CC BY
69
УДК: 615.322
О. Б. Николаева (н.с.)1, К. А. Пупыкина (д.фарм.н., проф.)2, Т. Д. Даргаева (д.фарм.н., проф., зав. лаб.)3, Т. А. Сокольская (д.фарм.н., проф.)3,
Т. Б. Шемерянкина (к.фарм.н., проф.)3
Высшие жирные кислоты, выделенные из плодов амми большой
1 Институт экспертизы качества лекарственных растений г. Москва, ул. Щукинская, д. 7, тел. (499) 2646104, доб. 30-92 2Башкирский государственный медицинский университет, кафедра фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3, тел. (347)2724173, e-mail: [email protected] 3Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений, лаборатория стандартизации лекарственных растительных средств 117216, г. Москва, ул. Грина, 7, тел. (495)3827377
O. B. Nikolaeva, K. A. Pupykina, T. D. Dargaeva, T. A. Sokolskaya, T. B. Shemeryankina
The high-molecular fat acids allocated from fructi Ammi majus
Institute of Examination Medicinal Plant Quality 7, Schyukinskaya Str, Moscow, Russia; ph. (499) 2646104, 3092 Bashkir State Medical University 3, Lenin Str., 450000, Ufa, Russia; ph.(347)2724173, e-mail: [email protected] Russian Institute of Medicinal and Aromatic Plants 7, Green Str., 117216, Moscow, Russia; ph. (495) 3827377
Приведены результаты исследования компонентного состава высших жирных кислот плодов амми большой. Установлено присутствие насыщенных (миристиновая, пальмитиновая, стеариновая) и ненасыщенных (олеиновая, линоле-вая) жирных кислот.
Ключевые слова: амми большая; высшиее жирные кислоты; плоды.
Расширение исследований по изысканию источников для получения новых эффективных и безопасных лекарственных растительных средств является актуальной задачей медицины. В настоящее время ассортимент лекарственных средств растительного происхождения, применяемых в практическом здравоохранении, составляет более 40%. Одним из путей увеличения количества препаратов растительного происхождения является широкое изучение химического состава и действия уже известных, разрешенных для применения в медицине лекарственных растений, часто используемых по ограниченному числу показаний. Учитывая это, представляет интерес изучение плодов амми большой, которые рекомендуются в основном как фотосенсибилизирую-Дата поступления 15.02.10
The study results on the development of componental structure of high-molecular fatty acids of fructi Ammi maji L. The presence of saturated (myristic, palmitic, stearic) and unsaturated (oleic, linoleic) fatty acids is established.
Key words: Ammi maji L.; fructi; high-molecular fatty acids.
щие средства при лечении лейкодермии. Однако, как показали предварительные исследования, плоды амми большой имеют более сложный состав и в этом отношении интересно изучение липофильного комплекса, выделенного из сырья амми, так как известно, что существует биохимическая связь ненасыщенных жирных кислот с уровнем липопротеидов и холестерина в крови.
Цель исследования — изучение компонентного состава высших жирных кислот, выделенных из амми большой.
Экспериментальная часть
Объектом исследования служили плоды культивируемого растения амми большой — Ammi majus L., семейства Apiaceae, из кото-
рых получали жирорастворимый комплекс по методике проводили качественный и количественный анализ высших жирных кислот.
Идентификацию соединений осуществляли методом хромато-масс-спектрометрии. Преимуществом данного метода является то, что при его использовании возможно не только провести идентификацию хроматографичес-ких пиков, но записать спектр каждого компонента и провести сравнение с библиотечным фондом. Пробы с помощью микрошприца дозировали в газовый хроматограф Hewlett-РассаЫ 5890 с масс-селективным детектором MSD НР-5973А и системой обработки данных «HP Chem Station», содержащей библиотеку спектров на 200 тысяч соединений 2. Разделение компонентов смеси проводили в соответствии с рекомендациями каталога Hewlett-РассаЫ-^етша1 Analysis Columns and Supplies (2002—2003 гг., р.169) на кварцевой капиллярной колонке Ultra-2 (50 м х 0.2 мм) с привитой фазой 5% метилфенилсиликона, 95% диметилсилоксана, при программировании температуры от 50 оС до 280 оС со скоростью 10 оС в мин. Масс-спектры получали при ионизации электронным ударом 70 eV сканирование спектров от 33 до 450 а.е.м. Обработка данных включала анализ спектров, контроль
интерпретации на основании спектро-струк-" 3
турных корреляций 3 и построения селективных ионных масс-хроматограмм по отдельным ионам, специфичным для определяемых веществ. Количественное определение осуществляли по площади пиков на масс-хроматограмме и их отношению к полному ионному току (TIC).
Обсуждение результатов
Масс-спектры жирных кислот хорошо интерпретируются 3 благодаря наличию пиков молекулярных ионов (ми) и характеристических осколочных с общей формулой [(CH2)nCOOH]+, где n=4—10^ через каждые четыре метиленовых звена наблюдается повышенная интенсивность соответствующего иона в серии. Диагностическим, перегруппировоч-ным, нечетноэлектронным для жирных одноосновных кислот является фрагмент он
[СН2=с—Он]+ , m/z 60, наблюдающийся для
всех кислот Сб—С2б 3 . Поэтому анализ жирных одноосновных кислот при помощи хрома-то-масс-спектрометрического анализа может проводиться даже без использования библиотечных спектров. Несколько сложнее иденти-
фицируются непредельные кислоты, поскольку установление положения, как и конфигурации двойной связи, является неоднозначным. В этих случаях необходим библиотечный поиск и корреляция со временами удерживания 2. Поскольку коэффициент сходства большинства записанных спектров был не ниже 93%, считаем, что наши спектры корректно идентифицированы.
Исключение составляет пик со временем удерживания 14.76 мин. В спектре, кроме характерных фрагментов [(CH2)nCOOH]+, где n=4—10 и m/z 60, регистрируются пики молекулярных ионов (ми) 282 и 280. Первый из них принадлежит 9Z-октадеценовой (олеиновой) кислоте, второй — 9Z,12Z-октадекадиено-вой (линолевой) кислоте. Использование программного обеспечения AMDIS (Automated Mass Spertral Demnvollution and Identi^at^n System) позволяет идентифицировать соединения, перекрытые другими компонентами в хроматографическом пике 4. На рис. 1 видно, что пик 14.76 мин составной: основной вклад принадлежит олеиновой кислоте — масс-хро-матограмма иона 282 полностью описывает хроматографический пик (TIC), а масс-хрома-тограмма иона 280 составляет 30% от площади иона 282 и TIC.
Результаты исследования компонентного состава жирных кислот в плодах амми большой представлены в табл. 1 и на рис. 2, где приведена хроматограмма липофильного комплекса. Установлено наличие в ней соединений различной химической природы, а именно: насыщенных (миристиновая, пальмитиновая, стеариновая) и ненасыщенных (олеиновая, линолевая) высших жирных кислот; соединений фенольной природы, относящихся к классу кумаринов; терпеновых производных эфиромасличной фракции. При анализе спектров были выявлены следы (0.9% в смеси) ми-ристиновой кислоты — пик со временем удерживания 12.94 мин. На рис. 3—6 приведены масс-спектры хроматографических пиков и структура идентифицированных жирных кислот, имеющих достаточно высокое качество спектра и процентное содержание в смеси.
По данным литературы 5 известно, что в плодах амии большой содержится 0.08% эфирного масла, поэтому представляла интерес идентификация его компонентов. В результате анализа были идентифицированы кислородсодержащие производные сесквитерпеновых углеводородов: кариофиллен и его производные — хроматографические пики со временем удер-
ССЛШ Апа1уз<8 - Оа(а:С:\М8ПСНЕМ\1ШАТА\АММ1 ЛСЖ)88
Рис. 1. AMDIS. Суммарный спектр олеиновой (м.в. 282) и линолевой кислот (м.в. 280)
Р±1е
Оре га1ог Ас^и з. гее! Iпэьгитег^ Затр1е Мате
1п1Го \7ial НитЬег
С:\MSDChemM\DATA\AMMI
11 Лап 2010 19:01
^з'ЬгитепЪ № 1 РЬОПГ "АММI сиозэ
1
"сковв.о
из1пд AcqMethod СЕХАИЕ.м
14,76
15.73
15.32
ПС: АММ1 "СЯОЗЗО
17.29
16.71
I 17-Ф
II
17.53
21.35
1 Ч 1 1 1 Ч 1 1 ' 1 I 1 1 1 Ч 1 1 1 Ч ' 1 1 Ч 1 1 1 ' I 1 ■ 1 1 Г 1 1 1 I.............................I 1 '
Игпе-.ь 12.50 13.00 13.50 14 00 14,50 15.00 15.50 16.00 16.50 17.00 17.50 18.00 18.50 19.00 19.50 20.00 20.50 21.00 21.50 22.00
«к,..^.,... О лл« 4 0П0 / 4 л ОПЛ ■_>!а>\| ЛЙДЫ11 АЛОЛРС ГЛ I 1 У V
Рис. 2. Хроматограмма компонентного состава жирных кислот, выделенных из плодов амми большой
АЬипйэпсэ Эсап 1418 (12.938 гтап) АММ! »екоэз.о (-1408) (■)
Рис. 3. Масс-спектр и структура тетрадекановой (миристиновой) кислоты
Abundance 50000
л5000 Л DODO
Scan 1590 (13 770 min): AMMi "GROSS D (-1 507) (-)
35000
20000 15000 ЮООО SOOO 0
129
l
■iiiil ijLiit'i
С15Н31С00Н
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 2B0 ЗОО 320 340 360 380 400
Рис. 4. Масс-спектр и структура пальмитиновой (гексадекановой) кислоты
Abundance Scan 1808 (14.824 mir): AMMI "GROSS.D (-1806) (-)
Рис. 5. Масс-спектр и структура октадекановой (стеариновой) кислоты
Рис. 6. Масс-спектр и структура олеиновой (9-октадеценовой) кислоты
Рис. 7. Масс-спектр и структура кариофиллена
Рис. S. Масс-спектр и структура ß-гумулена
Таблица 1
Компонентный состав и содержание жирных кислот в плодах амми
Время удерживания, мин Формула Название компонента Содержание в смеси, % Качество спектра
тривиальное систематическое
12.94 С1зН2/СООН миристиновая тетрадекановая следы 68
1з.78 С15Нз1СООН пальмитиновая гексадекановая 5.1 з 98
14.76 С1уНззСООН олеиновая 9Z-октадеценовая 22.59 95
14.76 С1/Нз1СООН линолевая 9Z,12Z-октадека-диеновая 7.Э8 91
14.82 С1уНз5СООН стеариновая октадекановая 1.82 55
живания 15.32 мин (2.21%) и 16.14 мин (0,87%); а- и ^-гумулен — хроматографические пики со временем удерживания 15.54 мин (0.62%) и 16.71 мин (2.42%). Масс-спектры хроматографических пиков и структура идентифицированных компонентов эфирного масла, имеющих наибольший процентный вклад в смесь, представлены на рис. 7, 8.
Кроме того, в составе пробы были зарегистрированы: дибутилфталат (пик со временем удерживания 13.88 мин) и парафины: пик со временем удерживания 19.03 мин (С^Н38) и 21.35 мин (С20Н42), которые обычно применяются в качестве пластификаторов 6.
Таким образом, изучен состав высокомолекулярных жирных кислот, выделенных из плодов амми большой, и установлено присутствие как ненасыщенных, так и насыщенных жирных кислот, которые являются ценными
для организма человека, а их недостаток может привести к нарушению липидного обмена
и возникновению ряда заболеваний.
Литература
1. Плешков Б.П. Практикум по биохимии растений.— M., 1976. - 256 с.
2. Hill H. C., Read R. I., Robert - Lopes M. T. // J. Chem. Sol. (c)- 1968.- №i.- P. 93.
3. Лебедев А. Т. Mасс-спектрометрия в органической химии.- M.: БИНОM, 2003.- 493 с.
4. Zhand W., Wu P., Li C. // Rapid, Commun. Mass. Spectrom.- 2006.- V. 20.- P. 1563.
5. Ashraf M., Ahmad R., Bhatty M. K. // Pakistan J.- Sci. and Ind.Res.- 1979.- V. 22, № 6.-P. 320.
6. Хмельницкий Р. А., Бродский Е. С. Mасс-спек-трометрия загрязнений окружающей среды.-M.: Химия, 1990.- 184 с.
