CC BY
39
© М.Л. Морева, А.В. Романов, 2003 УДК 340.624.4
М.Л. Морева, А.В. Романов
ПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ДИФФЕРЕНЦИРОВАНИЯ СЛЕДОВ КРОВИ ПО СИСТЕМЕ ГАПТОГЛОБИНА Бюро судебно-медицинской экспертизы» (нач. — В.И. Жихорев) М3 Удмуртской Республики
Даны рекомендации по тактике эксперта при дифференцировании малых и слабонасыщенных следов крови по системам АВО и гаптоглобин, а также практические советы по повышению эффективности исследования следов крови на вещественных доказательствах по системе гаптоглобин.
Ключевые слова: дифференцирование, гаптоглобин, последовательное экстрагирование.
M.L. Moreva, A.V. Romanov
PRACTICAL ASPECTS OF BLOOD TRACES DIFFERENTIATION AS PER THE HAPTOGLOBIN’S SYSTEM
In the article the following recommendations are given: differentiation of blood traces as per the ABO and haptoglobin’s system, increasing of blood traces researches efficiency.
Key words: differentiation, haptoglobin, sequential extractions.
В ходе исследования вещественных доказательств, в случаях, когда проходящие по делу лица имеют одинаковую групповую принадлежность по системе АВО, возникает необходимость дифференцирования следов крови по другим серологическим системам. До настоящего времени чаще всего в нашем отделении проводилось исследование по системе Gm, однако приостановка выпуска диагностических сывороток анти-Glml, выводит на первое место исследование по системе гаптоглобина (Hp). По данным М.С. Свирского [5] в 35% экспертиз наблюдается расхождение типов гаптоглобина у лиц, одногруппных по системе АВО, и в 30% случаев удается провести дифференцирование следов крови на вещественных доказательствах [1]. В практической работе нашего отделения расхождение типов гаптоглобина у лиц, одногруппных по системе АВО составило в 2002 году 53,6% [2]. В 2003 году дифференцирование по системе гаптоглобина стало про-
водиться чаще. За 9 месяцев тип гаптоглобина устанавливался в 57 экспертизах. Из них в 32 случаях (56,1%) проходящие по делу лица, одногруппные по системе АВО, имели разную групповую принадлежность крови по системе гаптоглобина. В 28 из этих 32 экспертиз удалось провести дифференцирование следов крови на вещественных доказательствах по системе Нр. Статистические данные дифференцирования по системе гаптогло-бин в нашем отделении за два последних года отражены в таблице 1. Как видно из таблицы в среднем за два года в 54,9% случаев лица, одногруппные по системе АВО, имели разную групповую принадлежность по системе Нр, и в 46% экспертиз удалось провести дифференцирование следов крови на вещественных доказательствах по данной системе. Все это подтверждает несомненную эффективность исследований гаптоглобина для групповой идентификации пятен крови.
Таблица 1.
Дифференцирование следов крови по системе гаптоглобина следов крови, одногруппных по системе АВО за 2002-2003 г.г.
Установление типа Нр 2002 год 10 мес. 2003 г. Всего
экспертиз % экспертиз % экспертиз %
Тип Нр в образцах не установлен 0 0 2 3,5 2 1,7
Одногруппные по Нр 26 46,4 23 40,4 49 43,4
С разной группой по Нр: В т.ч.: на вещ. док-вах тип Нр определен на вещ .док-вах Нр не определен 30 53,6 32 56,1 62 54,9
24 42,9 28 49,1 52 46,0
6 10,7 4 7,0 10 8,9
Итого: 56 100 57 100 113 100
Дифференцирование по системе гаптоглобина имеет ряд трудностей, к которым можно отнести то, что для исследования требуется большое количество материала. Однако в большинстве случаев количество материала, необходимого для исследования по нескольким дифференцирующим системам, бывает недостаточно.
Целью настоящей работы явилось изыскание способа определения фракций гаптоглобина и антигенов системы АВО в пятнах крови малой величины и слабой насыщенности.
В работе мы использовали общепринятые методики исследования. Наличие крови определяли методом тонкослойной хроматографии, видовую принадлежность крови методом иммуноэлектрофореза, групповую принадлежность — в реакции абсорбции-элюции (РАЭ). Дифференцирование следов крови по системе гаптоглобина проводили методом электрофореза в вертикальных пластинках ПААГ — полиакриламидного геля [3,4].
Для определения типа гаптоглобина брали навеску пятна крови в 25 мг. Материал помещали в пробирки и заливали
0,15 мл (пять капель) раствора для экстрагирования. Экстрагирование при комнатной температуре в течение 20 часов. Затем материал переносили в наконечники для микропипе-ток(рис. 1,№1), последние помещали в пробирки (рис. 1,№2) и центрифугировали при 1500 оборотов в течение 10 минут. Полученные вытяжки переносили в пластиковые микропробирки с крышками — Эппендорф (рис. 1, №3) добавляли к вытяжкам по 0,5 мл хлороформа, перемешивали встряхиванием. Микропробирки помещали в центрифужные пробирки (рис. 1, №4) и центрифугировали при 1500 оборотов 10 минут. Затем прозрачные вытяжки, расположенные над детритом, переносили в чистые пробирки.
Оставшийся после экстрагирования материал повторно заливали раствором для экстрагирования и вновь подвергали центрифугированию. Полученные вытяжки очищали хлороформом. Всего было проведено 4 последова-
12 3 4
Рис. 1. Используемые для приготовления вытяжек пробирки и наконечники длямикропипеток: 1 — наконечник для микропипеток; 2 — извлечение вытяжки из пятна крови; 3 — микропробирки Эп-пендорф; 4 — очищение вытяжек хлороформом.
тельных экстрагирования из одной навески. Третью и четвертую порции вытяжки вводили в опыт без очистки хлороформом.
Все четыре вытяжки вносили в карманы ПААГ. Параметры опыта стандартные [3]. Полученный результат разгонки показан на рис. 2. Как видно на фореграмме получено четкое разделение фракций гаптоглобина в первой и второй вытяжках из исследуемого пятна крови.
12 3 4
Рис. 2. Фореграмма: 1 — Нр 2 - 1; 2 — Нр 2 - 1; 3 — Нр не установлен; 4 — Нр не установлен.
Четвертую порцию вытяжки из пятна крови подвергали исследованию на наличие и видовую принадлежность крови. Получен положительный результат на наличие крови, а в реакции электропреципитации получены полосы преципитации между исследуемой вытяжкой и сывороткой, преципитирующей белок человека, то есть была установлена видовая принадлежность крови.
Материал, оставшийся после экстрагирования высушивали и исследовали в РАЭ. В реакции была установлена групповая принадлежность крови по системе АВО после первого и второго экстрагирования, а также в большинстве опытов после третьего и четвертого экстрагирования.
Обобщив результаты многочисленных опытов по определению типа гаптоглобина в следах разной насыщенности на разных предметах-носителях, мы можем дать ряд практических рекомендаций для повышения эффективности данного исследования.
При исследовании пятен крови малого размера или слабой насыщенности для получения вытяжки рекомендуем первоначально экстрагировать материал тремя каплями раствора для экстрагирования, а затем повторно двумя. Полученные вытяжки соединять, очищать хлороформом и вводить в опыт. При таком способе экстрагирования нам удалось получить фракции гаптоглобина в тех следах, где при однократном экстрагировании были получены нечеткие результаты либо фракций гаптоглобина не было получено.
При очистке хлороформом некоторых вытяжек из пятен крови получается большое количество детрита, а количество очищенной вытяжки оказывается недостаточным для опыта. В этом случае можно увеличить количество материала повторным экстрагированием пятна крови 1-2 каплями раствора для экстрагирования.
При исследовании образцов крови (особенно гнилостно-измененных) в ряде случаев не удается очистить вытяжку хлороформом, и шлейф гемоглобина затрудняет учет результатов. В этом случае можно ввести в опыт вторую пор цию вытяжки из пятна крови, в которой, как правило, количество гемоглобина гораздо ниже и, следовательно, на форег-рамме удается получить читаемый результат. На рис. 3 показана фореграмма пяти образцов крови. Как видно, во вторых порциях вытяжек из пятен крови шлейф гемоглобина выражен меньше и фракции гаптоглобина видны лучше.
Рис. 3. Фореграмма пяти образцов крови: 1, 3, 5,7, 9 — первые порции вытяжек; 2, 4, 6, 8,10 — вторые порции вытяжек; 1-6, 9, 10 — Нр 2-1; 7,8 —Нр 2-2.
При исследовании обширных слабо насыщенных пятен можно попытаться увеличить концентрацию гаптогло-бина в вытяжке, экстрагируя одной и той же порцией раствора для экстрагирования последовательно несколько навесок пятна крови.
Таким образом, проведенным исследованием установлено, что дифференцирование по системе гаптоглобина следов крови, одногруппных по системе АВО, является высокоинформативным и позволяет конкретизировать выводы примерно в 46% случаев. Материал, использованный для определения типа гаптоглобина можно использовать дополнительно для определения наличия, видовой и групповой принадлежности по системе АВО, что позволяет провести дифференцирование следов крови малой площади или слабой насыщенности по двум системам. Следовательно, когда по делу проходят лица, одногруппные по системе АВО, а следы крови на вещественных доказательствах не велики по размеру, может быть целесообразно первоначально провести экстрагирование пятен для исследования типа гаптоглобина, а затем использовать материал в реакции на наличие, вид, групповую принадлежность крови по системе АВО.
После однократного экстрагирования часть белка Нр вторного экстрагирования позволяет увеличить концен-
остается в материале, и при повторном экстрагировании трацию гаптоглобина в вытяжке, и получить результат
в вытяжке удается установить тип гаптоглобина. Таким там, где однократное экстрагирование не позволяет ус-
образом, при слабой насыщенности следов крови на ве- тановить фенотип крови по данной дифференцирующей
щественных доказательствах, использование метода по- системе.
Литература:
1. Свирский М.С. Определение фракций гемоглобина и гаптоглобина при исследовании пятен крови методом электрофореза в вертикальных пластинах полиакриламидного геля // Судебно-медицинская экспертиза. — 1981. — № 2. — С. 41-44.
2. Романов А.В., Чирков В.Е., Широбоков А.В. Анализ эффективности применения дифференцирующих систем крови в судебно-биологической экспертизе //Проблемы экспертизы в медицине. — 2003. — №2. — С. 37.
3. Бураго Ю.И. Информационное письмо о способах дифференциации антигенов системы АВО, G1m, Hp в смешанных следах крови человека и ряда животных. — Москва, 1998.
4. Кишиневская Л.С. Информационное письмо об определении фенотипов Нр в пятнах крови методом вертикального электрофореза в полиакриламидном геле. — Москва, 2000.
5. Свирский М.С. Использование фибринолизина при исследовании гаптоглобина в пятнах крови // Судебно-медицинская экспертиза. — 1984. — № 1. — С. 33-36.
© Д.В. Сёмочкин, 2003 УДК 61:340.6: 616.12.013
Д.В. Сёмочкин
О ВАЖНОСТИ И НЕОБХОДИМОСТИ МЕТОДИЧЕСКОГО ПОДХОДА ПРИ ИССЛЕДОВАНИИ ТРУПОВ ЛИЦ С КОМПОНЕНТАМИ ТРАНСВЕНОЗНОЙ ЭНДОКАРДИАЛЬНОЙ ЭЛЕКТРОСТИМУЛЯЦИИ Кафедра судебной медицины и основ правоведения (зав. — проф. В.И. Акопов)
Ростовского государственного медицинского университета
Проведённый анализ протоколов патологоанатомических вскрытий трупов лиц с кардиостимулятором и трансвенозным электродом указал на отсутствие определённого методического подхода и позволил выделить типичные недостатки при исследовании трупа. Делается вывод о необходимости разработки данного метода, что позволит решить вопрос о возможной роли кардиостимулятора в наступлении смерти.
Ключевые слова: трансвенозная эндокардиальная электростимуляция, осложнения, методика исследования.
D.V. Semochkin
ABOUT IMPORTANCE AND NECESSITY OF THE METHODICAL APPROACH AT RESEARCH OF CORPSES OF THE PERSONS WITH COMPONENTS THE ARTIFICIAL DRIVER OF A RHYTHM OF HEART
The carried out(spent) analysis of the protocols of openings of corpses of the persons with the artificial driver of a rhythm of heart and through a vessel by an electrode has specified absence of the certain methodical approach and has allowed to allocate typical lacks at research of a corpse. Is judged necessity of development of the given method, that will allow to solve the problem on a possible (probable) role the artificial driver of a rhythm of heart in approach of death.
Key words: the artificial driver of a rhythm of heart,complications,technique of research.
Применение трансвенозной внутрисердечной электростимуляции стало ведущим методом лечения сердечных аритмий; её эффективность и востребованность в кардиологической практике не вызывают сомнений. Между тем, несмотря на видимые и неоспоримые преимущества, существует достаточно большое количество осложнений этого метода, такие как прободение правого желудочка сердца, неисправность, смещение генератора импульсов и электрода, желудочковая тахикардия, мерцание желудочков и внезапная смерть, электромагнитная интерференция, тромбоэмболии, сепсис и др. [4,5].
Основными причинами возникновения указанных осложнений являются нарушения в электронной схеме и истощение источника питания. Имплантируемые устройства нередко не вырабатывают гарантийного срока эксплуатации из-за клинических нарушений и технических неисправностей [3]. Это необходимо учитывать при проведении судебно-медицинских исследований. В свою очередь, согласно литературным источникам, методика исследования таких трупов в судебно-медицинской практике отсутствует [1]. Между тем, её существование может иметь особое значение при производстве экспертиз по поводу ненадлежащего врачевания.
Выраженная эпизодичность подобного рода исследований в танатологической практике потребовала обратиться за патологоанатомическими протоколами соответствующего отделения Ростовской областной клинической больницы. Целью работы являлось установление возможного наличия определённой тактики при проведении вскрытий трупов лиц, которым до момента наступления смерти на различных этапах проводимого лечения была выполнена ТВЭКЭС.
Интерес представили 39 протоколов за период 19962000 г.г. В 23-х случаях имело место применение временной ТВЭКЭС, в 16-ти — постоянной. Интервал от момента проведения одного из видов кардиостимуляции до момента наступления смерти составил: при временной ТВЭКЭС — от 20 мин. до 17-ти суток, при постоянной — от 3-х часов до 18-ти суток. В двух случаях пациенты поступали в отделения с уже имплантированным кардиостимулятором, который функционировал на протяжении 5-ти и 9-ти лет.
Исследование компонентов ТВЭКЭС было отражено во всехпротоколахповерхностно, очень кратко и ограничивалось констатацией наличия батареи генератора импульсов под фасцией грудной мышцы и концевой части электрода в правом желудочке сердца. Примером тому могут служить следующие отрывки из протоколов патологоанатомических вскрытий:
