CC BY
8
ВОЗМОЖНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ОЗОНОТЕРАПИИ В ОНКОЛОГИЧЕСКОЙ КЛИНИКЕ
119
К.Н. Конторщикова , А.В. Алясова , В.В. Новиков
1 Приволжский медицинский исследовательский университет, Н. Новгород,
Россия
2
Нижегородский НИИ микробиологии, Н. Новгород, Россия
Abstract
Background. Breast cancer ranks first among malignant neoplasms in women. The problem of rehabilitation therapy for patients is one of the most difficult in clinical oncology. Leading role in maintaining consistency internal environment and the formation of the body's resistance to various influences belongs to the detoxification system and its antioxidant link. Efficiency the immune and nervous systems depend on the activity of free radical oxidation reactions. The initiation of lipid peroxidation is the most important factor in the pathogenesis of all stages of tumor formation. Used to treat malignant neoplasms, chemo-radiation therapy, in turn, initiates processes lipid peroxidation and has an immunosuppressive effect. The body of patients, in conditions of the existence of oncological pathology, is not able to independently normalize peroxide homeostasis and effectively exercise protective immune reactions. The use of exogenous antioxidants becomes pathogenetically justified, as well as substances that affect the level of endogenous antioxidants. However, in cases far away an advanced tumor process, when lipid peroxidation is suppressed, more it becomes advisable to use drugs that have not only antioxidant, but also prooxidant effect.
Purpose of the study: to characterize the effect of ozonized physiological solution (OF) on the pro-antioxidant link of homeostasis, the immune system and metabolism trace elements in patients with breast cancer (BC) in the process of antitumor chemotherapy.
Materials and methods. The study included 300 patients with breast cancer aged 35-65 years with a histologically confirmed diagnosis of the disease. Based on clinical instrumental examination of patients and taking into account the post-surgical breast cancer classification in 15 people (5.0%) stage I was established, in 64 (21.4%) - stage II stage, in 139 (46.3%) - stage III, 82 (27.3%) - stage IV of the process. Control group consisted of 30 healthy women, comparable in age with the examined patients. PCT courses were carried out in 272 patients (90.7%). DFR against the background of polychemotherapy courses was used in 64 patients with metastatic and locally advanced breast cancer, the control group consisted of patients who received only polychemotherapy courses (1 comparison group - 69 people) or who received drug therapy in combination with non-zoned saline (2 comparison group - 25 people). Biochemiluminescent blood analysis was performed using a biochemiluminometer BKhL-06 (developed by the Nizhny Novgorod Research Center
"Biopharmavtomatika"). Assessment of the intensity of lipid peroxidation processes (LPO) was carried out according to the accumulation of molecular products in blood plasma lipid peroxidation: primary products of lipid peroxidation (diene conjugates -DC and triene conjugates - TC) and the end products of LPO - Schiff bases (OR). For immunophenotyping of peripheral blood cells was used standard panel: IKO-31; IKO-60; IKO-86; IKO-92; IKO-105; IKO-116; ICO-160, research were carried out in accordance with the methodological recommendations of A.Yu. Baryshnikov (2001). The determination of the number of soluble molecules was carried out using developed by the authors of the enzyme immunoassay methods using monoclonal antibodies of the ICO series. To determine the content of trace elements in blood serum patients used an atomic emission spectrometer with induction-coupled plasma (Model I CAP6300 INTERTECH, USA). To obtain medical ozone the ozonizer of the company Kvazar (N. Novgorod) was used. The method of introducing OFR against the background of PCT developed by the authors (patent for the invention "Method of treating locally widespread breast cancer in the preoperative period (options) "No. 2207862 from 10.07.03). The obtained data were processed using a package of statistical programs STATISTICA 6.0
Results. Before starting treatment in breast cancer patients, significant changes in pro-antioxidant homeostasis, indicators of the immune system, exchange of trace elements. Polychemotherapy provided prooxidant, immunosuppressive effect, aggravated zinc deficiency in the body. Using OFR in combination with cytostatics contributed to the improvement of the clinical condition patients and increased their tolerance to chemotherapy, which had a positive effect on the three-year survival rate of patients. The use of OFR contributed to the optimization the functioning of the body's antioxidant system, improved the functioning immune system, had a positive effect on the metabolism of trace elements.
Key words: ozone therapy, breast cancer
Проблема восстановительной терапии больных является одной из сложнейших в клинической онкологии. Главенствующая роль в сохранении постоянства внутренней среды и формировании устойчивости организма к различным воздействиям принадлежит системе детоксикации и ее антиокислительному звену. В случаях далеко зашедшего опухолевого процесса, когда перекисное окисление липидов подавлено, патогенетически оправданным становится использование в комплексном противоопухолевом лечении препаратов, обладающих не только антиоксидантным, но и прооксидантным действием.
Цель исследования: охарактеризовать влияние озонированного физиологического раствора (ОФР) на про-антиоксидантное звено гомеостаза, иммунную систему и обмен микроэлементов у больных раком молочной железы (РМЖ) в процессе противоопухолевой химиотерапии.
Материалы и методы. Под наблюдением находилось 300 больных РМЖ 3565 лет с гистологически подтвержденным диагнозом заболевания. ОФР на фоне курсов полихимиотерапии был использован у 64 пациенток метастатическим и местнораспространенным РМЖ, контрольную группу составили больные, получавшие только курсы полихимиотерапии (1 группа сравнения - 69 человек)
или получавшие лекарственную терапию в сочетании с неозонированным физиологическим раствором (2 группа сравнения - 25 человек). Биохемилюминесцентный анализ крови выполняли с помощью биохемилюминометра БХЛ-06 (разработанного Нижегородским научно-исследовательским центром «Биофармавтоматика»). Оценка интенсивности процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) осуществлялась по накоплению в плазме крови молекулярных продуктов липопероксидации: первичных и конечных продуктов ПОЛ. Для иммунофенотипирования клеток периферической крови использовалась стандартная панель: ИКО-31; ИКО-60; ИКО-86; ИКО-92; ИКО-105; ИКО-116; ИКО-160. Определение количества растворимых молекул осуществляли с помощью разработанных авторами иммуноферментных методов с применением моноклональных антител серии ИКО. Для определения содержания микроэлементов в сыворотке крови больных использовался атомно-эмиссионный спектрометр с индукционно-связанной плазмой (Модель I САР6300 INTERTECH, США). Для получения медицинского озона использовался озонатор фирмы Квазар (Н.Новгород). Методика введения ОФР на фоне ПХТ разработана авторами. Полученные данные были обработаны с помощью пакета статистических программ STATISTICA 6.0
Результаты. Использование ОФР в сочетании с цитостатиками оптимизировало функционирование антиоксидантной системы организма, улучшало иммунные процессы, оказывало положительное влияние на обмен микроэлементов, что способствовало улучшению клинического состояния больных и повышало переносимость ими химиопрепаратов, что положительно сказывалось на трехлетней выживаемости пациенток.
Заключение. Комплексность лечебного воздействия на различные системы организма, оказываемая озонированным физиологическим раствором, позволяет считать его средством метаболической реабилитации пациентов, повышающим адаптационно-приспособительные способности организма и его сопротивляемость экстримальным воздействиям
Ключевые слова: озонированный физиологический раствор, рак молочной железы
Реабилитация больных после перенесенного комплексного и комбинированного лечения, восстановление их трудоспособности - одна из сложнейших проблем в клинической онкологии.
В сохранении постоянства внутренней среды и формировании устойчивости организма к различным воздействиям ведущая роль принадлежит системе детоксикации и ее антиокислительному звену, которое осуществляет обезвреживание и элиминацию свободно-радикальных и перекисных соединений эндогенного и экзогенного происхождения, в том числе, образовавшихся в процессе лечения [1,2]. От активности реакций перекисного окисления липидов (ПОЛ), протекающих в липидном бислое мембран клеток, зависит эффективность работы иммунной и нервной систем. Инициация перекисного окисления липидов является важнейшим фактором патогенеза на всех этапах формирования опухоли. Применяемая для лечения злокачественных новообразований химио-лучевая терапия в свою очередь,
активирует процессы свободно-радикального окисления и обладает иммуносупрессивным действием [3].
Организм больных, в условиях существования онкологической патологии, не способен самостоятельно нормализовать перекисный гомеостаз и эффективно осуществлять защитные иммунные реакции. В случаях далеко зашедшего опухолевого процесса, когда перекисное окисление липидов подавлено, целесообразно использование препаратов, обладающих не только антиоксидантным, но и прооксидантным действием [3,4].
Цель исследования: охарактеризовать влияние озонированного физиологического раствора (ОФР) на про-антиоксидантное звено гомеостаза, иммунную систему и обмен микроэлементов у больных раком молочной железы (РМЖ) в процессе противоопухолевой химиотерапии
Материал и методы
Под наблюдением находилось 300 больных РМЖ 35-65 лет с гистологически подтвержденным диагнозом заболевания. На основании клинико -инструментального обследования и с учетом постхирургическогй классификации РМЖ у 15 человек (5,0%) установлена I стадия, у 64 (21,4%) -II стадия, у 139 (46,3%) - III стадия, 82 (27,3%) - IV стадия заболевания. Впервые поступили в стационар 88 пациенток (29,3%), остальные ранее получали противоопухолевую терапию. Курсы полихимиотерапии проведены у 272 больных (90,7%). Контрольную группу составили 30 здоровых женщин, сопоставимых по возрасту с обследованными пациентками. ОФР на фоне курсов полихимиотерапии использован у 64 (23,5% от 272 больных, получавших химиотерапию) пациенток метастатическим и местнораспространенным РМЖ, 1 группу сравнения составили больные, получавшие только курсы полихимиотерапии (69 человек, 25,4%), 2 группу сравнения - получавшие лекарственную терапию в сочетании с неозонированным физиологическим раствором - НФР (25 человек, 9,2%). Все процедуры с вовлечением больных были проведены в соответствии с Протоколом Хельсинской декларации по правам человека (1975 года и ее пересмотренного варианта 2000 г). Все пациентки подписывали информированное согласие на участие в исследовании.
Биохемилюминесцентный анализ крови выполняли с помощью биохемилюминометра БХЛ-06 (Нижегородский научно-исследовательский центр «Биофармавтоматика»). Количество общих липидов (ОЛ) определяли по методу V.Chromy (1975) с использованием диагностических наборов фирмы «Lachema». Экстракцию липидов из материала проводили методом J.Folch et al. (1957). Оценка интенсивности процессов ПОЛ осуществлялась по накоплению в плазме крови молекулярных продуктов липопероксидации: первичных (диеновых конъюгатов -ДК, триеновых конъюгатов - ТК) и конечных - оснований Шиффа (ОШ). Уровень ДК и ТК регистрировали методом ультрафиолетовой спектроскопии при длине волны 233 и 275 нм соответственно, концентрацию выражали в единицах оптической плотности относительно количества общих липидов. Содержание ОШ оценивали флуориметрическим методом по D.L. Fletcher et al. (1973) при длине волны возбуждения 365 нм и длине волны эмиссии 420 нм. Результаты выражали в относительных единицах.
Для иммунофенотипирования клеток периферической крови использовалась стандартная панель: ИКО-31; ИКО-60; ИКО-86; ИКО-92; ИКО-105; ИКО-116; ИКО-160, исследования выполнялись в соответствии с методическими рекомендациями А.Ю.Барышникова (2001). Определение количества растворимых молекул CD50, CD95, CD38, HLA I класса осуществляли с помощью разработанных авторами иммуноферментных методов с применением моноклональных антител серии ИКО [5]. Учет результатов проводили спектрофотометрически при длине волны 492 нм с использованием фотометра АИФ-М/340. Результаты оценивали, переводя единицы оптической плотности в условные единицы (U/ml).
Для определения содержания микроэлементов в сыворотке крови больных использовался атомно-эмиссионный спектрометр с индукционно-связанной плазмой (Модель I САР6300 INTERTECH, США).
Для получения медицинского озона применялся озонатор фирмы Квазар (Н.Новгород). ОФР вводили внутривенно, концентрация озона в озоно-кислородной смеси подбиралась индивидуально, на основании гемограммы, анализов иммунного статуса, показателей антиоксидантной системы защиты (АОЗ) и ПОЛ. Методика введения ОФР на фоне полихимиотерапии разработана авторами (патент на изобретение «Способ лечения мест-нораспространенного рака молочной железы в предоперационный период (варианты)» №2207862 от 10.07.03). Полученные данные были обработаны с помощью пакета статистических программ STATISTICA 6.0
Результаты
У больных РМЖ по данным биохемилюминесцентного анализа значения tg(-2а), характеризующие АОЗ, были повышены в 1,5, величина S/ОЛ - в 7,8 (р<0,005), показатель Imax/ОЛ - в 11,2 раз. Уровень ДК повышался (р<0,005) относительно здоровых лиц в 3,3, ТК - в 5,3, ОШ - в 2,8 раза (табл. 1). Индивидуальный анализ показал, что у 44,0% пациенток организм находился в состоянии пероксидного стресса.
В иммунограмме больных возрастало, относительно уровня здоровых лиц, количество CD16+, CD71+, CD25+, CD38+ клеток (р<0,005) и снижалось содержание CD4+ клеток (р<0,005). Уровень CD22+ клеток превышал верхнюю границу нормы у 104 человек (45,4%). У 128 больных (55,9%) имело место увеличение числа HLA-DR+ клеток (рис. 1). Уровень CD95+ клеток был повышен в 45,9% случаев (105 человек). Изменение содержания HLA-I+ клеток, преимущественно снижение, наблюдалось у 155 больных (67,7%).
Средние значения сывороточных концентраций растворимых форм молекул CD38, CD50, CD95 и HLA I класса у больных РМЖ превышали соответствующие уровни в контрольной группе (рис. 2).
Средний уровень цинка, меди и железа в плазме крови больных был достоверно (р<0,005) снижен, кроме того отмечено нарушение соотношения концентраций этих микроэлементов, по сравнению с группой здоровых лиц (таблица 2)
Таблица 1. Показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы защиты у больных раком молочной железы и здоровых женщин
Группы Показатели
и 1тах имп/сек Диеновые коньюгаты, ед.опт.пл/мг. общ.лип. Триеновые коньюгаты, ед.опт.пл/мг.общ.лип. Основания Шиффа, отн.ед./мг. общ.лип. Общие липиды, г/л
Больные, п=300 0,61± 0,14 16,15+ 1,04* 2,13+ 0,26* 0,36± 0,04* 0,16± 0,05* 7,18+ 1,14* 1,27+ 0,53*
Здоровые, п=30 0,42± 0,04 2,08± 0,12 0,19± 0,004 0,11± 0,03 0,03± 0,001 2,48± 0,08 5,85± 0,02
- различия достоверны, по сравнению с контрольной группой (р<0,005).
контрольная группа
Рис. 1. Относительное содержание антиген-положительных клеток у больных раком молочной железы и здоровых лиц (* - различия между группами статистически достоверны
(р<0,005))
На фоне полихимиотерапии уровень 1§(-2а) у лиц, начинающих и заканчивающих лечение, достоверно не отличался, но отмечалось возрастание (р<0,05) величин Б/ОЛ (19,07+1,57 ед перед 1 курсом химиотерапии, 23,59+1,34 ед перед 6 курсом химиотерапии) и 1тах/ОЛ (2,47+0,31 ед и 3,55+0,29 соответственно). У больных, получавших 6 курс, прослеживалась тенденция к
повышению уровня начальных продуктов ПОЛ. Количество ОШ в процессе лечения изменялось незначительно.
Рис. 2. Сывороточный уровень растворимых молекул CD38, CD50, CD95 и sHLA I класса у больных раком молочной железы и в контрольной группе (1 - СD38 молекулы, 2 - CD50 молекулы, 3 - CD95 молекулы, 4 - НЬА I класса молекулы; различия статистически достоверны по сравнению с группой здоровых лиц:
р<0,05; ** - р<0,005; *** - р<0,0005.)
г- *
Таблица 2. Содержание цинка, меди и железа в плазме крови
Обследуемые группы Содержание микроэлементов, ммоль/л
цинк медь железо
Больные, п=142 11,59+0,48* 12,1210,54* 13,87±0,62*
Контрольная группа, п=30 17,10±0,36 18,93±0,60 21,58±0,69
*- различия статистически достоверны в сравнении с контролем, р<0,005
Полихимиотерапия способствовала снижению (р<0,05) количества НЬА-ВЯ+, СБ16+, СБ71+клеток, увеличению содержания CD50+ клеток (р<0,05). Уровень растворимых форм исследованных молекул снижался в процессе лечения, однако, со значительными индивидуальными различиями. В случаях с последующей стойкой ремиссией заболевания количество растворимых молекул CD38, CD95 и ^А I класса молекул приближалось к показателям здоровых женщин, а содержание растворимого CD50 белка оставалось значительно ниже нормы. При недостаточной эффективности цитостатиков концентрации растворимых молекул по окончании лечения в 2-10 раз и более превышали показатели здоровых женщин. Зарегистрированные ремиссии были нестойкими, их длительность составляла не более 3-4 месяцев.
Проведение химиотерапии способствовало снижению уровня цинка. К 6 курсу содержание этого микроэлемента было ниже, чем перед началом лечения (12,7+0,57 и 10,44+0,57 соответственно, р<0,05). Уровень меди в плазме крови больных к моменту окончания терапии имел тенденцию к снижению, напротив концентрация железа незначительно возрастала.
Таблица 3. Частота встречаемости клинической симптоматики у больных после _курса лечения_
Симптомы После введения озонированного физиологическог о раствора, п=64 После химиотерапии, п=69
Снижение аппетита 34 (53,1%)* 50 (72,4%)
Тошнота 37 (57,8%)* 69 (100,0%)
Рвота 17 (26,5%)* 32 (46,4%)
Изжога 15 (23,4%) 19 (27,5%)
Сухость во рту 10 (15,6%)* 38 (55,1%)
Боли в эпигастральной области, в подреберных областях по ходу толстого кишечника 28 (43,8%)* 46 (66,7%)
Нарушение сердечного ритма, боли в области сердца 20 (31,3%) 31 (44,9%)
Головные боли 28 (43,8%)* 42 (60,9%)
Головокружение 25 (39,1%)* 38 (55,0%)
Общая слабость 24 (37,5%)* 52 (75,4%)
Потливость 20 (31,3%)* 50 (72,4%)
Нарушение сна: бессонница, сонливость днем 7 (10,9%)* 3 (4,69%)* 34 (49,3%) 9 (13,0%)
Инфекционные осложнения 14 (21,9%) 22 (31,8%)
* - различия статистически достоверны между группой, получав-шей средство, корригирующее антиоксидантную систему защиты, и соответствующей ей группой сравнения, р<0,05
Использование ОФР способствовало улучшению переносимости пациентами химиопрепаратов. Меньше беспокоили симптомы интоксикации, появлялось ощущение прилива энергии и сил, улучшалось настроение и сон, повышалась работоспособность и двигательная активность, уменьшалась тревожность больных, фиксация на собственных ощущениях (табл. 3). Снижалась частота появления, степень выраженности и длительность тошноты и рвоты. Реже возникали головные
боли и головокружения, нарушения сердечного ритма и боли в области сердца, боли в эпигастральной области и по ходу толстого кишечника. Уменьшалось количество инфекционных осложнений. Клинический эффект был зарегистрирован в 84,4% случаев. Побочных эффектов и осложнений в результате введения ОФР, ухудшения состояния больных, не отмечалось. Использование ОФР в сочетании с химиотерапией оказывало благоприятное влияние на показатели трехлетней выживаемости пациенток. Общая трехлетняя выживаемость в этой группе была в 1,65 раза выше (р<0,05), чем в 1 группе сравнения и в 1,59 раза выше, чем во 2 группе сравнения (р<0,05). Улучшение прогноза заболевания у больных онкологической патологией, увеличение выживаемости пациентов при включении в состав противоопухолевого лечения озонотерапии отмечено и другими исследователями [7-9], в том числе при раке простаты, при опухолях головы-шеи.
Таблица 4. Изменение показателей перекисного окисления липидов у больных
Группы Показатели
tg(-2a), ед s/ОЛ, с Imax/О Л, имп/с Диеновые конъюгат ы, ед.опт.пл/ мг.общ.ли п Триеновые конъюгаты, ед.опт.пл/ мг.общ.лип Основани я Шиффа, отн.ед/ мг.общ.л ип
ОФР и и химиотерапия 0,58+0,09 26,48±2,24 3,40±0,6 4 0,49±0,12 0,40+0,12 10,1^+1,74
0,70±0,06 18,93±1,05^ 2,90±0,5 6 0,39±0,09 0,16±0,03^ 7,63±1,82
1 группа 0,51±0,16 24,22±2,71 2,77±0,4 8 0,42±0,11 0,36±0,06 9,57±1,38
0,41±0,08*1- 2 27,18±2,84*1- 2 3,56±0,5 2 0,37±0,09 0,36±0,10*1-2 10,72±1,87
2 группа 0,64+0,13 27,73±2,38 3,60±0,3 5 0,47±0,14 0,39+0,11 11,0^+1,89
0,45+0,06*13 23,83±2,63*1- 3 3,06±0,2 9 0,44±0,11 0,35+0,09*1-2 8,71+1,63
Контрол ь 0,39+0,08 18,83±1,58 2,56±0,4 6 0,59±0,08 0,1^+0,08 12,86+1,69
- различия статистически достоверны при сравнении показателей между группами, получавшими один метод лечения: * - р<0,05;
- различия статистически достоверны при сравнении показателей внутри каждой группы: • - р<0,05.
Примечание: над чертой приведены показатели до лечения, под чертой - после лечения
Применение плацебо не влияло существенным образом на частоту развития побочных эффектов химиопрепаратов. Так, появление тошноты II-III степени отмечалось у этих пациенток в 44,0%, нарушений сна - в 56,0%.
У больных, получавших курсы полихимиотерапии в сочетании с ОФР, биохемилюминесцентный анализ выявил повышение после курса лечения в
среднем на 17,1%. Снижение величин Б/ОЛ (р<0,05) и 1тах/ОЛ свидетельствовало о возрастании способности организма тормозить реакции окисления. Уменьшалось содержание диеновых конъюгатов - на 20,4%, триеновых коньюгатов - на 60,0% (р<0,05), оснований Шиффа - на 24,9% (таблица 4).
Таблица 5. Относительное содержание CD95-положительных мононуклеарных клеток периферической крови больных раком молочной железы до начала и после _окончания терапии _
Группы СБ95+
Озонированный раствор и полихимиотерапия До лечения 32,6±1,5аа
После лечения 27,3±1,4*
1 группа сравнения До лечения 27,6+1,5
После лечения 30,6±1,5а
2 группа сравнения До лечения 31,8±1,5аа
После лечения 29,9±1,5а
Контрольная группа 24,14±3,51
* - различия статистически достоверны в пределах одной группы (р<0,05);
▲ - различия статистически достоверны по сравнению с контрольной группой (р<0,05);
▲ ▲ - различия статистически достоверны по сравнению с контрольной группой (р<0,005).
В 1 группе сравнения величина после курса лечения была ниже, чем у
больных, получавших ОФР (р<0,05). Наблюдалось повышение показателей S/ОЛ и 1тах/ОЛ после курса лечения на 17,2% и 30,9% соответственно, причем величина Б/ОЛ достоверно отличалась возрастала относительно показателя в предыдущей группе. Окончание лечения сопровождалось снижением количества ДК на 11,9%. Средняя концентрация ТК была выше, чем у лиц, получавших ОФР (р<0,05). Содержание ОШ возрастало на 10,7%. Применение НФР на фоне полихимиотерапии сопровождалось тенденцией к уменьшению показателя 2а), величин Б/ОЛ, 1тах/ОЛ, содержания молекулярных продуктов ПОЛ.
Необходимо отметить, что, кроме корригирующего влияния на про- и антиоксидантное звено гомеостаза, ОФР способствовал нормализации других биохимических показателей [4], что не было отмечено в 1 и во 2 группах сравнения. Детоксицирующее действие озона, улучшение на фоне его введения функции печени представлено и в работах других исследователей [2]. В частности в литературе
представлено наблюдение о добавления парентеральной озонотерапии к стандартному лечению у пациентов с дисфункцией печени, вторичной по отношению к механической желтухе, связанной с раком. Применение озонотерапии способствовало более быстрому купированию печеночной дисфункции и эндогенной интоксикации [6]
Сочетанное использование ОФР и полихимиотерапии способствовало нормализация количества CD95-положительных мононуклеарных клеток. Стандартная полихимиотерапия или ее сочетание с НФР не сопровождалась статистически достоверными изменениями относительного содержания CD95-положительных клеток (табл. 5)
Кроме того, применение ОФР способствовало статистически достоверному повышению относительного содержания CD50+, HLA-I+ клеток, CD71 мононуклеарных клеток периферической крови. В 1 и 2 группах сравнения подобные изменения в уровне тестированных клеток не наблюдались
У больных, получавших ОФР, после курсов лечения наблюдалось достоверное снижение уровня растворимых молекул CD95 и нормализация уровня растворимых молекул НЬА I класса. В группах сравнения уровень растворимых CD95 молекул до начала лечения и после его окончания статистически достоверно не изменялся, концентрации растворимых молекул sHLA-I после лечения возрастала, статистически достоверно превышала уровень, характерный для больных, получивших озонотерапию и цитостатики (р<0,05), и было выше нормы. Достоверных изменений уровней sCD50 молекул и sCD38 молекул после лечения во всех исследованных группах больных не наблюдалось
Использование ОФР на фоне курсов полихимиотерапии сопровождалось увеличением сывороточной концентрации цинка на 11,4% (р<0,05), снижением уровня меди, тенденцией к повышению содержания железа. У больных 1 группы сравнения наблюдалось достоверное увеличение уровня железа (р<0,05) и прослеживалась тенденция к повышению концентрации меди, содержание меди было значительно выше (р<0,05), чем в случаях использования ОФР. В анализе крови женщин 2 группы сравнения содержание меди достоверно не изменялось, а концентрация железа возрастала (р<0,05)
Обсуждение
Развитие РМЖ сопровождалось интенсификацей процессов липопероксидации на фоне повышения активности антиоксидантной системы защиты, недостаточного, чтобы полностью компенсировать возросший уровень свободно-радикального окисления.
Выявлены изменения структуры популяции мононуклеарных клеток и повышение сывороточного уровня исследованных растворимых молекул, свидетельствовавшие о том, что иммунная система больных раком молочной железы достаточно сохранна и, наряду с депрессией некоторых ее компонентов, носит черты активации. Но такие изменения не указывают на увеличение потенциальных возможностей организма к сохранению гомеостаза и не являются физиологическими. Одновременно с активацией компонентов иммунной системы, осуществляющих противоопухолевую защиту, имело место повышение уровня компонентов, способствующих развитию опухоли, что проявлялось достоверным
увеличением СЭ95+ и снижением СВ71+мононуклеарных клеток. У больных РМЖ была выявлена количественная модификация сывороточного содержания растворимых форм молекул СБ38, СБ95, ИЬЛ I класса. Вероятно, причиной такого явления может быть непосредственное вмешательство в продукцию растворимых белков опухолевых клеток.
РМЖ сопровождается значительными нарушениями обмена цинка, меди, железа. Вероятно, дефицит этих микроэлементов не сопутствует заболеванию, а является одним из патогенетических механизмов опухолевого роста, поскольку микроэлементы играют важную роль в процессах пролиферации, дифференцировки, апоптоза опухолевых и нормальных клеток, оказывают регулирующее влияние на функции иммунной и антиоксидантной систем [10]. Во всех перечисленных процессах действие микроэлементов реализуется за счет их участия в составе активных центров ферментов, индуцировании синтеза металлотионеинов и металлопротеиназ, выполнения кофакторных функций в нуклеопротеинах, транскриптационных факторах, онкобелках.
Малигнизированные клетки перестраивают метаболизм эссенциальных микроэлементов таким образом, чтобы при их дефиците в нормальных тканях имело место увеличение концентрации металла в опухоли. Проведенные авторами экспериментальные исследования подтверждают перераспределение концентраций микроэлементов в крови, опухоли, нормальных тканях у опухоленосителей [11]
В образцах крови пациенток, завершивших курсы полихимиотерапии, была выявлена активация процессов липопероксидации. Наблюдавшееся на протяжении курсов полихимиотерапии, сохранение достаточно высокого уровня активации компонентов антиоксидантной системы не отражало увеличения собственных компенсаторных возможностей организма. Нарастание дисбаланса прооксидантных и антиоксидантных механизмов гомеостаза на фоне химио-лучевого лечения усугубляло пероксидный стресс. Прослеживалось иммунодепрессивное действие химиопрепаратов в иммунограммах больных, получавших курсы полихимиотерапии. Использование цитостатиков сопровождалось металлодепрессивным эффектом, наиболее выраженным в отношении концентрации цинка, что может быть обусловлено не только интоксикацией (угнетение аппетита и малое поступление микроэлемента с пищей), но и эндогенными нарушениями, связанными с токсическими эффектами цитостатиков, приводящими к дизрегуляции обмена металлов на уровне целого организма.
Использование ОФР в сочетании с химиотерапией, наряду с улучшением общего состояния пациентов и уменьшения выраженности симптомов интоксикации, способствовало увеличению показателей трехлетней выживаемости пациенток. В литературе приводятся описания подобного влияния озонотерапии на выживаемость пациентов некоторыми злокачественными новообразованиями [7-9]. Авторы связывают эффекты озонотерапии не только с антиоксидантным и иммуномодулирующим эффектами, но и с обеспечением адекватной оксигенации тканей. Она осуществляется через несколько механизмов: уменьшения сродства гемоглобина к кислороду и увеличения доставки 02 к тканям, в том числе
периферическим, улучшения гибкости мембран эритроцитов и реологических свойств крови, снижения вязкости крови, индуцирования продукции оксида азота эндотелиальными клетками сосудов, за счет этого расширение сосудов на уровне микроциркуляции и увеличения кровотока. Снижение уровня тканевой гипоксии обеспечивает лучшие условия для доставки в пораженные органы антибиотиков и противоопухолевых препаратов [12]. Некоторые исследователи считают, что за счет сокращения продукции фактора НШ-1А, регулирующего химио- и радиорезистантность опухолей, на фоне использования озонотерапии возможно уменьшить эффективные дозы химиотерапии без потери лечебного эффекта и со снижением токсичности проводимого лечения [13]. Следует отметить, что эффекты ОФР на антиоксидантную, иммунную системы больных, обмен микроэлементов были во многом индивидуальны и взаимосвязаны с исходным статусом пациенток, определяемом, в том числе, стадией заболеваемости и степенью распространенности опухолевого процесса. Некоторые авторы также указывают на существование зависимости эффекта озонотерапии от пациента, что соответствует концепции «тенденции к регулирующему эффекту». Эта обратная взаимосвязь с исходным статусом такая же, как и в отношении оксигенации тканей в опухолях [14]. Последняя заключается в том, что озон имеет тенденцию улучшать способности ауторегуляции за счет перераспределения кровотока из тканей, которые хорошо васкуляризированы (или оксигенированы), в другие ткани, где данные механизмы работают хуже. У пациенток, принимавших только цитостатические препараты, по мере проведения курсов специфического лечения нарастали проявления симптомокомплекса усталости от химиотерапии. Применение НФР на частоту развития неблагоприятных побочных эффектов химиопрепаратов существенным образом не влияло.
Включение ОФР в состав комплексного лечения способствовало адекватному повышению активности антиоксидантной системы защиты. За счет образования озонидов и прямого метаболического действия ОФР, активирующих ферменты, блокирующих перекисии и свободные радикалы на начальных этапах их образования, повышающие эффективность систем детоксикации было достигнуто улучшение качества жизни больных. В этой группе наблюдалось снижение частоты развития диспепсических и гематологических осложнений (анемии, лейкопении), простудных заболеваний или обострения очагов хронической инфекции после курса лечения и других побочных эффектов химиопрепаратов. Полученный эффект ОФР соответствовал результатам исследований других авторов [15-19] и свидетельствовал о возможности компенсаторной мобилизации эндогенных антиоксидантов из депо и активации дополнительных звеньев антиоксидантной системы.
Применение ОФР в сочетании с полихимиотерапией вызывало уменьшение относительного содержания CD95+ мононуклеарных клеток периферической крови. Экспрессия CD95 антигена на мембране клеток приводит к потенциальной готовности последних к реализации апоптоза, в том числе к обеспечению инициации Fas-зависимого апоптоза, и может вызвать снижение количества активированных иммунокомпетентных клеток, в том числе активированных Т-лимфоцитов. ОФР, оказывая модифицирующее действие на содержание
потенциально способных к инициации апоптоза иммунокомпетентных клеток, обеспечивал условия для сохранения популяции эффекторных клеток, необходимых для реализации противоопухолевого клеточного иммунитета. Клинически данная схема лечения сопровождалась менее частыми рецидивами и более частыми выходами в ремиссию, чем стандартная полихимиотерапия [20]. В обеих группах сравнения после курса терапии не наблюдалось достоверного уменьшения количества CD95+ клеток, была зарегистрирована только тенденция к их снижению.
Одновременно у больных РМЖ на фоне цитостатиков и ОФР наблюдались изменения уровней CD50+ и CD71+ мононуклеарных клеток. Мембранный CD50 белок (ICAM-1) участвует в инициации иммунного ответа на стадии формировании адгезивных взаимодействий между клетками и образования иммунного синапса. Повышение числа CD50+ клеток в крови больных под воздействием ОФР свидетельствует о его влиянии на этап инициации адаптивного противоопухолевого иммунного ответа [20]. Результатом такого воздействия является увеличение количества активированных лимфоцитов, что отражается в повышении уровня CD71+ клеток. CD71 белок является рецептором трансферрина на клетках и служит активационным маркером лимфоцитов или активационным антигеном, появляясь на поверхности клетки в результате ее активации [21]. Следует отметить, что различия в направленности изменений экспрессии активационных белков CD71 и CD95, вероятно, обусловлены специфическим характером действия ОФР, приводящим и к активации иммунной системы, и к ограничению Fas-зависимой инициации апоптоза иммунокомпетентных клеток. Подтверждением этому служит достоверно меньшая частота встречаемости лейкопений (16,7% случаев II-III степени тяжести) у пациенток, получавших ОФР в сочетании с химиотерапией. В 1 группе сравнения лейкопения II-III степени тяжести после курса лечения была зарегистрирована в 46,3% случаев (р=0,001), во 2 группе сравнения, лейкопения II-III степени была выявлена в 46,6% наблюдений (р=0,02) [4]. В литературе имеются данные о том, что озониды могут косвенно стимулировать выработку лейкоцитов и повышать их активность [22].
Снижение уровня растворимых CD95 молекул после курсов лечения с использованием ОФР (р<0,05 с показателями в группах сравнения) свидетельствует о более выраженной нормализации их сывороточного содержания, что клинически ассоциировалось со статистически достоверно более высоким показателем трехлетней выживаемости. Значимое снижение сывороточного уровня растворимых молекул HLA I класса при использовании ОФР является звеном механизма нормализации апоптотических процессов, касающихся активированных Т-клеток [20]. В результате применения ОФР происходило перераспределение микроэлементов в организме пациенток. В образцах крови наблюдалось повышение содержания цинка, возможно, за счет выхода его из тканевых депо. Усиленное поступление цинка в кровоток может быть обусловлено и активным разрушением опухолевых клеток под действием терапии. Снижение концентрации меди (р<0,05) в этой группе, по-видимому, связано с повышением ее утилизации и увеличением синтеза цитохромоксидазы и других медьсодержащих ферментов.
Преимущественное увеличение содержания железа в плазме крови пациенток 1 и 2 групп сравнения после курса лечения, вероятно, связано с усилением преждевременного гемолиза эритроцитов на фоне полихимиотерапии. У больных, получавших ОФР в составе комплексной терапии, подобное явление удавалось уменьшить за счет улучшения физико-химических свойств мембран эритроцитов. Изменения обмена микроэлементов под действием ОФР, выявленные авторами в клинике, подтверждены экспериментальными данными [11]
Заключение
Использование озонированного физиологического раствора в сочетании с цитостатиками оптимизировало функционирование антиоксидантной системы организма, оказывало положительное влияние на обмен микроэлементов, сопровождалось изменениями, свидетельствующими о коррекции механизмов инициации программированной гибели эффекторных клеток иммунной системы, что приводило к нормализации клеточного противоопухолевого иммунитета. Этот вид лечебного воздействия не является альтернативой традиционному противоопухолевому лечению, но способен повышать эффективность цитостатической терапии на фоне снижения ее токсичности. Не имея собственных побочных эффектов, озонированный физиологический раствор хорошо переносился больными и не снижал противоопухолевую эффективность цитостатиков. Комплексность лечебного воздействия на различные системы организма, оказываемая озонированным физиологическим раствором, позволяет считать его средством метаболической реабилитации пациентов, повышающим адаптационно-приспособительные способности организма.
Список литературы
1. Шаназаров Н.А., Лисовская Н.Ю., Лисовский Е.В., Шакирова А.Ф. Возможности метода озонотерапии в реабилитации онкологических пациентов. // Научное обозрение. Медицинские науки. - 2016. - №2. - С. 113-119.
2. Конторщикова К.Н. Перекисное окисление липидов при коррекции гипоксических нарушений физико-химическими факторами: Автореф. дис.... д.б.н./ К.Н. Конторщикова. - Н.Новгород, 1992. Доступно по: https://dlib.rsl.ru/viewer/01000304588 Ссылка активна на 20.08.2020
3. Алясова А.В. Клинико-нейрофизиологическая и нейро-иммунологическая характеристика больных раком молочной железы: Автореф. дис... д-ра мед. наук- Иваново, 2004. Доступно по: https://new-disser.ru/_avtoreferats/01004061084.pdf. Ссылка активна на 20.08.2020
4. Алясова А.В., Конторщикова К.Н., Шахов Б.Е. Озоновые технологии в лечении злокачественных опухолей. - Н.Новгород: НижГМА, 2006.
5. Новиков В.В., Алясова А.В., Уткин О.В. и др. Растворимые CD38 и CD95 антигены при раке молочной железы.//Российский биотерапевтический журнал. — 2005. — № 3. — С.46-51.
6. Parkhisenko I. A., Bil'chenko S. V. The ozone therapy in patients with mechanical jaundice of tumorous genesis. Vestnik khirurgii imeni I. I. Grekova. 2003; vol. 162 (5); 85-87.
7. Clavo B, Santana-Rodriguez N, Llontop P, Gutierrez D, Ceballos D, Mendez C, et al. Ozone Therapy in the Management of Persistent Radiation-Induced Rectal Bleeding in Prostate Cancer Patients. Evidence-based complementary and alternative medicine: eCAM. 2015; 2015:480369.
8. Clavo B, Ana R, Marta L, Laura L,Gerardo S, David M, Victor R, Maria AH, Roberto M, Santiago Q, José MC, Francisco R: Adjuvant Ozonetherapy in Advanced Head and Neck Tumors: A Comparative Study. Evid Based Complement Alternat Med. 2004;1(3):321- 25.
9. Luongo M, Brigida AL, Mascolo L, Gaudino G. Possible Therapeutic Effects of Ozone Mixture on Hypoxia in Tumor Development. Anticancer Res. 2017 Feb; 37 (2):425-435.
10. Скальный А.В. Микроэлементозы человека (диагностика и лечение): Практическое руководство для врачей и студентов медицинских вузов - М., 1997.
11. Диплом на открытие № 420 от 19/10/11. Алясова А.В, Конторщикова К.Н., Цыбусов С.Н и др. Явление снижения металлодепрессивного действия противоопухолевых препаратов на организм человека и животных под действием низких терапевтических доз озонированного физиологического раствора. Доступно по: https://cyberleninka.ru/article. Ссылка активна на 20.08.2020
12. Schulz S, Haussler U, Mandic R et all. Treatment with ozone/oxygen-pneumoperitoneum results in complete remission of rabbit squamous cell carcinomas. Intl Cancer. 2008; 122: 2360-2367.
13. Delgado-Roche L, Hernandez-Matos Y, Medina EA et all. Ozone-Oxidative Preconditioning Prevents Doxorubicin-induced Cardiotoxicity in Sprague-Dawley Rats. Sultan Qaboos University Med J. 2014; 14:342-348.
14. Clavo B., Pérez J. L., López L. and all. Ozone Therapy for Tumor Oxygenation: a Pilot Study. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2004; vol. 1:93-98; Article ID437019
15. Масленников О.В., Конторщикова К.Н., Шахов Б.Е. Руководство по озонотерапии.- Н.Новгород: Изд-во НГМА, 2012.
16. Clavo B., Santana-Rodríguez N., Llontop P., Rodríguez-Esparragón F.J. Ozone Therapy as Adjuvant for Cancer Treatment: Is Further Research Warranted? Evidence-based Complementary and Alternative Medicine. 2018(35): 1-11. DOI: 10.1155/2018/7931849
17. Khatri I., Moger G., Kumar N.A. Evaluation of effect of topical ozonetherapy on salivary Candidal carriage in oral candidiasis. Indian J. Dent. Res. 2015(Mar-Apr); 26(2):158-62.
18. Sycheva E.I., Khodasevich L.S., Solomina O.E., Zubareva M.I. The in fluence of ozonetherapy on oxygen metabolism kinetics and the microcirculation system during spa and resort treatment of the post-infarction patients. Vopr Kurortol Fizioter Lech Fiz Kult. 2013 (Nov-Dec); 6:9-13.
19. Zhang J., Guan M., Xie C., Luo X., Zhang Q., Xue Y. Increased growth factors play a role in wound healing promoted by noninvasive oxygen-ozonetherapy in diabetic patients with foot ulcers. Oxid Med Cell Longev. 2014; 2014:273475.
20. Диплом на открытие №330 от 09/07/2007. Алясова, А.В. Конторщикова К.Н., Новиков В.В. и др. Закономерность изменения сывороточного уровня
растворимого FAS антигена и количества FAS+ мононуклеарных клеток периферической крови организма человека под действием низких терапевтических доз озона. Доступно по: https://cyberleninka.ru/article. Ссылка активна на 20.08.2020
21. Летягин В.П., Высоцкая И.В., Легков А.А. и др. Лечение доброкачественных и злокачественных заболеваний молочной железы. М, 1997.
22. Bleijs, D.A. DC-SIGN and LFA-1: a battle for ligand / D.A. Bleijs, T.B. Geijtenbeek, C.G. Figdor. TRENDS in Immunology, 2001; 22(8):457- 463.
