CC BY
106
лаборатории, реактивов, наличия серийных компактных приборов, обладания специальными навыками во многом ограничивает применение большинства биофизических методов в экспертной практике. Метод лазерно-индуци-рованной флуоресцентной спектроскопии достаточно прост в осуществлении, так как позволяет оценивать метаболическую и митохондриальную активность в ткани, in situ, не прибегая к использованию сложных лабораторных методов.
Цель исследования - выявить закономерности изменения интенсивности флуоресценции коферментов НАДН и ФАД в скелетной мышце в различные сроки после наступления смерти.
Эксперимент проведен на крысах мужского и женского пола линии Sprague Dawley, масса животных 250-300 г. Эвтаназию животных осуществляли цервикальной дислокацией под общей анестезией хлоралгидратом. Трупы животных находились при комнатной температуре в течение времени в соответствии с выделенной группой. Для оценки интенсивности флуоресценции коферментов НАДН и ФАД использовали анализатор коферментов «Лазма МЦ-3» (ООО НПП «Лазма МЦ-3, Россия), с зондирующем излучением с длиной волны 365 нм (UV) и 450 нм (B).
Доступ к мышце бедра крысы обеспечивали через разрез кожи длиной 1 см., устанавливали волоконно-оптический зонд анализатора коферментов на участок поверхности скелетной мышцы.
Показатели интенсивности флуоресценции кофермен-тов НАДН и ФАД, редокс-отношения (НАДН/ФАД) регистрировали в различные сроки после смерти животного. Провели 11 серий (I-XI) измерений, по 5 крыс в каждой серии: I - регистрация показателей при жизни; II - через 5 мин. после прекращения жизнедеятельности; III - через 1,5 ч.; IV - через 3 ч.; V - через 4,5 ч.; VI - через 6 ч.; VII -через 7,5 ч.; VIII - через 12 ч.; IX - через 24 ч.; X - через 36 ч.; XI - через 48 ч. Показатели были зафиксированы и сохранены в ПК с программным обеспечением к аппарату «Лазма МЦ-3».
Выявлено постепенное возрастание показателей интенсивности флуоресценции НАДН, с 5-й минуты посмертного периода до 3 ч. Максимальный средний показатель интенсивности флуоресценции НАДН был отмечен через 3 ч. после наступления смерти. Начиная с 4,5 до 48 ч. посмертного периода было установлено постепенное снижение интенсивности флуоресценции НАДН. Возрастание показателей НАДН обусловлено анаэробным гликолизом в условиях посмертной аноксии. Снижение уровня интенсивности флуоресценции после 3-х часов, согласно нашим предположениям, связано с разобщением связи кофермента с белками в результате активизации протеолитических ферментов, так как известно, что флуоресцирует преимущественно связанная с белками форма НАДН.
Значения коэффициентов флуоресценции ФАД в первые 4,5 ч. оставались приблизительно на одном уровне. Через 5 ч. после смерти наблюдалось их снижение у всех крыс. С 12 ч. до 48 ч. было отмечено постепенное возрастание коэффициентов флуоресценции ФАД. Известно, что молекула ФАД, находится внутри белкового комплекса, при разрушении которого, в данном условиях под действием протеолитических ферментов в процессе аутолиза, происходит увеличение интенсивности его флуоресценции.
Было выявлено, что отношение коэффициентов флуоресценции НАДН к ФАД (редокс-отношение, РО) принимает значения больше единицы в первые 12 ч. после смерти, а в интервале 12-48 ч. зарегистрированные показатели редокс-отношения меньше единицы.
ВЫВОДЫ
В результате проведенного исследования была выявлена закономерность интенсивности посмертной флуоресценции коферментов в мышечной ткани, что позволяет рассматривать изменения исследуемых показателей, как потенциальный критерий определения давности наступления смерти.
ЗНАЧЕНИЕ МИКРОСКОПИЧЕСКИХ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ПРИЗНАКОВ РЕЗОРБЦИИ КРОВОИЗЛИЯНИЙ В ДИАГНОСТИКЕ ДАВНОСТИ ПОВРЕЖДЕНИЙ МЯГКИХ
ТКАНЕЙ И ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВ_
Р. Р. Сеитова
ГБУЗ МО «Бюро СМЭ», Москва Доклад посвящен одной из самых сложных задач судебной медицины - определению давности повреждений мягких тканей и внутренних органов. Одним из критериев установления давности повреждений является определение процесса резорбирования кровоизлияний. В докладе даются общие определения процесса резорбции, указаны сроки ее появления и динамика развития.
Ключевые слова: резорбция, макрофаг, гемосиде-рофаг, внутриклеточный гемосидерин, внеклеточный гемосидерин, зерна гемосидерина Одной из важных и сложных задач в судебной медицине является установление давности причинения повреждений. Ведущее место в решении данной проблемы принадлежит судебно-медицинской гистологии. Выводы о давности повреждения строятся на основе изучения микроскопической морфологической картины вазомоторных, воспалительных, пролиферативных изменений, а также резорбирования кровоизлияния. Это реактивные процессы, возникающие в ответ на повреждение. К сожалению, с увеличением сроков переживания травмы критериев определения ее давности становится все меньше. К наиболее отдаленному реактивному процессу относится резорбция кровоизлияния.
В зоне кровоизлияния со временем происходит процесс деструкции эритроцитов. С морфологической точки зрения процесс резорбции кровоизлияния представляет собой эритрофагию распавшихся элементов крови клетками макрофагального типа. Одним из продуктов распада эритроцитов является гемосидерин, образующийся в следствии внутриклеточного ферментативного расщепления гемоглобина. При окраске гематоксилин-эозином гемосидерин окрашивается в коричневый или золотистый цвет. Присутствие в гемосидерине железа позволяет наиболее достоверно выявлять его с помощью специальной окраски по Перлсу. При этой окраске гемосидерин окрашивается в синий или зеленоватый цвет. Клетки ма-крофагального типа, в которых образуется гемосидерин, называются сидерофагами или гемосидерофагами.
Гемосидерин образовывается в норме и патологии. В норме при естественном распаде эритроцитов небольшое количество гемосидерина обнаруживается в моноци-тарных фагоцитах костного мозга, селезенки и печени.
При патологии различают общий и местный гемоси-дероз. Общий гемосидероз возникает при внутрисосуди-стом гемолизе эритроцитов, развивающемся при заболеваниях крови, некоторых острых отравлениях и других острых патологических процессах.
Местный гемосидероз - состояние, развивающееся при внесосудистом разрушении эритроцитов (экстрава-скулярный гемолиз), т.е. в очагах кровоизлияний. Местный гемосидероз легких возникает при митральном
пороке сердца, чаще стенозе, кардиосклерозе и другой патологии сердца. Хронический венозный застой в легких ведет к множественным диапедезным кровоизлияниям, что и способствует формирования гемосидерофагов в паренхиме легкого.
В судебно-медицинской практике имеет большое значение выявление гемосидерина в зоне травматических кровоизлияний, что и является микроскопическим диагностическим признаком определения давности кровоизлияний.
В докладе представлен анализ литературных данных, посвященных изучению критериев резорбции кровоизлияний и использование их в определении давности повреждений. Эти данные разнообразны, иногда носят противоречивый характер. Например, сроки появления гемосидерофагов, по данным различных авторов, колеблются от одних до пяти суток, с учетом выявления макрофагов, содержащих коричневый пигмент в цитоплазме при окраске гематоксилин-эозином, расценивая его как гемосидерин. Однако, этот признак является сомнительным, так как коричневое окрашивание может иметь формалиновый пигмент, гематин или гематоидин. При этом, окраска по Перлсу не использовалась.
Однако большинство авторов процесс начала резорбции кровоизлияний связывают с появлением первых ге-мосидерофагов на третий-четвертый день с момента повреждения. Эти сроки также подтверждаются и нашими многолетними практическими наблюдениями.
Дальнейшая динамика трансформации гемосидерина в зоне повреждения оценивается единичными авторами. Этот процесс наиболее подробно представлен в монографии В. Г. Науменко и Н. А. Митяевой (1980 г.). По их данным, зерна внутриклеточного гемосидерина определяются с 3-4 дня и образуются в клетках в течение 9-10 дней. В результате распада макрофагов, нагруженных пигментом, зерна гемосидерина лежат свободно в тканях к 17-18 суткам. Однако согласно нашим практическим наблюдениям, динамика резорбирования кровоизлияния и сроки формирования внутриклеточных и внеклеточных зерен гемосидерина отличались от указанных выше литературных данных.
Для более детального изучения проблемы нами были проанализированы 24 практических случая с известными сроками получения травмы. Это в основном случаи смерти в результате падения с большой высоты и дорожно-транспортных происшествий. Во всех случаях производилась окраска мягких тканей с кровоизлияниями по Перлсу.
В 14 случаях с давностью травмы 9-11 суток в кровоизлияниях при окраске гематоксилин-эозином выявлены единичные макрофаги с однородным золотистым окрашиванием цитоплазмы и наличием единичных макрофагов с зернами золотистого пигмента. При окраске по Перлсу выявлялись гемосидерофаги со светлой и интенсивно окрашенной в синий (или зеленоватый) цвет цитоплазмой. В этот период определялись единичные гемо-сидерофаги с внутриклеточными зернами гемосидерина.
В 10 случаях при давности травмы в 13-16 дней в зоне кровоизлияний при окраске гематоксилин-эозином определяются макрофаги с золотистым окрашиванием мио-плазмы, наличие единичных зерен золистого пигмента внутри клеток и внеклеточно. При окраске по Перлсу множество гемосидерофагов с различной интенсивностью окраски цитоплазмы. Выявляются гемосидерофа-ги с внутриклеточными зернами гемосидерина, а также определяются немногочисленные зерна гемосидерина, лежащие свободно в мягких тканях (внеклеточный гемо-сидерин).
ВЫВОДЫ
Таким образом, согласно нашим практическим наблюдения микроскопическая морфологическая картина процесса резорбции выглядит следующим образом.
На 3-4 день при окраске по Перлсу выявлялись единичные гемосидерофаги с бледно-синим окрашиванием цитоплазмой. В течение последующих дней окрашивание цитоплазмы гемосидерофагов становится более интенсивным, а к 10 дням в кровоизлиянии выявляются единичные гемосидерофаги, в интенсивно окрашенными зернами, расположенными внутриклеточно. А уже к 14 дню в кровоизлиянии определяются единичные зерна внеклеточного гемосидерина. Процесс резорбции продолжается до полного рассасывания кровоизлияния, и может быть различным по давности - от двух недель до одного месяца. Это в основном зависит от распространенности кровоизлияния. Новые макрофаги уже поглощают внеклеточные зерна гемоси-дерина с последующим формированием более крупных структур в виде глыбок гемосидерина, свободно лежащих в тканях. При полном рассасывании кровоизлияния на его месте остаются в течение продолжительного срока (месяцы и годы) глыбки внеклеточного гемоси-дерина, формированием очагов гемосидероза. Выявление внеклеточного гемосидерина в мягких тканях или органах свидетельствует о резорбировавшемся кровоизлиянии.
Проведенные нами исследования уточнили сроки появления внутриклеточных и внеклеточных зерен гемо-сидерина, тем самым позволили получить более достоверные дополнительные критерии определения давности повреждений.
ПОВРЕЖДЕНИЯ ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВ
ПОГИБШИХ С СОЧЕТАННОЙ ТРАВМОЙ
ЖИВОТА В ПЕРИОД 2016-2018 гг._
Е. А. Оленев1, Н. В. Выговский2, А. Н. Порвин3 1ГБУЗ НСО «Бердская центральная городская больница», Бердск, Новосибирская область 2ФГБОУ ВО «Новосибирский государственный медицинский университет» Минздрава России, Новосибирск
3Бердское городское отделение ГБУЗ НСО «Новосибирское областное клиническое Бюро СМЭ», Бердск, Новосибирская область В настоящей работе рассматриваются причины летальных исходов у 32 пострадавших с сочетан-ной травмой живота. Отмечается важность оценки тяжести состояния пациентов. Повреждения внутренних органов всегда носят тяжелый характер, что обуславливается внутрибрюшинным кровотечением и повреждением полых органов. Ключевые слова: сочетанная травма, механические повреждения, тяжесть состояния, тупая травма живота
Сегодня травмы продолжают занимать одно из первых мест среди причин смертности населения. В структуре летальности от травматизма преобладают сочетан-ные и комбинированные повреждения, что обусловлено тяжестью повреждения различных областей организма и характеризуется высокой летальностью. Так, тупая механическая травма является одним из распространенных повреждений в ургентной хирургии и травматологии, так же как и в судебной медицине (Горностаев Д. В. и со-авт., 2003). При этом механические повреждения живота встречаются с частотой от 2 до 5 % и зачастую носят тяжелый характер, а потому имеют высокую летальность
