Научная статья на тему 'Выявление антигенов системы АВО на хроматографической бумаге после установления на ней наличия крови'

Выявление антигенов системы АВО на хроматографической бумаге после установления на ней наличия крови Текст научной статьи по специальности «Прочие медицинские науки»

CC BY
115
29
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Текст научной работы на тему «Выявление антигенов системы АВО на хроматографической бумаге после установления на ней наличия крови»

- биологов ограничат осмотром и описанием большого количества вещественных доказательств, отдельными исследованиями по обнаружению следов, их выделению и сохранению для последующей передачи генетикам /с наибольшей вероятностью, в лаборатории УВД/.

Мы предлагаем перспективные пути частичного изменения подхода к проведению судебно-биологических экспертиз в отделениях Бюро СМЭ:

1. Внедрять наиболее чувствительные и экономные методики обнаружения объектов биологического происхождения, в частности тесты на кровь и сперму. Усовершенствовать методы обнаружения слюны.

2. Пересмотреть отношение к методам, требующим больших затрат материала и реагентов / количественная абсорбция, кольцепреципитация, экстрагирование в бутанол, реакция покровного стекла и др./.

3. Жестко регламентировать последовательность и объем цитологических исследований в подногтевом содержимом, смывах с половых членов, мазкам с содержимым влагалища, Критически относиться к установлению половой принадлежности в объектах с малым количеством материала и др.

4. Обязать экспертов фотографировать изучаемые предметы с приложением таблиц к заключениям эксперта.

5. В отделениях, где функционируют и биология, и генетика, унифицировать биологические методики и, возможно, изменить подход к тактике проведения экспертиз в соответствии с требованиями молекулярно-генетического исследования.

6. Разработать документы, обязывающие биологов сохранять материал для молекулярно-генетического изучения.

7. Фотографировать волосы /особенно поверхности отделения/; унифицировать терминологию описания морфологических признаков.

8. совершенствовать методики и разрабатывать новые по тем направлениям, где не применимы генетические методы. Потребность в этом становится все более насущной, так как, со слов следователей и судей, в настоящее время часто возникают ситуации, когда подозреваемый, зная о возможностях молекулярной генетики, не отрицает происхождения биологического материала от того или иного лица, но ссылается на иное время его образования или на иной источник происхождения /отсюда - необходимо заниматься вопросами давности образования следов и их региональной принадлежности/.

В качестве примера приводим два случая из нашей практики за последний год - обвиняемые заявляли, что кровь произошла из половых путей женщин, но задолго до их смерти. Также проводилась экспертиза, в которой подозреваемая не отрицала, что изъятые волосы-улики принадлежат потерпевшему, но заявила, что волосы были отделены при стрижке конкретными ножницами в четко указанный день. Данная экспертиза потребовала масштабных исследований морфологических признаков волос.

9. Апробировать и внедрить иммуноферментный анализ /ИФА/, что особенно актуально для регионов, где не используются молекулярно-генетические методы исследования.

10. Нам кажется целесообразным проведение регулярных курсов подготовки специалистов по единой программе; необходима переподготовка среднего медицинского персонала.

© Л.М. Меркушева, Н.В. Прокопчик, Л.В. Галина, 2008 УДК 340.6

Л.М. Меркушева, Н.В. Прокопчик, Л.В. Галина ВЫЯВЛЕНИЕ АНТИГЕНОВ СИСТЕМЫ АВО НА ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЙ БУМАГЕ ПОСЛЕ УСТАНОВЛЕНИЯ НА НЕЙ НАЛИЧИЯ КРОВИ

ГУЗ Красноярское областное бюро судебно-медицинской экспертизы» (начальник - доц. В.И. Чикун)

Наиболее значительную часть работа эксперта-био-лога составляет исследование крови - более 60%.

Известно, что в тех случаях, когда в работу поступают вещи со следами чрезвычайно малой величины, рекомендуется вначале готовить из подобных следов экстракты, наслаивать их на марлю и тем самым искусственно увеличивать объем материала, подлежащего изучению. Однако даже при таком экономичном подходе к исследуемому материалу, его не всегда бывает достаточно для проведения всех необходимых реакций, в частности, для определения группы крови в пятне или повторения исследований иным методом для подтверждения первичных данных. Иногда эксперт вынужден останавливаться, не исполнив всех нужных исследований.

В качестве дополнительного материала при работе с пятнами малой величины нами была использована хроматографическая бумага, вырезанная из мест наслоения вытяжек на линии старта /после определения наличия крови/. В доступной литературе мы не нашли сведений о подобном исследовании.

Согласно методическим рекомендациям по объему и пределам необходимых исследований, нами был определен алгоритм проведения экспертиз.

1 этап - Наличие крови. Используется метод тонкослойной хроматографии на специальной хроматографической бумаге, которую затем принято утилизировать за ненадобностью.

2 этап - Вид крови - исследуют оставшиеся вытяжки, применяя наиболее часто встречный иммуноэлектрофорез.

3 этап - если найденная кровь принадлежит человеку, то определяется группа этой крови.

Известно, что при определении наличия крови на антигены оказывает воздействие растворитель / смесь бутанола, ледяной уксусной кислоты и дистиллированной воды/. Кроме того, в течение нескольких минут на материал предполагается воздействие высокой температуры при прогревании бумаги. В то же время, как указано в монографии П.Н.Косякова, еще в 1931 году В.Н.Шредер установила, что антигены А и В, полученные в спиртовых экстрактах, устойчивы к нагреванию, даже если их прогревать при 100°С в течение 24 часов. Одновременно доказано, что антигены А и В устойчивы и к более высокой температуре /120°С /.

М.Н.Резникова / 1947 / установила, что антигены А и В устойчивы к действию органических кислот. Много исследований проведено японскими учеными /Siracusa, 1922,

Schiff, Adelsberger, 1924/, которые изучали устойчивость факторов А и В к различного рода органическим растворителям. Удалось установить, что выявление антигенов А и В зависит от методов приготовления спиртовых экстрактов, в частности, если спиртовые экстракты получать с добавлением некоторого количества воды, то обнаружение антигенов А и В становится более доступным.

Указанные исследования послужили основанием для проведения предлагаемой работы, связанной с использованием хроматографической бумаги после определения на ней наличия крови. Исследование проведено с пятнами малой величины в 15 экспертизах. Одновременно вытяжки изучали общепринятым методом после наслаивания на нитки марли

Проведение исследования -

1. Экстрагирование. Из следов на вещественных доказательствах, контролей к ним, образцов крови из архива готовили вытяжки с помощью физиологического раствора хлорида натрия. Время экстрагирования 20 часов в холодильнике.

2.Определение наличия крови методом тонкослойной хроматографии. По капле вытяжек из объектов, контро-лей, известных образцов послойно наносили /не менее трех раз/ на хроматографическую бумагу и на 20 минут для разделения помещали в камеру с растворителем. После извлечения бумагу прогревали /100 гр. 10 минут/ и последовательно проявляли спиртовым раствором подкисленного основного бензидина и 3% пееркисью водорода.

3. Определение видовой принадлежности - реакцию ставили с оставшимися вытяжками и применяли встречный иммуноэлектрофорез в агаре.

4. Определение групповой принадлежности - у линии старта на хроматографической бумаге делали вырезки,

делили их на три узкие полоски 0,2х0,5 см /для каждого антигена системы АВО/. Далее использовали реакцию абсорбции-элюции без фиксации/ последняя произошла ранее на этапе определения наличия крови/.

Для абсорбции использовали изосыворотки анти-А, анти-В в титре 1:256 и моноклональная сыворотка анти-Н в титре 1:128. Время 20 часов в условиях бытового холодильника. Отмывание пятикратное. Элюция во взвесь /0,03%/эритроцитов групп А, В и О на плоскости во влажных камерах в течение 30 минут при температуре + 50°С. Учет микроскопический после часовой экспозиции препаратов при комнатной температуре.

РЕЗУЛЬТАТЫ - во всех 15 случаях получены результаты, строго соответствующие исходным и исследованным общепринятым способом.

Следует отметить, что при таком варианте было менее выраженным влияние предметов-носителей.

Было сокращено время исследования, так как отпал вариант наслаивания, высушивания, фиксации.

РЕЗЮМЕ

1. После установления наличия крови на хроматографической бумаге и вида крови в остатках вытяжек непосредственно в вырезках бумаги хорошо выявляются антигены системы АВО.

2. При изучении следов крови малой величины использование хроматографической бумаги позволяет увеличить объем исследуемого материала.

3. Сокращается время исследования.

Таким образом, при недостаточном количестве материала для выявления в нем групповых факторов системы АВО в качестве дополнительного материала считаем целесообразным использование вырезок из хроматографической бумаги из мест наслоения вытяжек после установления наличия крови.

© А.Н. Яворский, 2008 УДК 340.6

А.Н. Яворский

МЕДИЦИНСКИЕ ОШИБКИ, СВЯЗАННЫЕ С ПРИМЕНЕНИЕМ ЛЕКАРСТВ: ЗАРУБЕЖНЫЙ ОПЫТ РЕШЕНИЯ ПРОБЛЕМЫ

ФГУ “Научный центр экспертизы средств медицинского применения Росздравнадзора”

Истинные масштабы и социальные последствия проблемы медицинских ошибок («medical errors») в США была осознана общественностью и руководством страны после публикации в 1999 году отчета «To Err Is Human: Building a Safer Health System», подготовленного экспертами Института медицины Национальной академии наук США, которые установили, что по этой причине ежегодно погибает от 44 до 98 тысяч американских граждан. Среди различных видов медицинских ошибок особое внимание было привлечено к недопустимо высокому количеству так называемых «прогнозируемых» ошибок, риск возникновения которых можно было заранее предусмотреть

и, соответственно, предотвратить до их совершения. Это, прежде всего, относится к случаям, связанным с ошибочным применением лекарств («medication errors»), возникающим вследствие путаницы торговых названий, сходства маркировки, упаковки и неточностей в инструкции по применению, на долю которых в США ежегодно приходится более 7 тысяч смертельных случаев.

Для минимизации риска таких ошибок в Центре экспертизы и изучения лекарств (CDER) Управления по лекарственным средства и пищевым продуктам США

(FDA) были разработаны новые методологические и организационные подходы, направленные на совершенствование предрегистрационной экспертизы лекарств.

В плане совершенствования методологии оценки риска была разработана новая программа под названием «Анализ для предупреждения ошибочного применения лекарств» («Medication errors prevention analysis» - MEPA), основными задачами которой являются:

- Идентификация известных и потенциально возможных ошибок, связанных с применением лекарств;

- Идентификация причин и потенциальных поводов для каждого вида идентифицированных ошибок;

- Определение места каждой идентифицированной ошибки в общей системе всех возможных рисков в соответствии с реальными или потенциально возможными медицинскими последствиями;

- Минимизация возможности наступления ошибок путем проведения целенаправленной предрегис-трационной экспертизы торговых названий, маркировки, упаковки, инструкций по применению лекарств.

Для выполнения этих задач CDER FDA был разработан ряд методических подходов для оценки риска по-

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.