сближению, менте in vivo на лабораторных крысах с перевитым раком в результате которого формируется иммунологический си- печени. напс, приводящий к лизису опухолевых CD19+-клеток. Материалы и методы. Сырье собрано на территории Ввиду отсутствия релевантного вида животного, необхо- Саратовской области, экстракт бессмертника получен ав-димого для проведения токсикологических исследований торским способом (патент № 2482863). Дизайн экспери-антитела GNR-047, была инициирована разработка его мента: животные с перевитым раком печени РС-1 были мышиного гомолога. Настоящая работа посвящена полу- разделены на 2 группы. Первая — группа сравнения с опу-чению образца биспецифичного антитела, связывающего- холью без воздействия экстракта; вторая группа — экспе-ся с мышиными рецепторами CD3 и CD19, и изучению его риментальная с однократным пероральным введением свойств in vitro. экстракта бессмертника песчаного через 1 мес после пере-

№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

43

вивки опухоли. Животных выводили из эксперимента путем декапитации, анализ содержания гидроперекисей липидов и молекул средней массы (МСМ) проводили в сыворотке крови стандартными спектрофотометрическими методами.

Результаты. При пероральном введении экстракта бессмертника животным с опухолью отмечали уменьшение МСМ и гидроперекисей липидов в сыворотке крови относительно соответствующих показателей группы сравнения, что свидетельствует о подавлении активности ПОЛ и снижении выраженности аутоинтоксикации.

Заключение. Пероральное введение экстракта бессмертника белым крысам с перевитым раком печени РС-1 сопровождается уменьшением активности ПОЛ, что подтверждает перспективность дальнейшей детализации механизмов антиоксидантного эффекта растительных экстрактов, содержащих флавоноиды.

Е.В. Игнатьева, И. В. Ярцева, Н.А. Дмитричева, Е.В. Санарова, И.Д. Гулякин, В.А. Еремина, Н.И. Тихонова, З.С. Шпрах

ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ЛИОФИЛИЗИРОВАННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ЛХС-1208

ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва

Введение. ЛХС-1208 — препарат из класса индолокар-базолов, впервые синтезированный в лаборатории химического синтеза НИИ ЭДиТО. Разработка лекарственной формы (ЛФ) ЛХС-1208 потребовала нестандартных решений, так как фармацевтическая субстанция практически нерастворима в воде. Из ряда предложенных моделей ЛФ, отличающихся составом и содержанием вспомогательных веществ, выбрана оптимальная, в состав которой включен диметилсульфоксид (ДМСО).

Цель исследования — стандартизация лиофилизиро-ванной ЛФ ЛХС-1208.

Материалы и методы. Образцы ЛФ ЛХС-1208 исследовали посредством гравиметрии, спектрофотометрии, по-ляриметрии, потенциометрии, тонкослойной хроматографии.

Результаты. Анализ проводили по следующим критериям: описание, растворимость, средняя масса содержимого флакона и отклонение от средней массы, подлинность, прозрачность раствора и испытание на отсутствие механических примесей, рН раствора, содержание влаги, количественное определение. ЛФ ЛХС-1208 представляет собой сухую пористую массу желтого цвета. Подлинность подтверждали спектрофотометрически, а также методом тонкослойной хроматографии. Средняя масса содержимого флакона варьировала от 0,62 до 0,76 г; отклонение от средней массы не превышало ±5,0 %. Растворы содержимого флакона в 20 мл воды были прозрачны, а значения рН варьировала от 3,5 до 4,5. Потеря в массе при высушивании над фосфора пентоксидом при комнатной температуре и остаточном давлении 5 мм рт. ст. не превышала 7,0 %. Как указывалось выше, в состав исследуемой ЛФ включен ДМСО, который является единственным компонентом ЛФ, содержащим серу. Для количественного определения ДМСО в препарате был использован метод определения серы по Шенигеру. Содержание ДМСО в ЛФ

составило 15,0—17,0 %. Для количественного определения ЛХС-1208 в ЛФ была применена спектрофотометрическая методика с использованием стандартного образца. Содержание действующего вещества в 1 флаконе находилось в пределах от 8,1 до 9,9 мг.

Заключение. Выбраны критерии качества и разработаны методики их определения для стандартизации ЛХС-1208, лиофилизата для приготовления раствора для инъекций 9 мг.

Е.В. Игнатьева, Н.А. Дмитричева, И.В. Ярцева, М.А. Барышникова, Н.А. Машалова, Л.Л. Николаева, З.С. Шпрах

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОРМУСТИНА В ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЕ

ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва

Введение. Ормустин — оригинальный отечественный препарат из класса нитрозоалкилмочевин, синтезированный в ИОС УрО РАН. Учеными РОНЦ им. Н.Н. Блохина разработана лиофилизированная лекарственная форма (ЛФ) Ормустина.

Цель исследования — совершенствование методики количественного определения содержания Ормустина в ЛФ и технологическом концентрате.

Материалы и методы. Субстанция и ЛФ Ормустина изучались методом спектрофотометрии.

Результаты. Для количественного определения содержания Ормустина в технологическом концентрате и ЛФ предложена спектрофотометрическая методика прямого определения вещества с использованием стандартного образца (СО). В электронном спектре поглощения Ормус-тина в области от 200 до 450 нм наблюдаются максимумы при длинах волн: 229 ± 2 нм и 396 ± 2 нм. Максимум при длине волны 229 ± 2 нм наиболее интенсивный и позволяет работать при низких концентрациях действующего вещества, что важно, поскольку Ормустин плохо растворим в воде и спирте этиловом 96 %. Ранее была разработана методика определения Ормустина при длине волны 229 ± 2 нм. В качестве СО использовали субстанцию, из которой произвели серии испытуемой лекарственной формы. Однако повидон, который составляет значительную часть ЛФ по массе, имеет собственное поглощение в данной области спектра и мешает определению Ормустина. При выполнении данного варианта методики важно четко соблюдать концентрацию повидона в СО и растворе сравнения, что существенно усложняет подготовку пробы и увеличивает время проведения анализа. В связи с этим предложен другой вариант методики, где в качестве аналитического используется максимум поглощения при длине волны 396 ± 2 нм. Для увеличения растворимости основного вещества и достижения оптимальной концентрации раствора в качестве растворителя использована кислота хлористоводородная 0,01 М. Вспомогательные вещества, входящие в состав ЛФ, не поглощают в этой области спектра и не мешают определению активного вещества. Это позволяет использовать для раствора сравнения растворитель. Интенсивность поглощения растворов ЛФ в данном максимуме подчиняется закону Бугера—Ламберта—Бера в диапазоне концентраций 0,75—2,5 мг/мл в пересчете на Ормустин. Разработанная методика обладает достаточной точностью

№1 / том 15 / 2016

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ