CC BY
20
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
43
вивки опухоли. Животных выводили из эксперимента путем декапитации, анализ содержания гидроперекисей липидов и молекул средней массы (МСМ) проводили в сыворотке крови стандартными спектрофотометрическими методами.
Результаты. При пероральном введении экстракта бессмертника животным с опухолью отмечали уменьшение МСМ и гидроперекисей липидов в сыворотке крови относительно соответствующих показателей группы сравнения, что свидетельствует о подавлении активности ПОЛ и снижении выраженности аутоинтоксикации.
Заключение. Пероральное введение экстракта бессмертника белым крысам с перевитым раком печени РС-1 сопровождается уменьшением активности ПОЛ, что подтверждает перспективность дальнейшей детализации механизмов антиоксидантного эффекта растительных экстрактов, содержащих флавоноиды.
Е.В. Игнатьева, И. В. Ярцева, Н.А. Дмитричева, Е.В. Санарова, И.Д. Гулякин, В.А. Еремина, Н.И. Тихонова, З.С. Шпрах
ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ЛИОФИЛИЗИРОВАННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ЛХС-1208
ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Введение. ЛХС-1208 — препарат из класса индолокар-базолов, впервые синтезированный в лаборатории химического синтеза НИИ ЭДиТО. Разработка лекарственной формы (ЛФ) ЛХС-1208 потребовала нестандартных решений, так как фармацевтическая субстанция практически нерастворима в воде. Из ряда предложенных моделей ЛФ, отличающихся составом и содержанием вспомогательных веществ, выбрана оптимальная, в состав которой включен диметилсульфоксид (ДМСО).
Цель исследования — стандартизация лиофилизиро-ванной ЛФ ЛХС-1208.
Материалы и методы. Образцы ЛФ ЛХС-1208 исследовали посредством гравиметрии, спектрофотометрии, по-ляриметрии, потенциометрии, тонкослойной хроматографии.
Результаты. Анализ проводили по следующим критериям: описание, растворимость, средняя масса содержимого флакона и отклонение от средней массы, подлинность, прозрачность раствора и испытание на отсутствие механических примесей, рН раствора, содержание влаги, количественное определение. ЛФ ЛХС-1208 представляет собой сухую пористую массу желтого цвета. Подлинность подтверждали спектрофотометрически, а также методом тонкослойной хроматографии. Средняя масса содержимого флакона варьировала от 0,62 до 0,76 г; отклонение от средней массы не превышало ±5,0 %. Растворы содержимого флакона в 20 мл воды были прозрачны, а значения рН варьировала от 3,5 до 4,5. Потеря в массе при высушивании над фосфора пентоксидом при комнатной температуре и остаточном давлении 5 мм рт. ст. не превышала 7,0 %. Как указывалось выше, в состав исследуемой ЛФ включен ДМСО, который является единственным компонентом ЛФ, содержащим серу. Для количественного определения ДМСО в препарате был использован метод определения серы по Шенигеру. Содержание ДМСО в ЛФ
составило 15,0—17,0 %. Для количественного определения ЛХС-1208 в ЛФ была применена спектрофотометрическая методика с использованием стандартного образца. Содержание действующего вещества в 1 флаконе находилось в пределах от 8,1 до 9,9 мг.
Заключение. Выбраны критерии качества и разработаны методики их определения для стандартизации ЛХС-1208, лиофилизата для приготовления раствора для инъекций 9 мг.
Е.В. Игнатьева, Н.А. Дмитричева, И.В. Ярцева, М.А. Барышникова, Н.А. Машалова, Л.Л. Николаева, З.С. Шпрах
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОРМУСТИНА В ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЕ
ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Введение. Ормустин — оригинальный отечественный препарат из класса нитрозоалкилмочевин, синтезированный в ИОС УрО РАН. Учеными РОНЦ им. Н.Н. Блохина разработана лиофилизированная лекарственная форма (ЛФ) Ормустина.
Цель исследования — совершенствование методики количественного определения содержания Ормустина в ЛФ и технологическом концентрате.
Материалы и методы. Субстанция и ЛФ Ормустина изучались методом спектрофотометрии.
Результаты. Для количественного определения содержания Ормустина в технологическом концентрате и ЛФ предложена спектрофотометрическая методика прямого определения вещества с использованием стандартного образца (СО). В электронном спектре поглощения Ормус-тина в области от 200 до 450 нм наблюдаются максимумы при длинах волн: 229 ± 2 нм и 396 ± 2 нм. Максимум при длине волны 229 ± 2 нм наиболее интенсивный и позволяет работать при низких концентрациях действующего вещества, что важно, поскольку Ормустин плохо растворим в воде и спирте этиловом 96 %. Ранее была разработана методика определения Ормустина при длине волны 229 ± 2 нм. В качестве СО использовали субстанцию, из которой произвели серии испытуемой лекарственной формы. Однако повидон, который составляет значительную часть ЛФ по массе, имеет собственное поглощение в данной области спектра и мешает определению Ормустина. При выполнении данного варианта методики важно четко соблюдать концентрацию повидона в СО и растворе сравнения, что существенно усложняет подготовку пробы и увеличивает время проведения анализа. В связи с этим предложен другой вариант методики, где в качестве аналитического используется максимум поглощения при длине волны 396 ± 2 нм. Для увеличения растворимости основного вещества и достижения оптимальной концентрации раствора в качестве растворителя использована кислота хлористоводородная 0,01 М. Вспомогательные вещества, входящие в состав ЛФ, не поглощают в этой области спектра и не мешают определению активного вещества. Это позволяет использовать для раствора сравнения растворитель. Интенсивность поглощения растворов ЛФ в данном максимуме подчиняется закону Бугера—Ламберта—Бера в диапазоне концентраций 0,75—2,5 мг/мл в пересчете на Ормустин. Разработанная методика обладает достаточной точностью
44
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
и воспроизводимостью. Относительная ошибка определения не превышает 2,0 %.
Заключение. Разработан новый вариант методики количественного определения основного действующего вещества в ЛФ Ормустина для включения в проект фармакопейной статьи предприятия.
Е.В. Исаева, Е.Е. Бекетов, С.Н. Корякин, М.В. Трошина, С.Е. Ульяненко
ИССЛЕДОВАНИЕ СВОЙСТВ ЗОЛОТОСОДЕРЖАЩЕГО НАНОКОМПОЗИТА НА ОСНОВЕ ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЫ В ЭКСПЕРИМЕНТАХ IN VITRO
МРНЦим. А.Ф. Цыба - филиал ФГБУНМИРЦ Минздрава России, Обнинск
Введение. Исследования, направленные на развитие фотон-захватной терапии, интенсивно проводятся в последние годы. Это касается синтеза новых соединений для проявления фотон-захватных реакций, определения цитотоксичности предлагаемых веществ, проведения радиобиологического тестирования на клеточных культурах.
Цель исследования — определение цитотоксичности золотосодержащего соединения на основе гиалуроновой кислоты и меланина и подбор оптимальных концентраций золота для экспериментальной фотон-захватной терапии в исследованиях in vitro.
Материалы и методы. Цитотоксичность нанокомпози-та с содержанием золота 20,8 ± 0,2 %, предоставленного компанией «Мартинекс» (Москва), оценивали по торможению пролиферативной активности клеток мышиной меланомы В16. Исследуемые концентрации золота — 50, 100, 200, 400 и 800 мкг на 1 мл питательной среды. Также клетки меланомы В16, культивируемые с добавлением на-нокомпозита в концентрациях 50 и 100 мкг золота на 1 мл среды и в его отсутствие, подвергали рентгеновскому облучению (4 Гр). Облучение проводили на установке для радиационной обработки крови «СОУК». Источники излучения — 2 рентгеновские трубки, установленные в излучателях РАП 220—5, напряжение на аноде — 180 кВ. Мощность дозы облучения — 1,3 Гр/мин. После облучения определяли клоногенную активность клеток.
Результаты. Установлено, что добавление золотосодержащего соединения в питательную среду оказывает влияние на пролиферацию клеток меланомы В16. Дозы золота 50 и 100 мкг/мл среды не вызывают выраженного торможения пролиферативной активности: число делений клеток в контроле и в опытных группах находятся в пределах 3,4—3,8. В диапазоне концентраций золота 200 и 400 мкг/мл среды проявлялись цитостатические свойства изучаемого нанокомпозита. С увеличением концентрации золота до 800 мкг/мл среды отмечено почти полное подавление пролиферации клеток — цитотоксические свойства. Облучение клеток меланомы В16 в дозе 4 Гр вызывает их частичную гибель (выживаемость почти в 4 раза ниже, чем в не-облученном контроле). Добавление золота в питательную среду за 24 ч до облучения в концентрации 50 мкг/мл среды не влияет на этот показатель. Введение золота в среду в концентрации 100 мкг/мл среды приводит практически к полному подавлению жизнеспособности клеток: выживаемость составила 5 % от группы необлученного контроля
и была в 5 раз ниже, чем в случае облучения без присутствия золота в питательной среде или при его концентрации 50 мкг/мл среды.
Заключение. Результаты исследования на клетках меланомы В16 мышей позволили установить концентрацию золота, не обладающую цитотоксическим действием и в то же время позволяющую существенно повысить канцерогенную эффективность рентгеновского облучения без увеличения физической дозы.
Исследования проведены при финансовой поддержке РФФИ (проект № 14-44-03084).
А. В. Калугин1, Д. В. Новиков1, Н.Р. Хилал1,
К.А. Шахова2, Н.Н. Гурина1, Е.Ю. Конторщикова3,
М.Е. Мамаева4, В. В. Новиков1
ЭКСПРЕССИЯ МАТРИЧНЫХ РИБОНУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ TRAG3 И HAGE В ОПУХОЛЕВЫХ ОЧАГАХ ПРИ РАКЕ ЭНДОМЕТРИЯ
1ФГАОУ ВО «ННГУ им. Н.И. Лобачевского», Нижний Новгород
2ГБОУ ВПО НижГМА Минздрава России, Нижний Новгород 3ГБУЗ НО «НОКБ им. Н.А. Семашко», Нижний Новгород 4ФБУЗ ПОМЦФМБА России, Нижний Новгород
Введение. В России заболеваемость злокачественными новообразованиями женской репродуктивной системы ежегодно увеличивается. Рак эндометрия (РЭ) занимает 1-е место среди всех новообразований женской половой системы. В настоящее время существует потребность в простых и доступных методах ранней диагностики и оценки эффективности терапии онкологических заболеваний. Для разработки таких методов могут быть использованы тесты на экспрессию раково-тестикулярных (cancer-testis, CT) генов. Экс-прессируются СТ-гены в иммунопривилегированных тканях и стволовых клетках опухолей.
Цель исследования — изучение особенностей экспрессии матричных рибонуклеиновых кислот (мРНК) TRAG3 и HAGE в опухолевых очагах при РЭ.
Материалы и методы. Периферическую кровь 5 клинически здоровых доноров и опухолевые очаги 22 больных РЭ тестировали на экспрессию мРНК TRAG3 и HAGE с помощью метода полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР). Результаты ОТ-ПЦР оценивали методом электрофореза в агарозном геле с бромистым этидием.
Результаты. В образцах периферической крови здоровых доноров мРНК СТ-генов не выявлено. Суммарная частота обнаружения мРНК TRAG3 и HAGE в опухолевых очагах больных РЭ составила 64 % (14 из 22 образцов). В 13 (59 %) образцах опухолей была обнаружена мРНК TRAG3, в 8 (36 %) — мРНК HAGE. В 7 образцах опухолей была выявлена мРНК 1 СТ-гена, в 7 образцах — мРНК TRAG3 и HAGE одновременно. При опухолевом росте в пределах эндометрия мРНК TRAG3 была обнаружена в 1 из 6 образцов, мРНК HAGE — не обнаружена. При инфильтратив-ном росте опухоли до половины толщины миометрия мРНК TRAG3 и HAGE были выявлены в 5 из 8 образцов. При опухолевом росте в половину толщины миометрия и более мРНК TRAG3 детектировалась в 7 из 8 образцов, мРНК HAGE — в 3 из 8 образцов. Следует отметить,
