CC BY
8Мир вирусных гепатитов 3 {2009}
Материалы и методы. Образцы фекалий, полученные or 219 поросят с одной фермы во Владимирской области, в возрасте до 1 года тестировали на РНК ВГЕ методом обратной транскрипции - полимера зной цепной рсакщш (ОТ-ПЦР) с праймерами к открытой рамке считывания 2 (ОРС 2) ВГЕ. Образ4*ы группировали в соответствии с возрастом живогных: 0-10 дней (п - 27); 31-60 дней (п = 11); 61 - 90 дней (п = 23); 91 - 120 дней {п - 20); 121 - 150 дней (п - 38); 151 - 180 дней (п = 32); старше 180 дней (п - 68). Результаты. Общая частота ВГЕ-мнфекции на основании выявления вирусной РНК в сЪекалиях животных составила 15.5% (34/219). Среди 27 поросят в возрасте до 30 цней не был обнаружен mi один случай ВГЕ-инфещии. В следующей зозрастнои группе (31 - 60 цней) 2/11 (18.2%) поросят 5ы,т положительными по ВГЕ. Наиболипую частоту выявления ВГЕ отмечали в зозрасгных группах 61 - 90 дней и 91 - 120 дней [16/23 (69.5%) и 10/20 (50.0%) соответственно]. Среди более старших животных (121 - 150 дней) ВГЬ-инфекцию регистрировали реже - 6/38 (15.8%). у животных старше 150 дней не был отмечен ни один случай ВГЕ-инфекц:ш. Все последовательности ВГЕ, выделенные от инфтщироъанных животных, принадлежали генотипу ВГЕ 3, субтипу Зе>при этом степень гомологии мeждv изолятами ВГЕ достигала 98% -100%.
Заключение. Частота ВГЕ-инЛеклии в обследованном поголовье свиней составила 15.5%, при этом .наиболее часто^мифекдию выявляли у животных в возрасте 60 - днеи. Анализ нуклеотидных последовательностей выявленных изолятов ВГЕ продемонстрировал циркуляцию в обследованном хозяйстзе одного варианта вируса субтипа Зе.
96. Выявление генотипа I вируса гепатита ё на тсрритооии Российской Федерации
С А. Солонин1, Е.В. Цыганова"1, О.В. Исаева1, О.Е. Попова 0.0. Знойко2, К.К. Кюрегян1, М.И.Михайлов1 ГУ Институт полиомиелите и eupvcHbix энцефалитов от М.П. Чумакова РАМН, Московикон обл.1;
Кафедра инфекционных болезней и эпидемиологии МГМСУ, г. Москва
Вирусный гепатит Е (ГЕ) широко распространен в странах тропического и субтропического пояса. В странах умеренного пояса регистрируются преимущественно завозные случаи ГЕ в результате путешествия в эндемичные регионы. Заболевания ГЕ, не связанные с путешес гвиями в эндемичные регионы, чаще всего вызваны генотипом 3 вируса ГЕ (ВГЕ), основным резервуаром которого являются свиньи. В настоящее время на территории Российской Федерации не осуществляется официальная регистрация заболеваемости вирусным ГЕ.
Цель: выявление маркеров ВГЕ в сыворотках больных с гепатитом неустановленной этиологии. Материал и методы, были исследованы S9 архивных образпов сывороток крови, полученных от 52 пациентов с гепатитом неустановленной этиологии. Проведенные в 2006 г. в КИБ №1 (г Москва исследования данных образцов на наличие маркеров гепатита А (анти-ВГА 1^'М), острого гепатита В {HBsAg, анти-core ВГВ IgM), гепатита С (анти-ВГС, ГНК ВГС) были отрицательными. В данных образцах проводили определение антител к вирусу гепатита Е (анти-ВГЕ) класса М и G с помощью коммерческих наборов фирмы Диагностические системы' (а Нижний Новгород). Образны, положительные по анти-ВГ Е, тестировали на РНК ВГЕ в ПЦР с использованием праймеров к открытой рэмке считывания 2 (ORF2) Результаты. Анти-ВГЕ IgM были выявлены в образцах сыворотки у 6 (11,5%) пациентов, анти-ВГЕ IgG - у 12 (22,6%) пациентов, в образцах от 4 (7,7%) больных бьыи выявлены и анти-ВГЕ IgM и анти-ВГЕ IgG. У 2 пациентов, положительных в первичных образцах до анти-ВГЕ IgM и IgG, при динамическом исследовании через 6 мес. регистрировались, только антитела класса G. РНК ВГЕ была выявлена в 1 образце, положительном по анти-ВГЕ IgM и IgG. Для подтверждетгия специфичности детекции РНК ВГЕ и последующего филогенетического анализа выявленного варианта щ-ipvca проводили прямое секвенирование амплифицированного фрагмента генома вируса. Анализ полученной последовательности проводили помошью программы BioEdit, филогенетическое древо было построено алгоритму neighbour-joining (NJ) при помощи программы Clustal X. Филогенетический анализ показал принадлежность выявленного изодяга ВГЕ генотипу 1, циркулирующему в эндемичных по ГЕ регионах. Данный вариант вируса был выделен ог пациентки 3., находившейся на лечении в КИБ N»1 (г. Москва) в 20С6 г. Из истории болезни: пациентка 3., 64 года, научный сотрудник закрытого НИИ, жительница г. Москвы. Заболевание началось остро 10.05.06. с появления слабости, дискомфорта в эпигастрии и правом подреберье, снижения аппетита. С 13.05.06 пациентка отметила потемнение мочи, с 14.05.06. - появление желгушнпсти склер и кожи. На 5 день болезни госпитализирована с диагнозом вирусный гепатит К Й-) дню болезни активность АсАТ - 2776 Ед/л (норма - до 40 Ед/л), АлАТ - 2952 Ед/л (норма - до 40 Ед/л;. Уровень общего билирубина - 150 мкмоль/л (норма - до 20 мкмолъ/л). К 23-у дню болезни все перечисленные биохимические показатели достигли норма;тьных значений (АсАТ - 20 Ед/л, АлАТ-28 38
Мир вирусных гепатитов 3 (2009)
Ед/л, уровень общего билирубина - 9 мкмолъ/л). В анамнезе пациентки не было указаний на работу с токсическими веществами, а также приём лекарственных препаратов и биологически активных добавок. В образце сыворотки криви, полученном спустя 6 месяцев, выявляли только анти-ВГЕ класса В
эпиданамнезе не были отмечены факторы, способствующие инсрицировани.о вирусным ГЕ, включая выезды в эндемичные по ВГЕ регионы и коттгакт с сельскохозяйственными животными. Заключение При исследовании архивных образцов крови пациентов с гепатитом неустановленной этиологии нами были выявлены маркёры инфицирования вирусным ГЕ. Выявление маркера активной репликации ВГЕ (РНК ВГЕ) и изменение динамики серологических маркёров в сыворотке крови пациентки, проживающей в неэндемичном регионе, доказывает случай ГЕ, вызванного 1 генотипом вируса, и указывает на необходимость изучения циркуляции ВГЕ среди населения РФ.
9? Изучение частоты выявления ДНК вируса гепатита В у гематологических больных, позитивных и негативных по HBsAg
A.B. Сомова, Т.А. Туполева, Н.Г.Ярославцева, E.H. Игнатова, Т.Ю. Романова, Т В. Голосова, Ф.П. Филатов
ГУ Гематологический научный центр РАМН, г. Москва
Высокая частота выявления ДНК ВГЗ у HBsAg -позитивных лиц при использовании полимерэзной цепной реакции (ПЦР) отмечается многими авторами (В.К. Рос, М. Вебер с соавт., 2003). Однако ее значении никогда не достигают 100%, что объясняется, в первую очередь, нестрогой взаимозависимостью синтезов вирусспецкфических белков и ДНК и недостаточной чувствительное гью применяемых тест-на боров. В последние 10"'лет внимание тшфекционистов-гепатологов привлечено к ироблеме так называемого «HBsAg-негатииного гепатита», связанного с существованием латентно текущей HB-вирусной инфекции. В этом случае ДНК ВГВ определяется в гепатоцитах печени; в плазме крови она может содержаться в очень низких концентрациях (менее 200 ME/мл) или вообще не обнаруживаться При серопозитичной инфекции в русле крови циркулируют анти-НВс и/или анти-НВь, при негативной - антительчые маркеры отсутствуют (J1.P. Идрисова, 2U05). Имеющиеся данные по-Лабораторной диагностике HBsAg-негативного гепатита среди гематологических больных в методологическом плане малоинформативны и требуют далънейитих исследований (G. Ealazar el ai., 20U7).
Целью настоящей работы было сравнительное изучение частоты индикации ДНК вируса гепатита В у гематологических больных с различным сероло1ическтш профилем НВ-вирусной инфекции. Материалы и методы. На широкий спекгр серологических и молекулярных маркеров НВ-зируса нами исследовано 113 образцов плазмы от гематвлвгических 5о,гьных, серопозитирных (27) и серонегативнчях (86) по HBsAg. Для тестирования исподазовали ИФА-наборы ^Мюрекс» (Англия) и «Биорад» (Фианция). ПЦР выполняли с помощью тест-системы производства ЦНИИЭ «Амплисенс I IBV-170/770-ЗКСЬ. Результаты. При скринтлгге у больных с HBsAg в подавляюшем большинстве случаев (92,6%) обнарухсивалисъ тнти-НВс IgG, серологические маркеры активной рег^тикации вируса гепатита В (HBeAg и/или анти-НВс IgM) иыявлгны v 11 (40,7%) лиц. У 59.3% пациентов тестировались антитела к IIBeAg. Все больные, содержащие в плазме крови HBeAg и/или анти-НВс IgM, были -позитивны но ДИК ВГВ: при отсутствии этих маркеров позишвный сигнач зарегистрирован в 81,2% случаев. Среди HBsAg-негативНЯх яациентов у 72 (83,7%) в сыворотке крови определялись различные сочетания специфических антите" к HB-вирусу; 14 (1Ь,3%) не имели никаких маркеров. При обследовании HBpAg-негатизных больных с антителами к НВ-вирусу установлено, что 33 (45,8%) имели в сыворотке крови только протективные анги-HBs, у 29 (40,3%) тестировались сизолированные» анти-НВс IgG или в сочетании с анти-HBs и/или анти-ПВе, 5 человек (6,9%) были позитивны по иммуноглобулинам анти-HBs и анти-НЗе. ДНК ВГВ обнаружена у 13 (18%) пациентов, имеющих в сери л одическом профите сочетанлое наличие анти-НВс и анти-НВь или твОько анти-ЦВ^. Согласно современньш представлениям (G. Raimondo eL al., 2008), именно, у таких бвльных наблюдается латентная (скрытая) форма вирусного гепатита В. В группе пациентов без серологических маркеров ДНК ВГВ не определялась ни в одном случае.
Выводы. ДНК ВГВ определялась у всех больных с HBs-антигенемией, имеющих в крови серологические маркеры активной репликации вируса. В 18% случаев ПЦР-диагностика обеспечила дополнителоное выявление «скрьггых» Hß-рирусоносителей среди больных, негативных по HBsAg при рутинном скринирующем обследовании. В условиях глубокой иммуносупрессии, характерной для пнкогематологических больных, возможна реактивация латентной ВГВ-инфекции, которая может способствовать прогрессированию хронического гепатита и усугубить исход основного заболевания. Поэтому перед началом химио- и гормоно-терапии гаких больных целесообразно допочнителъно обследовать на наличие анти-НВс, анти-HBs и ДНК ВГВ высокочувствительными тестами с периодическим мояитортлшэм АЛаТ
