CC BY
86
ВЕТЕРИНАРИЯ И ЗООТЕХНИЯ
УДК 636.085.16
ВЛИЯНИЕ ВЫПАИВАНИЯ ПРОБИОТИКА ТЕТРАЛАКТОБАКТЕРИНА НА МОРФО-БИОХИМИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ КРОВИ И МИКРОБИОЦЕНОЗ
ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА У ТЕЛЯТ
ЕВ. КРАПИВИНА, Б.В. ТАРАКАНОВ Е.А. МАСЛЕНАЯ, Е.А. КРИВОПУШКИНА, Д.В. ИВАНОВ
ФГОУ ВПО «Брянская государственная сельскохозяйственная академия» «Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания
сельскохозяйственных животных»
ВВЕДЕНИЕ
Основные функции нормальной микрофлоры заключаются в обеспечении колонизационной резистентности открытых полостей организма за счет антагонистической и иммуномодулирующей активности, детоксикационной, синтетической, пищеварительной и антиканцерогенной функции (В.М. Бондаренко, В.Г.Лиходед, 2007). Обеспечение эффективной защиты сельскохозяйственных животных от болезней было и остается одной из главных задач ветеринарной науки и практики. В условиях неблагополучной экологии, технологических стрессов у животных нарушается микробиоценоз кишечника, снижается активность защитных механизмов организма (уровень естественной резистентности и иммунный статус), что способствует возникновению незаразных и заразных заболеваний, снижению продуктивности. Поэтому разработка средств, повышающих устойчивость животных к неблагоприятным условиям среды, и заболеваниям является актуальной проблемой.
Определение уровня естественных защитных сил животных и широкое использование их показателей в селекционной работе дает возможность создавать в хозяйствах высокорезистентные стада, обеспечивающие высокий уровень продуктивности (И.Ф.Горлов, 1987).
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Опыт был проведен в учебно-опытном хозяйстве «Кокино» Выгоничского района Брянской области. Для проведения исследований по методу пар-аналогов было отобрано 2 группы телят по 5 голов в каждой группе (1 группа - контрольная, 2 - опытная). Телята
опытной группы с 1 по 15 суточный возраст получали по 20 мл на голову пробиотика «Тетралактобактерин». Телята содержались в соответствующих ветеринарно-зоогигиеническим требованиям условиях, получали молозиво, а затем молоко в соответствии с общепринятыми нормами (А.П. Калашников и др., 2003). Кровь для исследований брали из яремной вены утром до кормления в 1- и 15-суточном возрасте. Количество лейкоцитов и эритроцитов в крови подсчитывали в камере Горяева, лейкоцитарную формулу - в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимза (на трех стеклах, по 600 клеток на каждом, используя трехпольный метод Филипченко). Гемоглобин определяли гемиглобинцианидным методом, СОЭ - в аппарате Панченкова,, гематокрит в гематокритной центрифуге. Анализ качественного и количественного состава микробиоты толстого кишечника проводился в ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Брянской области».
Полученные цифровые данные обработаны методом вариационной статистики. Для выявления статистически значимых различий использован критерий Стьюдента-Фишера по Н. А. Плохинскому (1961). В качестве значений физиологической нормы принимали интервалы соответствующих показателей, приведенные в литературе (Чумаченко В.Е., Высоцкий А.М., Сердюк Н.А., Чумаченко В.В., 1990; И.П. Кондрахин и др., 2004; А.Г.Малахов, Р.Х. Кармолиев, А.Г. Савойский и др, 1986; И.М.Карпуть, 1986;)
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Количественный анализ микробиоценоза толстого кишечника (табл. 1) показал, что у 15-суточных телят контрольной группы было снижено (на порядок) относительно нормы содержание лактобактерий и бифидобактерий, количествво типичных эшерихий и энтерококков соответствовало нормативным значениям. Кроме того, в содержимом толстого кишечника у всех телят контрольной группы были обнаружены в повышенном количестве (на 1 -3 порядка) условно-патогенные факультативно-анаэробные энтеробактерии рода Citrobakter, которые при определенных условиях могут вызвать воспалительный процесс.
У телят, которым 15 суток выпаивали тетралактобактерин, установлена тенденция к повышению содержания лактобактерий в содержимом толстого кишечника на 6,60%, снижению уровня энтерококков на 11,17 % и достоверно значимое увеличение числа бифидобактерий (на 18,56 %) до нормативных значений. На уровень типичных эшерихий в содержимом толстого кишечника тетралактобактерин не оказал существенного влияния. Следует отметить отсутствие в содержимом толстого кишечника у всех телят опытной группы энтеробактерий рода Citrobakter. При этом у одного теленка опытной группы было
обнаружено повышенное количество Pr. vulgaris, которые как и цитробактерии могут выделять энтеротоксины.
Следовательно, выпаивание тетралактобактерина телятам с рождения до 15 суточного возраста способствовало оптимизации микробиоценоза толстого кишечника и, в частности, обусловило достоверно значимое повышение числа бифидобактерий.
Таблица 1 - Количественное содержание различных представителей микробиоценоза толстого кишечника у телят через 15 суток выпаивания препарата, КОЕ ^г / частота выделения, %
Наименование микроорганизмов 1 группа (контрольная) , n=3 2 группа (+ 20 мл/гол в сутки препарата) , n=3
Бифидобактерии 9,00±0,0/Ш0 10,67±0,33*/100
Лактобактерии 5,00±0,0/Ш0 5,33±0,33/100
Эшерихии: типичные 7,00±0,0/Ш0 7,00±0,0/Ш0
лактозонегативные 0±0 0±0
гемолитические 0±0 0±0
Патогенные энтеробактерии 0±0 0±0
Бактерии рода Протея (Prot. vulgaris) 0±0 2.00±2.00/33,33
Другие условно-патогенные энтеробактерии (Citrobacter) 6,00±0,58/Ш0 5,33±0,33/100
Энтерококки 6,00±0,58/Ш0 5,33±0,33/100
Стафилококк золотистый 0±0 0±0
Коагулазанегативный стафилококк 0±0 0±0
Клостридии 0±0 0±0
Грибы рода Кандида 0±0 0±0
Дрожжеподобные грибы 0±0 0±0
Неферментирующие бактерии 0±0 0±0
Примечание: здесь и далее - * - Р<0,05 по отношению к контрольной группе.
При анализе динамики показателей гемограммы подопытных животных (табл. 2) установлено, что содержание лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина в них, гематокрит и СОЭ соответствовали нормативным значениям в оба исследованных периода. Выпаивание телятам тетралактобактерина не оказало влияния на эти показатели. Относительное количество палочкоядерных нейтрофилов в первые сутки жизни в крови у телят соответствовало физиологической норме, через 15 суток у телят контрольной группы оно
резко снизилось (на 52,03 %, Р<0,05), а у животных опытной группы - практически не изменилось, что указывает на сохранившуюся высокую активность костномозгового нейтрофильного гранулоцитопоэза. Количество сегментоядерных нейтрофилов в первые сутки жизни у телят было ниже нормативных значений, которые находятся в интервале 46-64 %. Через 15 суток уровень этих клеток в крови у телят обеих групп существенно не изменился и стал соответствовать возрастной норме (24-62 %).
Таблица 2
Морфо-биохимические характеристики крови подопытных телят
Показатели Перед началом опыта, n=15 Через 15 суток
1 группа, n=5 2 группа, n=5
Гемоглобин, г/л 103,87±5,73 112,6±4,12 122,80±6,70
Эритроциты, 10 /л 6,90±0,36 8,46±0,43 8,38±0,33
Лейкоциты, 109/л 8,56±0,56 10,94±1,05 10,00±1,20
Палочкоядерные нейтрофилы, % 10,86±1,33 5,21±0,42* 10,20±2,26
Сегментоядерные нейтрофилы, % 31,70±2,59 30,23±1,78 34,97±2,42
Сумма нейтрофилов, % 40,59±3,70 35,43±2,08 45,16±4,35
Сумма нейтрофилов, 109/л 3,54±0,41 3,93±0,57 4,72±1,09
Эозинофилы, % 0,67±0,22 0,25±0,17 0,03±0,02*
Базофилы, % 0,29±0,08 0,54±0,27 0,22±0,12
Моноциты, % 3,05±0,51 3,00±0,55 1,96±0,61
Лимфоциты, % 54,28±3,51 61,00±2,31 52,30±4,22
Лимфоциты, 109/л 4,57±0,36 6,61±0,47* 5,04±0,25*
Гематокрит, % 35,73±1,95 37,60±1,94 39,20±2,27
СОЭ, мм/час 0,9±0,05 0,80±0,12 0,80±0,12
Примечание: здесь и далее • - Р<0,05 по отношению к предыдущему исследованию.
Относительное содержание эозинофилов в крови 1 -суточных телят соответствовало нормативным значениям, а через 15 суток снизилось, особенно значительно у телят опытной группы (на 95,52 %, Р<0,05) до нижних границ физиологической нормы, что указывает на более высокую активацию коры надпочечников у животных, получавших тетралактобактерин (В.С.Бузлама, 1996, Г.И.Козинец и В.А.Макаров, 1997).
Количество базофилов в крови у 1 -суточных телят превышало возрастную норму (0-0,1 %) более чем в два раза и составляло 0,29±0,08 %. Через 15 суток у телят подопытных групп отмечены противоположно направленные тенденции: в крови у телят контрольной группы - увеличение их числа на 86,21 %, а у опытной - снижение на 24,14 %, что косвенно свидетельствует о снижении функциональной активности щитовидной железы у первых и о её повышении у вторых (Кудрявцев А.А., Кудрявцева Л.А.
Клиническая гематология животных. М.: Колос, 1974.- 399 с.; Исследование системы крови в клинической практике / Под ред. Г.И.Козинца и В.А. Макарова.- М.: Триада-Х, 1998.- 480 с. Мышкин, К.И. Базофильные лейкоциты [Текст] / К.И. Мышкин. - Саратов, 1979. - 125с.).
Уровень моноцитов в крови у телят подопытных групп несколько превышал нормативные значения и в исследованные периоды существенно не различался.
Относительное количество лимфоцитов в крови у телят подопытных групп в исследованные периоды существенно не различалось и не выходило за пределы нормативных значений. Абсолютное количество лимфоцитов в крови у телят контрольной группы через 15 суток по сравнению с 1-суточными значительно увеличилось (на 44,64 %, Р<0,05), а у опытных отмечена лишь тенденция к повышению (на 10,28 %). При этом содержание лимфоцитов в крови у 15-суточных телят контрольной группы было выше нормативных значений, а у опытной группы - соответствовало им и было достоверно ниже, чем у контрольных (на 23,75 %). Это свидетельствует о менее высокой антигенной нагрузке (К.А.Лебедев, И.Д.Понякина, 1990) на организм телят опытной группы, о более его благополучном состоянии.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Выпаивание по 20 мл на голову в сутки тетралактобактерина телятам с рождения до 15 суточного возраста способствовало оптимизации микробиоценоза толстого кишечника, на что указывает тенденция к повышению содержания лактобактерий в содержимом толстого кишечника, снижению уровня энтерококков и достоверно значимое увеличение числа бифидобактерий до нормативных значений при отсутствии в содержимом толстого кишечника у всех телят опытной группы энтеробактерий рода Citrobakter, обнаруженных у всех телят контрольной группы, которые при определенных условиях могут вызывать воспалительный процесс.
Оптимизация микробиоценоза толстого кишечника телят обусловила ряд положительных эффектов в организме, что нашло свое отражение в лейкограмме, так как известно, что кровь - зеркало гомеостаза.
Установлено, что через 15 суток применения пробиотика у животных опытной группы сохранилась высокая активность костномозгового нейтрофильного гранулоцитопоэза, на что указывает отсутствие снижения числа палочкоядерных нейтрофилов в лейкограмме, обнаруженное у телят опытной группы. Кроме того, у этих телят повысилась функциональная активность коры надпочечников и щитовидной железы, о чем косвенно свидетельствует снижение содержания эозинофилов и базофилов
(соответственно) в лейкограмме. При этом состояние организма у телят, получавших пробиотик, было более благополучным, с меньшей антигенной нагрузкой, на что указывает соответствующее нормативным значениям содержание лимфоцитов в лейкограмме, в то время как у контрольных телят их количество было выше нормы.
ВЫВОДЫ
Выпаивание по 20 мл на голову в сутки тетралактобактерина телятам с рождения до 15 суточного возраста способствовало оптимизации микробиоценоза толстого кишечника, сохранению высокой активности костномозгового нейтрофильного гранулоцитопоэза, повышению функциональной активности коры надпочечников и щитовидной железы, а также повышению барьерной функции энтероцитов.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Бондаренко В.М., Лиходед В.Г. Микробиологическая диагностика дисбактериоза кишечника, Москва, ГУ НИИЭМ им. Гамалеи РАМН, 2007. -66 с.
2. Горлов И.Ф. Определение естественной резистентности у животных / Ветеринария, 1987. - № 10.- С. 22-25.
3. Нормы и рационы кормления с.-х. животных. Справочное пособие. Издание переработанное и дополненное. / Под ред. Калашникова А.П. и др. Москва, 2003.- 456 с.
4. Плохинский Н.А. Биометрия. Из-во Сибирского отделения АН СССР, Новосибирск, 1961. - 362 с.
5. Чумаченко В.Е., Высоцкий A.M., Сердюк Н.А., Чумаченко В.В. Определение естественной резистентности и обмена веществ у сельскохозяйственных животных.- Киев: Урожай, 1990.- 136 с.
6. Методы ветеринарно-клинической лабораторной диагностики: Справочник / И.П. Кондрахин, А.В. Архипов, В.И. Левченко и др.; Под ред. И.П. Кондрахина. - М.: КолосС., 2004. - 520 с.,
7. Нормативы биохимических показателей обмена веществ в организме крупного рогатого скота / А.Г.Малахов, Р.Х. Кармолиев, А.Г. Савойский и др.: Под ред. А.Г. Малахова. - М.: МВА, 1986. - 28 с.
8. Карпуть И.М. Гематологический атлас сельскохозяйственных животных.-Мн.: Ураджай, 1986.- 183 с.
9. Бузлама, В.С. Общая резистентность животных при стрессе и ее регуляция адаптогенами. Доклады Россельхозакадемии, 1996.- № 1.- С.36-38.
10. Кудрявцев А.А., Кудрявцева Л.А. Клиническая гематология животных. М.: Колос, 1974.- 399 с.
11. Исследование системы крови в клинической практике. / Под ред. Г.И.Козинца и В.А. Макарова.- М.: Триада-Х, 1998.- 480 с.
12. Мышкин К.И. Базофильные лейкоциты - Саратов, 1979. - 125с.
13. Лебедев К.А., Понякина И.Д. Иммунограмма в клинической практике. - М.: Наука, 1990.- 224 с.
EFFECT OF WATERING PROBIOTIC TETRALAKTOBAKTERIN ON MORPHO-BIOCHEMICAL CHARACTERISTICS OF BLOOD AND LARGE INTESTINE MICROBIOCENOSIS OF CALVES
E.V. KRAPIVINA, B.V. TARAKANOV, E.A. MASLENAYA, E.A.
KRIVOPUSHKINA, D.V. IVANOV
Bryansk State Agricultural Academy "All-Russian Scientific Research Institute of Physiology, Biochemistry and Nutrition of Farm Animals"
SUMMARY
Watering of 20 ml per head per day tetralaktobakterin to calves from birth to 15 day age contributed to the optimization of large intestine microbiocenosis, the preservation of high activity of bone marrow neutrophil granulocytopoiesis, increase the functional activity of the adrenal cortex and thyroid gland and to enhance the barrier function of enterocytes.
