CC BY
25
РОССИЙСКАЯ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ
Материал и методы. В отличие от общепринятой редукционной парадигмы определения единичных биомаркеров, иммуносигнатура опирается на мультиплексную систему, в которой тестируются антитела, вырабатываемые в ответ на молекулярные изменения, связанные с развитием опухолей. Технология основана на микрочипе, на поверхность которого нанесены пептиды со случайными аминокислотными последовательностями. Для теста требуется менее 1 мкл плазмы крови. Разведенная плазма (1:500) распределяется по всей поверхности пептидного микрочипа, антитела в плазме избирательно связываются с отдельными пептидами, образуя портрет иммунной активности - им-муносигнатуру. Специфические иммуносигнатуры характеризуют развитие определенного типа опухолей. Технически диагностика с помощью имму-носигнатур отличается простотой в выполнении на первом этапе: в день исследования пациенту можно принимать пищу, у него независимо от времени суток берут капельку крови (для исследования достаточно менее 1 мкл плазмы крови), которую наносят на микрочип.
Практически с 24.07.14 по 21.11.14 были собраны углубленные сведения (данные фено- и генотипа - углубленное анкетирование) и забрана кровь на иммуносигнатуру у пациентов, имеющих ранние (I и II) стадии рака легкого - 70 человек; рака молочной железы (РМЖ) - 99 пациенток; у пациентов, свободных от рака (группа доноров, контрольная группа) - 86 пациентов. Протестированы 10 пациенток со злокачественными новообразованиями (ЗНО) молочной железы и 15 женщин, свободных от рака. Средний возраст пациенток с РМЖ составил 58±18 лет; средний возраст пациенток группы контроля - 46±6 лет.
Результаты.
При углубленном анализе иммуносигнатур обнаружен 141 информативный пептид, определяющий достоверную разницу между здоровыми пациентами и больными РМЖ (р<0,001). Индивидуальные иммуносигнатуры были представлены тепловыми цветными картами, где красный цвет показывал повышенную реактивность сывороточных антител с указанными пептидами и был обнаружен у пациенток с РМЖ, а зеленый - сниженную реактивность, соответственно отсутствие ЗНО.
В процессе исследования были выявлены три нехарактерных случая: два - среди больных РМЖ и один - в группе доноров. У больных РМЖ результаты иммуносигнатуры соответствовали иммуносиг-натуре здоровых доноров, и, наоборот, результаты иммуносигнатуры здоровой пациентки были идентичны результатам онкологических больных. При углубленном анализе были выявлены факторы, которые могли бы объяснить данные изменения.
Заключение.
Получены первые положительные клинические результаты использования метода иммуносигнатур для ранней диагностики злокачественных новообразований, достоверность которых позволяет продолжать данное исследование.
Янкович К.И. 1, Дмитриева А.И.1,2, Кузнецова И.А. 1, Ракитин С.С. 1,2, Рачковский К.В. 1,2, Комарова С.В.2
ЯВЛЕНИЕ ПОТЕРИ ГЕТЕРОЗИГОТНОСТИ В ГЕНЕ P21 (A1026G И G369C) У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЛЕГКОГО
ТБОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Минздрава России; 2ОГАУЗ «Томский областной онкологический диспансер», г. Томск, Россия
Актуальность. Продукт гена р21 является су-прессорным белком, который препятствует делению клетки, блокируя продвижение по постсинтетической фазе G2 и вход в митоз. Ген p21 является одной из основных мишеней трансактивационного действия р53, ключевого регулятора, который может координировать процесс репарации либо индуцировать апоптоз. Поэтому любые изменения в функционировании гена p21 могут нарушить неустойчивое равновесие механизмов, регулирующих клеточный цикл, и оказать онкогенное влияние.
Задачи исследования - провести анализ потери гетерозиготности в генеp21 (A1026G и G369C) в ткани опухоли легкого.
Материал и методы. В работе исследовано 93 парных ДНК-образца, полученных из операционного материала (опухолевая ткань легкого и соответствующие им образцы гистологически не измененной легочной паренхимы) больных центральным раком легкого. Выделение геномной ДНК проводили из парафиновых блоков с использованием коммерческого набора FF-PET DNA kit (Qiagen, Германия), следуя инструкции производителя. Парафиновые срезы, полученные методом стереотак-тической диссекции под контролем световой микроскопии, депарафинизировали с использованием ксилола и этанола. Поиск потери гетерозиготности биаллельных локусов гена p21 (A1026G и G369C) проводили путем сравнительного генотипирования опухолевой ткани и ткани, взятой на границе резекции. Типирование образцов по полиморфизмам исследуемого гена проводили путем ПЦР-ПДРФ (по-лимеразная цепная реакция-полиморфизм длины рестрикционных фрагментов)-анализа. Продукты ПДРФ анализировали в 4% агарозном геле с добавлением бромистого этидия и визуализировали в проходящем УФ-свете.
Результаты. Исследование А1026G-полимор-физма гена р21 обнаружило явление потери гетерози-готности в данном локусе при раке легкого. Анализ показал статистически значимое (р=0,005) увеличение частоты встречаемости гомозиготного АА-генотипа (73,12%) и уменьшение частоты гетерозиготного AG-генотипа (13,98%) в опухолевой ткани по сравнению с таковыми показателями в нормальной ткани (55,91 и 34,41% соответственно). Различий в распределении генотипов гена р21 G369C между опухолевой и нормальной тканью легкого выявлено не было.
Заключение. Показано явление потери гетерозиготности для полиморфизма A1026G гена p21 у больных раком легкого. В этом случае снижается транскрипционная активность супрессорного гена за счет утраты протективного G-аллеля.
