CC BY
13
и их значению при диагностике соответствующих
интоксикаций.
Ключевые слова: интоксикация, клозапин, норкло-
запин, клозапин-М-сид, печень
Клозапин (лепонекс, азалептин, клозарил) - атипичный нейролептик, применяемый для лечения пациентов с рефрактерной шизофренией и другими психическими заболеваниями. По химической структуре это вещество является трициклическим соединением, молекулы которого имеют элементы сходства с трициклическими антидепрессантами и частично - с производными 1,4-дибен-зодиазепина.
Клозапин метаболизируется в печени. Первый метаболит в цепи его биотрансформации - норклозапин (N-дез-метилклозапин). Другим важным метаболитом клозапина является клозапин-М-оксид.
Для клозапина характерен узкий терапевтический индекс (близость терапевтических и токсических концентраций), а это, в свою очередь, может послужить причиной случайных интоксикаций, в том числе, смертельных при лечении этим препаратом, поэтому особое внимание уделяется исследованию биожидкостей (крови, мочи) и внутренних органов.
В настоящее время достаточно велико число случаев использования клозапина злоумышленниками с целью преднамеренного глубокого угнетения ЦНС для осуществления криминальных действий по отношению к пострадавшим. Отравления клозапином отличаются тяжелым течением и высокой летальностью. Часто при отравлении клозапином определяется второй токсикант -этанол. Эти отравления отличаются особо тяжёлым течением и высокой летальностью.
Клозапин - это функциональный яд. Все случаи, подозреваемые на подобные отравления, подлежат судебно-медицинскому исследованию. В то же время, судебно-медицинская диагностика таких отравлений затруднена. В подобных случаях диагностика проводится комплексно с учётом всех доступных данных: результатов внешнего осмотра трупа и вскрытия, гистологического и судебно-химического исследования. Одним из органом-мишеней при отравлении клозапином (наряду с мозгом и легкими) является печень.
В то же время гистоморфологические изменения в печени при отравлении клозапином и его комбинацией с этанолом изучены недостаточно. В доступной литературе рассматриваются подобные изменения в поздние сроки.
Целью нашего исследования была оценка гистологических изменений в печени через 3 часа после отравления клозапином и его комбинацией с этанолом.
Эксперименты проводились на беспородных крысах-самцах (15) возраста 20 нед. массой 290-350 гр. Животные были разделены на 3 группы (по 5 животных в каждой группе):
1) контроль (интактные животные);
2) клозапин, 3 часа после введения препарата;
3) комбинация клозапина и этанола, 3 часа после введения веществ.
Клозапин вводили перорально (в виде суспензии, через зонд) в дозе 150 миллиграммов на килограмм массы животного под общим наркозом; этанол вводили в сочетании с клозапином перорально в дозе 5 миллилитров на килограмм массы животного.
При проведении гистологического исследования оценивали появление следующих морфологических признаков: расстройства кровообращения (наличие венозного, капиллярного и артериального полнокровия, появление венозных кровоизлияний), отсутствие окрашивание ядер,
глыбчатость цитоплазмы, вакуолизация цитоплазмы, наличие очагов некроза, появление клеточной реакции (большое количество лейкоцитов в поле зрения). При проведении оценки пользовались критерием Фишера. Появление признака считали достоверными при его наличии в 4-5 случаях в одной группе и полном отсутствии в другой.
Через 3 часа после изолированного введения клозапина вены печени (включая центральные) были расширены, в части гепатоцитов ядра гипохромны. Цитоплазма глыб-чатая. Встречались небольшие отдельные очаги некроза. В этих участках контуры гепатоцитов не определялись, а ядра были не крашены. Встречались гепатоциты с крупными ядрами. Портальные тракты (вены и артерии) были умеренно полнокровны. Просветы желчных протоков свободны.
Через 3 часа после введения клозапина как монопрепарата достоверным можно считать появление венозного полнокровия.
Через 3 часа после совместного введения клозапина и этанола вены портального тракта были расширены, полнокровны; а артерии - умерено полнокровны. Просветы желчных протоков были свободны. Большая часть клеток с гипохромными ядрами. В паренхиме печени наблюдали скопление сегментоядерных лейкоцитов. Гепатоциты имели признаки альтерации.
Через 3 часа после совместного введения клозапина и этанола достоверным можно считать появление следующих гистологических изменений: отсутствие окрашивания ядер, венозное полнокровие.
ВЫВОДЫ
Комплекс изменений, выявляемых в печени, в сочетании с изменениями в других органах и результатами су-дебно-химического анализа позволяет установить факт отравления клозапином. Понимание процессов, происходящих в организме при таких интоксикациях, помогает более эффективно оказывать помощь пострадавшим.
ИЗМЕНЕНИЯ ИНТЕНСИВНОСТИ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ КОФЕРМЕНТОВ СКЕЛЕТНОЙ МЫШЦЫ В РАЗЛИЧНЫЕ СРОКИ ПОСМЕРТНОГО ПЕРИОДА (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)_
А. С. Бабкина1,2, Д. В. Сундуков1, А. М. Голубев1,2 ФАОУ ВО «РУДН», Москва 2ФНКЦ РР, Москва В представленном исследовании методом лазер-но-индуцированной флуоресцентной спектроскопии была выявлена закономерность посмертных изменений интенсивности флуоресценции некоторых коферментов в скелетной мышце и объяснены возможные механизмы наблюдаемых явлений. Ключевые слова: давность наступления смерти, флуоресцентная спектроскопия, флуоресценция коферментов, НАДН, ФАД
Диагностика давности наступления смерти - одна из самых актуальных проблем судебно-медицинской танатологии. С учетом правовой значимости и заинтересованности следственных органов в повышении точности экспертных выводов по данному вопросу необходимость расширения исследований в данной области очевидна. Перспективность применения биофизических методов исследования, основанных на выявлении закономерностей посмертных изменений окислительно-восстановительных процессов в тканях с целью наиболее точного определения давности наступления смерти, была показана в работах ряда авторов, но необходимость оборудованной
лаборатории, реактивов, наличия серийных компактных приборов, обладания специальными навыками во многом ограничивает применение большинства биофизических методов в экспертной практике. Метод лазерно-индуци-рованной флуоресцентной спектроскопии достаточно прост в осуществлении, так как позволяет оценивать метаболическую и митохондриальную активность в ткани, in situ, не прибегая к использованию сложных лабораторных методов.
Цель исследования - выявить закономерности изменения интенсивности флуоресценции коферментов НАДН и ФАД в скелетной мышце в различные сроки после наступления смерти.
Эксперимент проведен на крысах мужского и женского пола линии Sprague Dawley, масса животных 250-300 г. Эвтаназию животных осуществляли цервикальной дислокацией под общей анестезией хлоралгидратом. Трупы животных находились при комнатной температуре в течение времени в соответствии с выделенной группой. Для оценки интенсивности флуоресценции коферментов НАДН и ФАД использовали анализатор коферментов «Лазма МЦ-3» (ООО НПП «Лазма МЦ-3, Россия), с зондирующем излучением с длиной волны 365 нм (UV) и 450 нм (B).
Доступ к мышце бедра крысы обеспечивали через разрез кожи длиной 1 см., устанавливали волоконно-оптический зонд анализатора коферментов на участок поверхности скелетной мышцы.
Показатели интенсивности флуоресценции кофермен-тов НАДН и ФАД, редокс-отношения (НАДН/ФАД) регистрировали в различные сроки после смерти животного. Провели 11 серий (I-XI) измерений, по 5 крыс в каждой серии: I - регистрация показателей при жизни; II - через 5 мин. после прекращения жизнедеятельности; III - через 1,5 ч.; IV - через 3 ч.; V - через 4,5 ч.; VI - через 6 ч.; VII -через 7,5 ч.; VIII - через 12 ч.; IX - через 24 ч.; X - через 36 ч.; XI - через 48 ч. Показатели были зафиксированы и сохранены в ПК с программным обеспечением к аппарату «Лазма МЦ-3».
Выявлено постепенное возрастание показателей интенсивности флуоресценции НАДН, с 5-й минуты посмертного периода до 3 ч. Максимальный средний показатель интенсивности флуоресценции НАДН был отмечен через 3 ч. после наступления смерти. Начиная с 4,5 до 48 ч. посмертного периода было установлено постепенное снижение интенсивности флуоресценции НАДН. Возрастание показателей НАДН обусловлено анаэробным гликолизом в условиях посмертной аноксии. Снижение уровня интенсивности флуоресценции после 3-х часов, согласно нашим предположениям, связано с разобщением связи кофермента с белками в результате активизации протеолитических ферментов, так как известно, что флуоресцирует преимущественно связанная с белками форма НАДН.
Значения коэффициентов флуоресценции ФАД в первые 4,5 ч. оставались приблизительно на одном уровне. Через 5 ч. после смерти наблюдалось их снижение у всех крыс. С 12 ч. до 48 ч. было отмечено постепенное возрастание коэффициентов флуоресценции ФАД. Известно, что молекула ФАД, находится внутри белкового комплекса, при разрушении которого, в данном условиях под действием протеолитических ферментов в процессе аутолиза, происходит увеличение интенсивности его флуоресценции.
Было выявлено, что отношение коэффициентов флуоресценции НАДН к ФАД (редокс-отношение, РО) принимает значения больше единицы в первые 12 ч. после смерти, а в интервале 12-48 ч. зарегистрированные показатели редокс-отношения меньше единицы.
ВЫВОДЫ
В результате проведенного исследования была выявлена закономерность интенсивности посмертной флуоресценции коферментов в мышечной ткани, что позволяет рассматривать изменения исследуемых показателей, как потенциальный критерий определения давности наступления смерти.
ЗНАЧЕНИЕ МИКРОСКОПИЧЕСКИХ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ПРИЗНАКОВ РЕЗОРБЦИИ КРОВОИЗЛИЯНИЙ В ДИАГНОСТИКЕ ДАВНОСТИ ПОВРЕЖДЕНИЙ МЯГКИХ
ТКАНЕЙ И ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВ_
Р. Р. Сеитова
ГБУЗ МО «Бюро СМЭ», Москва Доклад посвящен одной из самых сложных задач судебной медицины - определению давности повреждений мягких тканей и внутренних органов. Одним из критериев установления давности повреждений является определение процесса резорбирования кровоизлияний. В докладе даются общие определения процесса резорбции, указаны сроки ее появления и динамика развития.
Ключевые слова: резорбция, макрофаг, гемосиде-рофаг, внутриклеточный гемосидерин, внеклеточный гемосидерин, зерна гемосидерина Одной из важных и сложных задач в судебной медицине является установление давности причинения повреждений. Ведущее место в решении данной проблемы принадлежит судебно-медицинской гистологии. Выводы о давности повреждения строятся на основе изучения микроскопической морфологической картины вазомоторных, воспалительных, пролиферативных изменений, а также резорбирования кровоизлияния. Это реактивные процессы, возникающие в ответ на повреждение. К сожалению, с увеличением сроков переживания травмы критериев определения ее давности становится все меньше. К наиболее отдаленному реактивному процессу относится резорбция кровоизлияния.
В зоне кровоизлияния со временем происходит процесс деструкции эритроцитов. С морфологической точки зрения процесс резорбции кровоизлияния представляет собой эритрофагию распавшихся элементов крови клетками макрофагального типа. Одним из продуктов распада эритроцитов является гемосидерин, образующийся в следствии внутриклеточного ферментативного расщепления гемоглобина. При окраске гематоксилин-эозином гемосидерин окрашивается в коричневый или золотистый цвет. Присутствие в гемосидерине железа позволяет наиболее достоверно выявлять его с помощью специальной окраски по Перлсу. При этой окраске гемосидерин окрашивается в синий или зеленоватый цвет. Клетки ма-крофагального типа, в которых образуется гемосидерин, называются сидерофагами или гемосидерофагами.
Гемосидерин образовывается в норме и патологии. В норме при естественном распаде эритроцитов небольшое количество гемосидерина обнаруживается в моноци-тарных фагоцитах костного мозга, селезенки и печени.
При патологии различают общий и местный гемоси-дероз. Общий гемосидероз возникает при внутрисосуди-стом гемолизе эритроцитов, развивающемся при заболеваниях крови, некоторых острых отравлениях и других острых патологических процессах.
Местный гемосидероз - состояние, развивающееся при внесосудистом разрушении эритроцитов (экстрава-скулярный гемолиз), т.е. в очагах кровоизлияний. Местный гемосидероз легких возникает при митральном
