CC BY
3
Выводы. Полученные результаты свидетельствуют о том, что использование комплексного препарата оказывает положительное влияние на адаптивные и ростовые процессы организма рыб карповых видов. В течение всего периода наблюдений отмечена положительная тенденция в отношении адаптации организма рыб и профилактики реакций на стресс. При этом препарат проявляет ростостимулирующее действие, обеспечивая увеличение приростов массы тела опытной рыбы на 8,74 % в сравнении с группой контроля, что позволяет сократить сроки выращивания товарной рыбы.
Список литературы
1. Виноградов Е. В. Стрессоустойчивость карпа (Сургт^ сагрю) в раннем онтогенезе и
ее влияние на рыбоводно-биологические характеристики. дисс....канд. биол. наук. Москва - 2021. - С. 4.
2. Хишов A. C. Обзор вакцин для аквакуль-туры / А. С. Хишов, Г. И. Бурлакова // Ветеринария Кубани. - 2020. - № 5. - С. 42-43.
3. Шиптон Томас А. Руководство по использованию кормов в системах производства карпов в системах и форели в Центральной Азии и Восточной Европе. Информационный бюллетень ФАО по рыболовству и аквакуль-туре № 1224. Продовольственная и сельскохозяйственная организация объединенных наций. Рим. - 2021. - С. 42.
4. Aerts J. Stress in aquaculture: a rough guide / Johan Aerts // Health. Welfare. - 2019. - № 4. -р. 427.
DOI: 10.48612/sbornik-2024-1-64 УДК 619:616-091:615.9:578.81
ВЫДЕЛЕНИЕ БАКТЕРИОФАГА, СПЕЦИФИЧНОГО К AEROMONAS CAVIAE
Басанкина Виктория Михайловна12, канд. вет. наук Чернов Альберт Николаевич1, д-р биол. наук
1ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии», г. Краснодар, Российская Федерация
2ФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный университет имени И. Т. Трубилина», г. Краснодар, Российская Федерация
В статье приведены результаты выделения нового штамма бактериофага, выделенного из патогенной культуры, которая была обнаружена у африканского сома, выращенного в условиях замкнутого водообеспечения (УЗВ).
Ключевые слова: рыба; рыбоводство; аквакультура; бактериофаги; сом; УЗВ
BACTERIOPHAGE ISOLATION SPECIFIC TO AEROMONAS CAVIAE
Basankina Viktoria Mikhailovna12, PhD Vet. Sci. Chernov Albert Nikolaevich1, Dr. Biol. Sci.
1 Krasnodar Research Centre for Animal Husbandry and Veterinary Medicine, Krasnodar, Russian Federation
2FSBEI HE «I. T. Trubilin Kuban State Agrarian University», Krasnodar, Russian Federation
The article presents the results of isolating a new strain of bacteriophage isolated from a pathogenic culture that was found in African catfish grown under conditions of installation of the closed water supply (ICWS).
Key words: fish; fish farming; aquaculture; bacteriophages; catfish; ICWS
За последние годы спрос на лечебные и профилактические препараты для использо-
вания в рыбоводстве значительно вырос. По данным отечественных производителей препаратов для ветеринарного применения, лекарственных средств, предназначенных для рыб, на рынке не так много. Особенно это касается биологических веществ, в том числе антимикробных препаратов.
Интенсивные методы выращивания рыб в УЗВ зачастую сопряжены с высокой плотностью посадки рыб в бассейнах. При этом содержание и выращивание большого количества особей рыб на малых площадях существенно снижает общую резистентность их организма, повышает риски заболеваемости и, тем самым, может увеличивать скорость распространения различных инфекций.
В настоящее время наибольший удельный вес всех болезнетворных микроорганизмов для большинства видов рыб занимают бактерии из родов Aeromonas, Pseudomonas, Shewanella, Hafnia, Citrobacter, Flavobacterium и Vibrio. Поэтому разработка на их основе комплексного бактериофага является важной задачей для ветеринарных врачей и ихтиопато-логов.
Наиболее распространенными возбудителями инфекционных заболеваний для осетровых, карповых и сомовых видов рыб являются бактерии из рода Aerononas, а именно виды Aerononas veronii, Aerononas caviae, Aerononas ichthiosmia, реже Aeromonas hydrophila и Aeromonas eucrenophila, а также Shewanella baltica, Shewanella xiamenesis, Hafnia alvei и Citrobacter braakii. Для лососевых видов опасность представляют бактерии рода Pseudomonas, а также Aerononas veronii, Aerononas caviae, реже Aeromonas salmonicida, Flavobacterium phsychrophilum, Flavobacterium columnare, Flavobacterium branchiophila, Vibrio anguillarum.
Одним из наиболее распространённых и опасных заболеваний рыб является аэромо-ноз. Аэромоноз - инфекционная болезнь рыб, характеризующаяся воспалением кожного покрова, очагами кровоизлияний, водянками, ерошением чешуи, пучеглазием, накоплением жидкости в брюшной полости [1]. Заболевание чаще всего протекает в форме смешанной бактериальной геморрагической септицемии рыб, где в возникновении инфекционного процесса играет роль сразу несколько возбудителей, при этом ведущую роль занимают аэромонады.
Бактерии рода Aeromonas были иденти-
фицированы еще в конце XIX века. Представляют собой грамотрицательные, палочковидные, факультативно-анаэробные, неспорооб-разующие бактерии. Имеют широкое распространение в окружающей среде: их выделяют из различных водных экосистем, из почвы, некоторых продуктов питания, а также от гидробионтов (рыб, кальмаров, крабов, раков, креветок и т.п.). Многие из представителей способны вызывать различные заболевания у рыб и людей [6].
Род Aeromonas имеет сложную таксономию. Как и многие другие микроорганизмы, данный род длительный период времени подвергался ряду таксономических и номенклатурных изменений. Первоначально данный род относили к семейству Vibrionaceae. Однако позже, с помощью метода молекулярной гибридизации было показано, что Aeromonas не имеют родства с вибрионами [5]. Поэтому род Aeromonas был выделен в самостоятельное семейство Aeromonadaceae. В настоящий момент род Aeromonas включает в себя: A. hydrophila, A. caviae, A. veronii, A. schubertii и т.д., то есть мезофильные виды, а также психрофильные неподвижные виды -A. salmonicida и A. media. Мезофильные виды подвижны, их оптимальная температура роста составляет от 35 до 37°C, они способны вызывать инфекции не только у гидробионтов, но и у людей. Заболеваемость в основном вызывают A. veronii, A. caviae (A. punctata), A. hydrophila, А. ichtiosmia, приводя к бактериемии, гастроэнтериту или даже сепсису [3]. Другая группа включает неподвижные бактерии с температурой роста от 22 до 25°C, вызывающие множество различных заболеваний у рыб, например, фурункулез, сепсис, язвенные или геморрагические заболевания. Типичный представитель - A. salmonicida [3].
Впервые выделение вида A. caviae из клинического материла было описано в 1983 году. Из-за схожести биохимических свойств данного изолята с Vibrio cholerae, в то время название было другим. Только в 1987 г. штаммы получили название A. caviae [2].
Чуть позже в 1993 г появились сведения о выделении этих бактерий у человека с диагнозом менингит [8]. На многих рыбных фермах государства Бангладеш распространено такое заболевание, как эпизоотический язвенный синдром, которое выражается в появлении у рыб глубоких ран и характеризуется гибелью значительной части пораженной
рыбы. Изоляты от этих рыб чаще идентифицируются как A. veronii biovar sobria [9]. М. А. Hassan et al. выделил образцы A. veronii от рыб вида нильская тиляпия на двух рыбных фермах. В его работе отмечается, что A. caviae так же, как и A. hydrophila вызывают геморрагическую септицемию у рыб [4]. По результатам анализа литературы нами было установлено, что изучению бактерий данного рода на территории Российской Федерации не уделено достаточно внимания. Поэтому нашей дальнейшей целью явилось проведение исследовательской работы в этом направлении.
Методика исследований. 1 января 2021 года на территории Российской Федерации вступил в силу Приказ Министерства сельского хозяйства от 14 апреля 2020 г. № 196 «Об утверждении Ветеринарных правил осуществления профилактических, диагностических, лечебных, ограничительных и иных мероприятий, установления и отмены карантина и иных ограничений, направленных на предотвращение распространения и ликвидацию очагов аэромонозов лососевых и карповых рыб». Помимо прочего, в данном приказе описаны правила отбора особей рыб для исследований в зависимости от возрастной группы, а также правила упаковки и транспортировки живой рыбы и биоматериала от крупных особей с клиническими признаками аэромоноза
[7].
В свою очередь, лабораторная диагностика согласно действующим нормативам не
дает возможности идентифицировать данный возбудителя до вида. Поэтому для диагностики мы использовали методические рекомендации, разработанные на базе нашего института [2].
Для эксперимента были отобраны полугодовалые особи африканского сома со средней массой тела 350-500 г в количестве 5 шт., выращенные в УЗВ. Рыба, взятая для эксперимента, имела клинические признаки аэро-моноза, а именно - эрозии в области спинных плавников, гиперемии в области брюшка (рис. 1).
Фенотипические свойства выделенного микроорганизма изначально изучали классическим методом с помощью микроскопического, биохимического и биологического методов (рис. 2). Для подтверждения идентификации использовали масс-спектрометрический метод на оборудовании МАЬБЫОР.
Для накопления биомассы бактерии A. caviae культивировали при температуре (37±0,5)°С в течении 24 ч на МПА с добавлением 5 % стерильной дефибринированной крови крови барана.
Выделение бактериофагов, активных в отношении А. caviae, проводили методом накопления по схемам, описанным в работах Викторова Д. А. [3, 4], Васильева С. Н. [3, 4], и оптимизированным нами с учётом биологических особенностей A. caviae.
Рисунок 1 - Клинические изменения у африканского сома при аэромонозе
Рисунок 2 - Фенотипические свойства выделенного микроорганизма (A. caviae)
В 2 колбы на 200 мл с 50 мл стерильного концентрированного (концентрация бульона увеличена в два раза) мясопептонного бульона добавлялось по 50 г исследуемых образцов патологического материала (сердце, печень, почки, кишечник).
В каждую из колб добавлялось по 0,5 мл суточных индикаторных культур штамма бактерии A. caviae, после чего полученная смесь перемешивалась и помещалась в термостат на 24 часа при (37±0,5)°C. После инкубации из полученной в колбах суспензии отбиралось по 10 мл бульона в стерильные пластиковые пробирки для центрифугирования. Отобранные образцы центрифугировались 20 минут при 5000 об/мин. По окончанию центрифугирования супернатанты отделяли от осадка и проводили центрифугирование на универсальной лабораторной центрифуге Sigma 2-16KL с режимом 15000 об/мин в течении 120минут. Осадок ресуспендировали в буфере и фильтровали через мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, после чего фильтрат помещался в стерильные пробирки для хранения и дальнейших исследований.
Определение наличия фагов, активных в отношении бактерий A. caviae и определение специфичности активности бактериофагов проводили методом стекающей капли [3, 4]. Для этого на чашки Петри, засеянные суточными культурами бактерий: A. caviae, A. veronii, A. salmonicida, A. eucrenophila, A. hydrophila и А. iсhthiosmia и подсушенных в термостате в течение 20 минут при (37±0,5) °С по каплям пипеткой наносился исследуемый фильтрат. После чего чашки Петри помещались в термостат на 24 часа при температуре (37±0,5) °С. В данной работе использовались ранее выделенные нами штаммы микроорганизмов, которые в 2019 году были депонированы в коллекцию «ВГНКИ».
Результаты исследований и их обсуждение. Клинические признаки аэромо-ноза нашли свое подтверждение в ходе лабораторной диагностики и от опытных сомов нами был выделен штамм бактерии A. caviae. Были изучены фенотипические свойства возбудителя с помощью методов, указанных выше. Результаты представлены в таблице 1
Таблица 1 - Фенотипические свойства выделенного штамма A. caviae
ПЖА Симмонса Ф-П I Желатин Аргинин Орнитин Лизин Лак.молоко Мальтоза Арабиноза Салицин Лактоза Манноза Сахароза Маннит Рамнозой Ксилозой Раффиноза Сорбит Мочевина Индол Биопроба Эскулин
- + + - - + - - СО + + +/- +/- +/- - - - - - - - + + +
Кроме этого, идентификация была подтверждена с помощью масс-спектрометрического метода на оборудовании MALDI-TOF. Данный метод является более эффективным методом идентификации бактерий и грибов, чем большинство биохимических тестов. В ходе сравнения на основе корреляции полученных пиков по их интенсивности, значение коэффициента совпадения Score=2,25, что представляет собой достаточно высокий уровень достоверности.
Затем, в соответствии с поставленной целью из образцов патологического материала африканского сома был выделен новый вирулентный бактериофаг, специфичный к
Таблица 2 А. сaviae
Выводы. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что данный бактериофаг является перспективным для дальнейшего научного исследования. Может служить в качестве видовой идентификации возбудителя, а также в качестве фаготерапии и фагопрофилактики при заболеваниях, вызванных бактерией А. сaviae. Создание на его основе препарата позволит безопасно и эффективно бороться с инфекцией, тем самым сократить потери и улучшить экономические показатели в рыбоводстве.
Список литературы
1. Басанкина В. М. Особенности лабораторной диагностики при аэромонозе рыб / В. М. Басанкина, С. В. Пруцаков, А. В. Басанкин // Ветеринария Кубани. - 2019. - № 3. - С. 21-24.
культуре Аeromonas сaviae. Проведены исследования спектра литической активности, результаты которых представлены в таблице 2. Данные показали, что спектр литического действия у выделенного бактериофага строго специфичен. Для дальнейшего использования выделенного фага в производстве необходимо изучить активность по Аппельману и Грация, провести исследования морфологии негативных колоний на разных питательных средах по двум параметрам - размеру и прозрачности, а также определить температурную устойчивость, и устойчивость к хлороформу.
2. Басанкина В. М. Лабораторная диагностика аэромоноза / смешанной бактериальной геморрагической септицемии рыб (Aeromonosis / Mixed Bacterial hemorrhagic fish septicemia) (MBHFS) / В. М. Басанкина, С. В. Пруцаков, Н. Ю. Басова [и др.] // Краснодар -2020 - С. 78.
3. Васильев Д. А. Выделение бактериофагов бактерий Pseudomonas putida и их селекция в целях создания биопрепарата для диагностики псевдомоноза рыб / Д. А. Васильев, Д. А. Викторов, И. И. Богданов // Естественные и технические науки. - 2011. - № 2 (52). - С. 7982.
4. Викторов Д. А. Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов Pseudomonas fluorescens/ Д. А. Викторов, А. М. Артамонов, Д. А. Васильев // Ветеринария и
- Спектр литического действия выделенного бактериофага, активного в отношении
№ п/п Штаммы Бактериофаг
1. Aeromonas caviae +++
2. Aeromonas veronii -
3. Aeromonas salmonicida -
4. Aeromonas salmonicida -
5. Aeromonas eucrenophila -
6. Aeromonas eucrenophila -
7. Aeromonas veronii -
8. Aeromonas caviae ++++
9. Aeromonas hydrophila -
10. Aeromonas veronii -
11. Aeromonas khthiosmia -
12. Aeromonas khthiosmia -
13. Aeromonas veronii -
14. Aeromonas salmonicida -
15. Aeromonas khthiosmia -
кормление. - Москва: «ВЕТКОРМ», 2012. - №5. - С. 8-9
5. Минаева А. Н. Общая характеристика бактерий вида Aeromonas veronii / А. Н. Минаева, А. А. Ломакин, Д. А. Васильев [и др.] // Евразийский союз ученых. - 2021. - № 2-2 (83). - С. 7-9.
6. Насибулин И. Р. Бактериофаги Aeromonas hydrophilа и их биологическая характеристика / И. Р. Насибулин, А. А. Нафеев // Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения: Материалы Национальной научно-практической конференции. В 2-х томах, Ульяновск, 20-21 июня 2019 года. Том 2019-1. -Ульяновск: Ульяновский государственный аграрный университет им. П.А. Столыпина, 2019. - С. 272-277.
7. Приказ Министерства сельского хозяйства РФ от 14 апреля 2020 г. № 196 «Об утверждении ветеринарных правил осу-
ществления профилактических, диагностических, лечебных, ограничительных и иных мероприятий, установления и отмены карантина и иных ограничений, направленных на предотвращение распространения и ликвидацию очагов аэромонозов лососевых и карповых рыб» // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. -2020. - № 2. - С. 10-11.
8. Parras F. Meningitis due to Aeromonas species: case report and review / F. Parras, M. D. Diaz, J. Reina [et al.] // Clin Infect Dis. - 1993. - № 6. - C. 1058-60.
9. Rahman M. Identification and Characterization of Pathogenic Aeromonas veronii Biovar Sobria Associated with Epizootic Ulcerative Syndrome in Fish in Bangladesh / M. Rahman, P. Colque-Navarro, I. Kühn [et al.] // Applied and Environmental Microbiology. - 2002. - № 2. - P. 650-655.
БО1: 10.48612^Ьогтк-2024-1-65 УДК 619:6212.1:636.52/.58.087
ВЛИЯНИЕ СОРБИДЕКСИЛА НА ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ У ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ МИКОТОКСИКОЗЕ
Долгов Евгений Петрович, канд. вет. наук Кузьминова Елена Васильевна, д-р вет. наук, доцент Семененко Ксения Андреевна, канд. экон. наук Абрамов Андрей Андреевич, канд. вет. наук
ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии», г. Краснодар, Российская Федерация
В статье приведены данные по изучению влияния сорбидексила на морфологические показатели крови у цыплят-бройлеров при экспериментальном микотоксикозе. В результате установлено, что его применение цыплятам-бройлерам приводит к уменьшению клинических симптомов интоксикации и положительной динамике гематологических показателей крови. Ключевые слова: гематология; цыплята-бройлеры; микотоксикозы; сорбенты
INFLUENCE OF SORBIDEXYL ON HEMATOLOGICAL BLOOD PARAMETERS IN BROILER CHICKENS WITH EXPERIMENTAL MYCOTOXICOSIS
Dolgov Evgeny Petrovich, PhD Vet. Sci.
Kuzminova Elena Vasilievna, Dr. Vet. Sci., Associate Professor
Semenenko Ksenia Andreevna, PhD Econ. Sci.
Abramov Andrey Andreevich, PhD Vet. Sci.
Krasnodar Research Centre for Animal Husbandry and Veterinary Medicine, Krasnodar, Russian Federation
