CC BY
10
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 3, 2021
ТС. Выявление анти-HLA I и II класса выполнялось методом твердофазного иммунофермент-ного анализа (ИФА) и мультиплексного анализа (Luminex). Определение панель-реактивных антител PRA проводилось расчетным методом и с помощью программного обеспечения MatchIT antibody, Immucor для методики Luminex. Всем пациентам проводилась проба на перекрестную совместимость с потенциальным донором методом лимфоцитотоксического теста (cross-match). Реципиентам с наличием сенсибилизации к HLA высокой степени (PRA более 10% и/или MFA более 5000) и/или при наличии положительной cross-match реакции в анамнезе выполнялся протокол десенсибилизирующей терапии, включающий в себя методы трансфузиологической гемокоррекции на оборудовании CobeSpectra или Plasauto Sigma (плазмообмен или каскадная плазмофильтрация), введение внутривенного иммуноглобулина (IVIg) из расчета 2 г/кг однократно. Все больные после ТС получали тройную иммуносупрессивную терапию ингибиторами кальциневрина, микофеноловой кислотой/эве-ролимусом, глюкокортикостероидами. Индукция была проведена большинству реципиентов (93%, n=150): у 130 - базиликсимабом и у 20 -антитимоцитарным глобулином.
Результаты. Сенсибилизация к HLA до ТС была выявлена у 29 пациентов из 161 (18%), из которых 18 являлись высокосенсибилизирова-ными. Причины сенсибилизации у данных больных были следующие: у 8 больных - беременность в анамнезе, у 4 - наличие вспомогательного устройства кровообращения, у 9 гемотрансфузия
в анамнезе и у 8 - причина не была верифицирована. У 9 реципиентов (5,6%) был проведен протокол десенсибилизирующей терапии в полном объеме, что позволило избежать положительной cross-match реакции, подобрать пару донор-реципиент и успешно выполнить ТС. У 1 пациента протокол десенсибилизирующей терапии выполнен в раннем послеоперационном периоде. У остальных больных десенсибилизация не проводилась либо в связи с низким уровнем предсуществую-щих антител (n=11), либо по причине экстренной трансплантации (n=8). В течение года после ТС у 7 исходно сенсибилизированных реципиентов выявлялись высокие титры антител к HLA I и/ или II класса. Кризы гуморального отторжения (AMR2) в течение первого года после ТС зарегистрированы только у 5 пациентов, из них у 3 проведены повторные сеансы методом трансфузио-логической гемокоррекции в сочетании с IVIg и/ или ритуксимабом. Гемодинамически значимых кризов отторжения трансплантированного органа выявлено не было. Выживаемость в течение года после ТС составила 86,2% (25 человек).
Выводы. Частота встречаемости сенсибилизации к HLA антигенам перед ТС была высокой и составила 18%. Проведение протокола десенсибилизирующей терапии до ТС позволило избежать положительной cross-match реакции при подборе донор-реципиент, снизить риск развития криза гуморального отторжения с дисфункцией сердечного трансплантата в течение первого года после операции и повысить выживаемость высокосенсибилизированных реципиентов.
Свитина С.П., Кострома И.И., Сидорова Ж.Ю., Дрижун Ю.С., Чубукина Ж.В., Грицаев С.В.,
Бессмельцев С.С., Капустин С.И.
ВЗАИМОСВЯЗЬ АЛЛЕЛЬНОГО ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ ЦИТОКИНОВ И ЭФФЕКТИВНОСТИ АУТОЛОГИЧНОЙ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК У БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ
ФГБУ "Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии ФМБА России", Санкт-Петербург, Россия
Введение. Патогенез множественной миеломы (ММ] обусловлен сложной комбинацией численных и структурных изменений хромосом. Помимо изменений в плазматических клетках, в патогенезе ММ важное значение имеют изменения в костномозговом микроокружении, включающие активацию ангиогенеза, нарушение паракринной и аутокрин-ной регуляции, нарушение функции клеточноопос-редованного иммунитета. Преимущественно, это касается избыточной продукции интерлейкина 6 (^-6), интерлейкина 1В (^-1В), сосудистого эндо-телиального ростового фактора (VEGF). Было показано, что некоторые аллельные варианты генов интерлекинов 1 и 6 являются предрасполагающим
иммуногенетическим фактором развития ММ. На сегодняшний день, аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (аутоТГСК) признана одним из стандартных методов лечения молодых (<65 лет] больных ММ. Безусловно, немалый интерес представляют прогностические факторы эффективности аутоТГСК при данном заболевании. В настоящее время появляется все больше исследований, в которых подтверждается связь между генетической изменчивостью иммунорегуляторных генов и результатами лечения ММ, в частности при использовании высокодозной химиотерапии с последующей аутоТГСК.
Цель исследования. Изучить особенности ал-
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ
лельного полиморфизма ряда генов иммунной системы (IL-6, TNF-a, IL-1B, IL-10) у больных ММ при выполнении аутоТГСК.
Материалы и методы. В исследование включены 37 больных ММ (15 мужчин и 22 женщины] в возрасте от 38 до 66 лет. В зависимости от количества CD34+ клеток, заготовленных в день первого сеанса лейкоцитафереза, пациенты были разделены на две группы. В первую группу вошли 23 пациента с количеством клеток выше субоптимального уровня: 2,5х106/кг. Вторая группа включала в себя 14 больных, у которых число заготовленных клеток было ниже 2,5х106/кг. Частичный (ЧО), очень хороший частичный (ОХЧО) и полный (ПО) ответы после проведения первой аутоТГСК были констатированы у 11, 7 и 19 больных соответственно. Контрольную группу (КГ) составили 236 здоровых лиц. Полиморфизм исследуемых генов IL-6 (G-174C), IL-1B (Т-31С), IL-10 (C-592A) и TNF-A (G-308A) определяли методом ПЦР с последующим рестрикционным анализом. Статистическая обработка результатов проведена с использованием программы GraphPad Prism 5.0. Различия в распределении аллелей и генотипов оценивались с помощью точного критерия Фишера.
Результаты. Характер распределения генотипов IL-6, IL-10 и TNF-A в группе больных существенно не отличался от нормы. В то же время доля гомозиготных носителей аллеля IL-1B -31C была более чем в два раза выше среди больных ММ, по сравнению
со здоровой популяцией (24,3% против 10,6%, соответственно; OR=2,7; 95%С1: 1,2-6,4; р=0,029). При разделении больных на подгруппы в зависимости от количества заготовленных в день первого сеанса лейкоцитафереза CD34+ клеток, были выявлены существенные различия в частоте встречаемости генотипов по гену ^-10. В группе больных с количеством заготовленных CD34+ клеток более 2,5x106/ кг, частота встречаемости генотипа ^-10 -592(С/С) оказалась в два раза выше, чем в подгруппе с низким количеством заготовленных CD34+ клеток (60,9% против 28,6%, соответственно OR=3,9; 95%С1: 0,916,3; р=0,091). Кроме того, статистически значимое отличие было обнаружено в подгруппе пациентов с ПО на терапию с использованием аутоТГСК. Доля ге-терозигот по гену ^-6 в этой подгруппе была выше, чем среди больных с ОХЧО или ЧО (68,4% против 14,3% и 36,4, соответственно OR=5,6; 95%С1: 1,423,2; р=0,022).
Выводы. Вариант -31(С/С) гена ^-1В ассоциирован с повышенным риском развития ММ. Ал-лельный полиморфизм генов ^-10 (С-592А] и ^-6 ^-174С] может оказывать влияние на эффективность заготовки CD34+ клеток в результате первого сеанса лейкоцитафереза и глубину ответа после выполнения аутоТГСК, соответственно. Для уточнения значимости вариантов указанных генов в прогнозировании эффекта противомиеломной терапии необходимы дальнейшие исследования с расширением группы больных.
Симакова Т.С.1, Павлова М.А.1, Канаева М.Д.1, Мозгов С.С.1, Афанасьев А.М.1, Слепченков А.В.1, Суворова А.В.1, Кривоносова КА.1, Абрамова А.В.1, Логинова М.А.2, Павлов А.Е.1
ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ПОТОКОВОГО HLA-ТИПИРОВАНИЯ -ТРЕБОВАНИЯ И РЕАЛИЗАЦИЯ
1 ООО«ПАРСЕК ЛАБ»
2 Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства (КНИИГиПК)
Введение. Благодаря своей высокой производительности технология NGS широко применяется для исследования генома, в том числе для ША-типирования. Однако сама по себе возможность получать большее количество данных за меньшее время не позволяет радикально ускорить наполнение регистра доноров. Многостадийная пробо-подготовка множества образцов в ручном режиме занимает много времени, либо требует лабораторной автоматизации. Оценка качества результатов NGS и их интерпретация, с использованием массивов технической информации, представляют собой длительный и трудоемкий процесс, выполняемый высококвалифицированным иммуногенетиком.
Целью данной работы являлось разработка и валидация максимально производительной тест-системы, рассчитанной на потоковые исследования для рутинного ША-типирования потенциальных доноров ГСК.
Материалы и методы. Таргетное обогащение
проводилось методом LR-PCR, с последующей ферментативной фрагментацией и лигированием индексированных адаптеров по протоколу Parseq Lab. Секвенирование проводилось на платформе Illumina MiSeq с набором MiSeq Reagent Kit v2 (300]. Анализ данных проводился с помощью разработанного ПО PARallele™ Software с системой поддержки принятия решений (Parseq Lab]. Валидация проводилась на образцах геномной ДНК выделенных из цельной крови набором QIAamp DNA Blood Mini Kit. Референсные HLA-генотипы образцов были установлены в Научно-исследовательской лаборатории прикладной иммуногенетики (КНИИГиПК] при рутинном типировании добровольцев методом SBT и NGS в высоком разрешении. Корректность геноти-пирования оценивалась путем сравнения с рефе-ренсными генотипами.
Результаты. Разработанная тест-система для HLA-типирования PARallele™ HLA solution позволяет анализировать до 192 образцов в одном запу-
