О возможности определения фенотипов гаптоглобина в пятнах крови на наиболее часто встречающихся видах предметов-носителей, подвергшихся воздействию неблагоприятных факторов внешней среды. Текст научной статьи по специальности «Прочие медицинские науки»

УДК 340.624.4

Е.Г. Фаворская, В.П. Новоселов

E-mail: [email protected]

О ВОЗМОЖНОСТИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕНОТИПОВ ГАПТОГЛОБИНА В ПЯТНАХ КРОВИ НА НАИБОЛЕЕ ЧАСТО ВСТРЕЧАЮЩИХСЯ ВИДАХ ПРЕДМЕТОВ-НОСИТЕЛЕЙ, ПОДВЕРГШИХСЯ ВОЗДЕЙСТВИЮ НЕБЛАГОПРИЯТНЫХ ФАКТОРОВ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ

ОГУЗ «Новосибирское областное бюро судебномедицинской экспертизы»

Судебно-медицинское исследование крови человека и ее следов на вещественных доказательствах имеет большое значение при расследовании преступлений, в том числе таких тяжких, как убийство [1]. При производстве судебно-медицинской экспертизы вещественных доказательств наиболее частым объектом исследования (по данным судебно-биологического отделения ОГУЗ НОБСМЭ) являются пятна крови (около 70% экспертиз), которые являются объективными следами совершенного преступления и несут информацию о групповой характеристике крови преступника и жертвы.

Основной системой, применяемой для определения групповой принадлежности крови, была и остается система АВ0, однако в ряде случаев только одной этой системы бывает недостаточно, или по каким-либо причинам судебно-медицинскому эксперту биологического отделения в силу некоторых объективных причин бывает весьма затруднительно или невозможно высказаться о групповой принадлежности крови по этой системе. В этих случаях эксперт прибегает к исследованию иных систем, среди которых важное место занимает система гаптоглобина (Нр) [1, 2].

Исследование системы гаптоглобина при производстве судебно-биологических экспертиз существенно повышает информационную значимость экспертных выводов. Определение фенотипа гаптоглобина в пятнах крови широко применяется при производстве экспертиз спорного отцовства, материнства, замены детей, при одногруппности проходящих по делу лиц по системе АВ0, сомнительных (нечетких) результатах при определении групповой принадлежности крови по системе АВ0, для борьбы с влиянием предмета-носителя, при отсутствии предмета-носителя, при работе со смешанными пятнами человека и животных, со смешанными пятнами крови человека и каких-либо выделений, для дифференцирования крови человека и новорожденного и в некоторых других случаях [3].

Также данный метод может применяться как самостоятельный при производстве судебно-биологических экспертиз, для определения групповой принадлежности крови в образцах крови проходящих по делу лиц и в пятнах крови на вещественных доказательствах.

При производстве судебно-биологических экспертиз в ряде случаев (например, при одногруппности проходящих по делу лиц по системе АВ0) возникает необходимость исследования фенотипа гаптоглобина в образцах крови проходящих по уголовным делам лиц. Иногда выявление фенотипов гаптоглобина не представляет никаких затруднений, в других же случаях в практической деятельности мы сталкиваемся с определенными трудностями, когда не получаем разгонки фракций гаптоглобина на фореграмме, не только в хорошо насыщенных пятнах крови на вещественных доказательствах, но и в образцах крови проходящих по делу лиц, что, на наш взгляд, может быть связано с условиями забора и хранения образцов крови и вещественных доказательствах, с различными сроками поступления вещественных доказательств в судебно-биологическое отделение.

В ходе практической деятельности, особенно при малом количестве материала для исследования, решается вопрос о предпочтительном выборе системы для дифференцирования, который зависит от различных условий (размеры, насыщенность пятна, примерная

Е.Г. Фаворская, В.П. Новоселов

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЕНОТИПОВ ГАПТОГЛОБИНА

давность из образования). Также в практической деятельности мы обратили внимание, что выявление фенотипов гаптоглобина зависит и от вида предмета-носителя, на котором находится пятно. Важным является вопрос, подвергались ли пятна каким-либо физическим или химическим воздействиям.

Исследование следов крови по системе гаптоглоби-на в судебно-медицинских целях достаточно широко применяется в нашей стране с начала 80-х годов прошлого века, этой проблеме были посвящены работы

О.В. Николенко, М.С. Свирского [2, 4]. По данным Baxter и Rees [5], электрофорез с применением градиентного полиакриламидного геля (ПААГ) позволяет устанавливать фенотип гаптоглобина в пятнах крови давностью до 18 мес.

Однако до настоящего времени в доступной нам литературе не встречено информации о том, на каких предметах-носителях пятна крови следует исследовать в первую очередь, целесообразно ли брать для исследования вещественные доказательства, на которых имеются гнилостные изменения, или после криминальных захоронений.

В связи с этим нам представилось целесообразным провести исследование возможности определения фенотипов гаптоглобина в следах крови, различных по давности образования, находящихся на различных предметах-носителях и подвергшихся воздействию некоторых факторов внешней среды, которым, на наш взгляд, наиболее часто подвергаются вещественные доказательства до изъятия их следственными органами и поступления в судебно-биологическое отделение.

Целью нашего исследования являлось проведение экспертной оценки фенотипов гаптоглобина в следах крови на предметах-носителях, подвергшихся воздействию некоторых факторов внешней среды, оценка возможности определения давности образования пятен крови на вещественных доказательствах с использованием системы гаптоглобина.

Определение фенотипа Нр проводилось методом вертикального электрофореза в вертикальных пластинах полиакриламидного геля (ПААГ) с использованием трис-глициновой буферной системы. В судебно-биологическом отделении Государственного Учреждения Здравоохранения Новосибирское Областное Бюро Судебно-медицинской Экспертизы для исследования применяется камера для вертикального гель-электрофореза Е-90690, с применением источника питания Е-835, стабилизирующего постоянный ток по напряжению, производства фирмы «Consort». Основные положения реакции по определению фракций гаптоглобина при исследовании пятен крови методом электрофореза в вертикальных пластинах полиакриламидного геля были изложены в одноименной статье М.С. Свирского в журнале «Судебно-медицинская экспертиза» за 1981 год [2].

Исследованию подвергали образцы крови от 10 живых лиц, относительно здоровых соматически, в возрасте от 18 до 43 лет, с заведомо известными

фенотипами Нр (по четыре образца с фенотипами 2-1 и 2-2 и два образца фенотипа 1-1). Кровь изымали из локтевой вены и наносили на фрагменты ткани -хлопчатобумажную, джинсовую, шерстяную и искусственный шелк, так как именно с такими предметами-носителями мы чаще всего сталкиваемся при работе. Кровь на фрагменты ткани наносили в количестве около 0,3-0,5 мл так, чтобы получилось округлое пятно диаметром около 2,5-3 см, и высушивали на плоской горизонтальной поверхности при комнатной температуре.

После забора и высушивания пятна крови сначала подвергали исследованию по установлению фенотипа Нр в неизмененном виде.

С целью определения, как влияет хранение вещественных доказательств во влажном состоянии на возможность определения фенотипа гаптоглобина в пятнах крови, кровь наносилась на предметы-носители в количестве около 0,5 мл, затем фрагменты ткани и бумага слегка смачивались проточной водой, после чего полученные таким образом образцы помещали во влажные камеры - чашки Петри. Чашки помещали для хранения в темное прохладное помещение, откуда с некоторой периодичностью образцы изымались, из них вырезали кусочки ткани размером 1х1,5 см, и исследовали с целью определить фенотип Нр. Исследование проводилось в летний период.

В течение первых двух недель результат исследования был положительным практически со всеми исследуемыми образцами, лишь несколько снизилась интенсивность фракций Нр на фореграмме, особенно в следах, расположенных на искусственном шелке, не было получено разгонки фракций Нр лишь в одном образце с фенотипом 1-1 в следах, расположенных на искусственном шелке и шерсти. В середине третьей недели исследования нам не удалось получить разгонки фракций Нр в части пятен, расположенных на таких предметах-носителях, как искусственный шелк и натуральная шерсть. Однако в следах на бумаге и хлопчатобумажной ткани был получен положительный результат - интенсивность фракций Нр на фореграмме была заметно снижена, но результат был вполне читаемым. Наиболее «благодарным» предметом-носителем оказалась бумага - в пятнах крови на бумаге определять фенотип гаптоглобина удавалось после трех недель пребывания следов крови во влажном состоянии.

С целью определения, как влияет хранение вещественных доказательств в земле на возможность определения фенотипа гаптоглобина в пятнах крови, кровь наносилась на предметы-носители в количестве около 0,5 мл, затем фрагменты ткани и бумаги помещали в землю на глубину около 20 см в закрытом темном прохладном помещении. С некоторой периодичностью образцы извлекались, из них вырезали кусочки ткани размером 1х1,5 см и исследовали с целью определить фенотип Нр. Исследование проводили в осеннезимний период.

В течение первых полутора месяцев результат исследования был положительным со всеми исследуемыми образцами, к концу второго месяца лишь снизилась интенсивность фракций Нр на фореграмме в части исследуемых образцов. В начале третьего месяца исследования значительно снизилась интенсивность фракций Нр в двух образцах с фенотипом 2-1 и в одном образце с фенотипом 2-2. Мы не смогли выявить фракции Нр в одном образце с фенотипом 2-1 на искусственном шелке и в одном образце с фенотипом 2-2 на хлопчатобумажной ткани и искусственном шелке.

В конце четвертого месяца исследования не было получено разгонки фракций Нр в четырех из исследуемых образцов (два - с фенотипом 2-1 и два - 2-2) на всех видах предметов-носителей, в остальных образцах интенсивность фракций значительно снизилась, причем в пятнах, расположенных на искусственном шелке, фракции были едва заметны. К концу пятого месяца исследования ни в одном из исследуемых образцов разгонки фракций гаптоглобина на фореграмме получено не было.

Для определения воздействия, которое оказывают прямые солнечные лучи на возможность определения фенотипа Нр в пятнах крови, исследование проводилось в жаркий летний период, на открытой площадке, то есть, пятна крови подвергались воздействию прямых солнечных лучей в течение всего дня. Ежедневно из пятен крови вырезались фрагменты, которые в дальнейшем исследовали с целью определения фенотипа Нр и характера расположения фракций.

Исследование проводили в течение 4 дней, при этом наблюдали следующее: после первого дня на фореграмме фенотип Нр был определен во всех исследуемых образцах крови, но интенсивность фракций незначительно снизилась.

После второго дня не наблюдали разгонки фракций гаптоглобина на фореграмме в одном образце крови фенотипа 2-2 в пятнах на хлопчатобумажной ткани и в трех образцах фенотипа 2-2 на искусственном шелке, в остальных образцах фенотип определялся, несмотря на то, что в образцах фенотипа 2-1 фракции гапто-глобина на искусственном шелке и шерстяной ткани очень слабые, но в проходящем свете все-таки видны.

После третьего дня нам удалось определить фенотип Нр лишь в трех образцах фенотипа 2-1 в пятнах на бумаге, также наблюдали едва заметные фракции в одном образце 1-1 на хлопчатобумажной ткани.

После четырех дней пребывания на солнце ни в одном из исследуемых образцов разгонки фракций гаптоглобина на фореграмме получено не было.

При визуальной оценке фореграмм какого-либо смещения фракций Нр мы не наблюдали, но день ото дня прослеживалось четкое снижение интенсивности фракций. Также заметно изменился и цвет пятен крови - с яркого буровато-красного до сероватокоричневого.

Для того чтобы определить, как влияет кратковременное воздействие высокой температуры (про-

глаживание электрическим утюгом) на возможность определения гаптоглобина, исследовали приготовленные аналогичным образом образцы, с той разницей, что вместо такого предмета-носителя, как бумага, пятна крови исследовались на джинсовой ткани.

Пятна крови делили на сегменты, и на каждое исследование вырезали по два сегмента, размером около 0,7х1,5 см и в течение 5-7 секунд проглаживали электрическим утюгом, нагретым до +110, +150 и +200 градусов, с двух сторон, после чего в обработанных подобным образом фрагментах марли определяли фенотип Нр.

При этом во всех следах, обработанных при температуре +110 градусов, на фореграмме практически не наблюдали отличий от необработанных пятен крови; в следах, подвергшихся воздействию температуры + 150 градусов, наблюдали некоторое снижение интенсивности фракций Нр на фореграмме без какого-либо смещения фракций, но фенотип Нр был определен практически во всех исследуемых образцах. Однако интенсивность фракций, расположенных на искусственном шелке, значительно снизилась во всех образцах с фенотипом 2-1 и 2-2, но все же в проходящем свете и в эти пятнах фенотип Нр был диагностирован. При определении фенотипа Нр в следах крови, проглаженных электрическим утюгом, нагретым до 200 градусов, в двух образцах крови с фенотипом 2-1 и трех образцах с фенотипом 2-2, расположенных на искусственном шелке, разгонки фракций Нр получено не было. Также очень низкая интенсивность фракций наблюдалась в одном образце с фенотипом 2-2, расположенном на хлопчатобумажной ткани. Во всех пятнах крови с фенотипом 1-1 фракции Нр выявлялись беспрепятственно.

Таким образом, как следует из представленных данных, условия хранения вещественных доказательств и вид предмета-носителя, на котором расположены следы крови, существенно влияют на возможность определения фенотипов гаптоглобина в пятнах крови.

При хранении вещественных доказательств во влажной среде удалось проводить диагностику фенотипов гаптоглобина в пятнах крови давностью до одного месяца, причем самое длительное время фракции выявлялись на таком предмете-носителе, как бумага. В пятнах крови, расположенных на искусственном шелке, фракции гаптоглобина выявлялись в срок до двух с половиной недель.

При хранении вещественных доказательств в земле в осенне-зимний период разгонку фракций гаптоглобина на фореграмме мы получали в срок до четырех месяцев, причем четкой зависимости между сроком выявления фракций и видом предмета-носителя, на котором расположено пятно крови, установлено не было.

Воздействие прямых солнечных лучей оказало наиболее неблагоприятное (из четырех изученных факторов) влияние на возможность определения фенотипа Нр в пятнах крови, и после четырех дней пре-

СИБИРСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ № 1 2008 (выпуск 1)

бывания на открытом солнце определение фенотипа гаптоглобина в них нецелесообразно.

Воздействие высокой температуры (до 150 градусов) оказывает лишь незначительное влияние на возможность определения фенотипа Нр на таких предметах-носителях, как хлопчатобумажная, джинсовая и шерстяная ткань. Исключение составляет искусственный шелк - проглаживание электрическим утюгом пятен крови на искусственном шелке, нагретым до 150 градусов, заметно снижало интенсивность фракций гаптоглобина на фореграмме, а при максимальном нагреве утюга в большинстве случаев разгонки фракций гаптоглобина не наблюдали.

ЛИТЕРАТУРА

1. Томилин В.В., Барсегянц Л.О., Гладких А.С. - «Судебномедицинское исследование вещественных доказательств», М., Мед., 1983.

2. Свирский М.С. - Суд.-мед. эксперт., 1981, № 2. С. 24.

3. Информационное письмо «об определении фенотипов гаптоглобина в пятнах крови человека методом вертикального электрофореза в полиакриламидном геле» рецензенты Барсегянц Л.О., Гуртовая С.В. М., 2000.

4. Николенко О.В. - Суд.-мед. эксперт., 1972, № 2. С. 24. Б. Baxter S., Rees B., - Med. Sci. Law, 1974, V. 14. P 231.

ON THE POSSIBILITY OF DETERMINATION OF HAPTOGLOBIN PHENOTYPES IN BLOOD SPOTS ON THE MOST OFTEN MET TYPES OF OBJECTS-CARRIERS WHICH WERE EXPOSED TO ENVIRONMENTAL UNFAVORABLE FACTORS

Ye.G. Favorskaya, V.P. Novoselov

SUMMARY

The study was performed which was directed to the determination of revealing terms of haptoglobin phenotypes in blood spots on some types of the objects-carriers which were exposed to environmental unfavorable factors.

Key words: gaptoglobin phenotype, subject-carrier, unfavourable factors of the environment.