CC BY
57
УДК 636.22/.28.087.8:636.22/.28.083.37
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗО ВАНИЯ ПРОБИОТИКА «ПРОВАГЕН» И КОМПЛЕКСА ЭТОГО ПРОБИОТИКА С ХИТОЗАНОМ ПРИ ВЫРАЩИВАНИИ ТЕЛЯТ
Е.В. КРАПИВИНА, Д.В. ИВАНОВ, Е.А. КРИВОПУШКИНА, Г.Н. БОБКОВА ФГБОУ ВПО «Брянская государственная сельскохозяйственная академия»
Ежедневное выпаивание в течение 7 суток 1 - 1,5-месячным телятам пробиотика «Проваген» (14 г/голову) и комплекса этого пробиотика (14 г/голову) с хитозаном (0,8 г/голову) обусловило увеличение общего белка в сыворотке крови. Добавка хятозана к про-биотику способствовала повышению уровня гуморальной защиты организма телят за счет повышения уровня гамма-глобулинов в сыворотке крови. При этом у животных отмечена тенденция к оптимизации микробиоценоза толстого кишечника, о чем свидетельствует повышение уровня типичных эшерихий в содержимом.
Выпаивание удвоенных доз этих препаратов в течение 7 суток 1 - 1,5-месячным телятам не оказало существенного влияния на уровень общего белка и его фракций в сыворотке крови, но также обусловило тенденцию к оптимизации микробиоценоза толстого кишечника за счет повышения уровня типичных эшерихий в содержимом. Кроме того, введение телятам вместе с пробиотиком хитозана способствовало снижению количества клостридий в содержимом толстого кишечника.
Микробиоценоз кишечника - чрезвычайно важная система организма, выполняющая или регулирующая его функции по поддержанию гомеостаза [1]. Широкое применение в ветеринарии антибиотиков привело к селекции и распространению в природе антибиотикоре-зистентных и атипичных штаммов микроорганизмов, в том числе и с повьпненным патогенным потенциалом, нарушению колонизационной резистентности кишечника [2]. Для профилактики негативных процессов в организме животных применяют про- и пребиотики. Большой интерес представляют бактерии рода Bacillus, которые рассматриваются как транзитор-ные формы микроорганизмов в кишечнике, и, тем не менее, применяются во многих кормовых пробиотических препаратах, реально оказывая положительное влияние на здоровье и продуктивность животных. Установлено, что использование пробиотика с Bacillus Subtilis вызвало повышение общего белка, и альбуминов, а также обусловило тенденцию к снижению билирубина в сыворотке крови свиней [3]. «Проваген» относится к спорообразующим пробиотикам нового поколения. В его состав входят пробиотические штаммы сапрофитных бактерий В.subtilis и B.licheniformis (109 КОЕ/г), которые обладают высокими антагонисти-
ческими свойствами и эффективностью в отношении почти 90% условно-патогенных кишечных бактерий и грибковой флоры, вырабатывая до 70 видов антибиотических веществ различных групп, безвредных для микроорганизма, и полезной микрофлоры. Положительное воздействие на организм свиней пробиотика «Проваген» показано в работе И.В. Елизарова [4]. а комплекса этого пробиотика с пребиотиками на качество инкубационных яиц уток М.Г. Масловым и др. [5].
Целью наших исследований было изучение влияния выпаивания телятам разных доз пробиотика «проваген» и комплекса этого пробиотика с хитозаном на морфо-биохимические показатели гомеостаза и микробиоценоз толстого кишечника.
Материалы и методы исследований. Для достижения поставленной цели были проведены 2 эксперимента. Для проведения 1 научно-хозяйственного опыта на МТФ СПК Агрофирма "Культура" с учетом живой массы и интенсивности роста методом парных аналогов были сформированы 3 группы (по 10 голов) телят черно-пестрой породы 1-1,5-месячного возраста: 1 группа - контрольная, 2 и 3 - опытные. Телятам 2 группы ежедневно в течение 7 суток выпаивали пробиотик «Проваген» (14 г/голову), животным 2 группы - комплекс этого пробиотика (14 г/голову) с хитозаном (0,8 г/голову). Для проведения 2 научно-хозяйственного опыта на той же МТФ СПК Агрофирма "Культура" с учетом живой массы и интенсивности роста методом парных аналогов были сформированы 3 группы телят черно-пестрой породы 1-1,5-месячного возраста: 1 группа - контрольная (7 голов), 2 (6 голов) и 3 (7 голов) - опытные. Телятам 2 группы ежедневно в течение 7 суток выпаивали пробиотик «Проваген» (28 г/голову), животным 2 группы - комплекс этого пробиотика (28 г/голову) с хитозаном (1,6 г/голову). Телята содержались в соответствующих ветеринарно-зоогигиеническим требованиям условиях, получали хозяйственный рацион в соответствии с общепринятыми нормами [6]. Пробы крови брали утром до кормления из яремной вены перед началом экспериментов и после выпаивания препаратов у 5 голов из каждой группы. Через 5 суток после окончания выпаивания препаратов у 3 телят из каждой группы брали содержимое прямой кишки для анализа микробиоты. Анализ качественного и количественного состава микробиоты толстого кишечника телят проводился в ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Брянской области».
Для характеристики морфо-биохимичсских показателей гомеостаза у телят количество лейкоцитов и эритроцитов в крови подсчитывали в камере Горяева, гемоглобин определяли ге-миглобинцианидным методом, в сыворотке крови были определены: концентрация общего белка биуретовым методом, содержание белковых фракций нефелометрическим методом [7, 8].
Полученные цифровые данные обработаны методом вариационной статистики. Для выявления статистически значимых различий использован критерий Стьюдента-Фишера по
H. А. Плохинскому [9]. В качестве значений физиологической нормы принимали интервалы соответствующих показателей, приведенные в литературе [8, 10, 11].
Результаты исследований. В результате анализа проб крови животных подопытных групп, использованных в 1 опыте, установлено (табл. 1), что перед началом опыта содержание лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина соответствовало нормативным значениям и но окончании его существенно не изменялось.
Содержание общего белка в сыворотке крови телят всех подопытных групп перед началом опыта соответствовало нижним границам физиологических значений без существенных межгрупповых различий.
У телят 2 группы содержание общего белка в сыворотке крови после выпаивания про-биотика достоверно значимо повышалось на 26,51% по сравнению с начальным периодом и было выше, чем у контрольных на 51,64% (Р<0,05). У животных 3 группы после выпаивания комплекса пробиотика с хитозаном содержание общего белка в сыворотке крови также увеличивалось на 28,86% (Р<0,05) и было выше, чем у контрольных на 33,33% (Р>0,05).
Уровень альбуминов в сыворотке крови телят всех подопытных групп перед началом опыта соответствовал нормативным значениям без существенных межгрупповых различий. После окончания опыта отмечена тенденция к повышению содержания апгьбуминов у телят
I, 2 и 3 групп на 20,47, 44,21 и 25,35% соответственно, то есть, белоксинтезирующая функция печени активизировалась в наибольшей степени у телят, получавших только пробиотик. В динамике альфа-глобулинов сыворотки крови телят подопытных групп отмечены аналогичные изменения.
Таблица 1
Влияние выпаивания телятам пробиотика «Проваген» (14 г/голову) и комплекса этого пробиотика (14 г/голову) с хитозаном (0,8 г/голову) на морфо-биохимические
показатели крови (1 опыт)
Показатели 1 взятие 2 взятие
1 группа 2 группа 3 группа 1 группа 2 группа 3 группа
Эритроциты, 1012/л 8,93 ± 0,4 10,04 ±1,51 8,34 ±0,44 8,88 ± 0,27 8,79 ± 0,59 8,01 ± 0,52
Гемоглобин, г/л 108,43±2,71 110,19±5,58 107,54±0,23 101,18±1,79 113,79=5,50 98,64±1,90
Лейкоциты,107л 9,17 ±0,6 10,29 ±2,48 10,88 ± 1,25 10,32 ± 1,42 8,99 ± 1,04 13,14 ±3,97
Общий белок, г/л 64,10=4.20 66,68=5,58 57,56±7,20 55,63=3,73 84,36±6,31 ** 74,17± 12,27*
Альбумины, г/л 34,29 ± 3,95 41,19 ± 4,31 34,28 ± 5,08 41,31 ±5,02 54,9± 5,15 42,97 ± 7,7
Альфа- глобулины, г/л 8,52 ±2,71 5,13 ±0,8 5,89 ± 1,59 4,2 ± 0,57 10,96 ±2,75 6,75 ± 1,58
Бета-глобулины, г/л 9,01 ± 1,04 9,32 ±0,64 7,46 ±0,98 5,78 ± 2 12,34 ±2,3 10,75 ±2,И
Гамма-глобулины, г/л 12,28 ±2,17 11,04 ± 1,3 9,92 ± 2,69 4,38 ± 1,54А 6,16 ± 1,08 А 13,69 ± 2,88*
Примечания: здесь и далее *- Р< 0,05 к 1 группе, • Р< 0,05 -к 2 гр., А Р< 0,05 - к предыдущему периоду исследований.
Содержание бета-глобулинов в сыворотке крови телят всех подопытных групп перед началом опыта было достаточно высоким без существенных межгрупповых различий. После периода выпаивания препаратов у телят 1 группы отмечена тенденция к снижению уровня белков этой фракции в сыворотке крови на 35,85%, а у животных 2 и 3 групп, напротив, к повышению на 32,40 и 44,10% соответственно.
Количество гамма-глобулинов в сыворотке крови телят подопытных групп перед началом опыта было близко к наиболее высоким физиологическим значениям.
После окончания опыта в крови у животных 1 и 2 групп установлено достоверно значимое снижение уровня белков этой фракции на 64,33 и 44,20% соответственно по сравнению с начальным периодом. У телят 3 группы в этот период отмечена тенденция к повышению содержания гамма-глобулинов в сыворотке крови по сравнению с началом опыта на 38,00%, что привело к достоверному повышению значения этого показателя на 212,56% по сравнению с контролем. Следовательно, выпаивание телятам комплекса пробиотика с хито-заном обусловило повышение уровня гуморальной защиты организма.
Следовательно, выпаивание 1 - 1,5-месячным телятам пробиотика «Проваген» (14 г/голову) и комплекса этого пробиотика (14 г/голову) с хитозаном (0,8 г/голову) обусловило оптимизацию гомеостаза, на что указывает увеличение общего белка в сыворотке крови. Добавка хитозана к пробиотику обусловила повышение уровня гуморальной защиты организма телят за счет повышения уровня гамма-глобулинов в сыворотке крови.
В результате анализа проб крови животных подопытных групп, использованных во 2 опыте, установлено (табл. 2), что содержание лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина соответствовало нормативным значениям, существенною влияния выпаивания удвоенных доз препаратов на эти параметры гомеостаза не обнаружено. Увеличение доз препаратов не оказало ожидаемого эффекта по увеличению в сыворотке крови животных общего белка и его фракций.
Таблица 2
Влияние выпаивания 1 - 1,5-месячным телятам пробиотика «Проваген» (28 г/голову) и комплекса этого пробиотика (28 г/голову) с хитозаном (1,6 г/голову) на морфо-биохимические показатели крови (2 опыт)
Показатели После выпаивания препаратов
1 группа, п=5 2 группа, п=5 3 группа, п=5
Эритроциты, 1012/л 7,78 ±0,3 8,17 ±0,23 8,24 ± 0,26
Гемоглобин, г/л 103,7 ± 1,74 105,04 ± 1,27 108,49 ± 1,72
Лейкоциты, 109/л 10,69 ±1,35 8,60 ±0,13 9,72 ± 0,68
Общий белок, г/л 70,94 ±4,50 64,45 ± 4,24 63,73 ± 3,53
Альбумины, г/л 42,61 ±3,37 38,53 ± 2,93 39,36 ± 1,20
Альфа-глобулины, г/л 5,51 ±0,61 5,39 ±0,56 6,96 ± 1,16
Бета-глобулины, г/л 10,32 ±1,59 10,32 ± 1,59 7,67 ± 0,67
Гамма-глобулины, г/л 13,46 ±3,32 10,2 ± 1,53 9,74 ± 1,44
Изучение микробиоценоза толстого кишечника телят подопытных групп в 1 опыте показало (табл. 3), что содержание бифидобактерий у животных было высоким и одинаковым. Количество лактобактерий и типичных эширихий в содержимом толстого кишечника телят подопытных групп соответствовало нижним границам физиологических значений и существенно не различалось с тенденцией к более высокому содержанию типичных эширихий у животных 3 группы по сравнению с контролем (на 10,58%) и телятами 2 группы (на 4,95%). Количество энтерококков в содержимом толстого кишечника телят подопытных lpynn соответствовало нижним границам физиологических значений, и было одинаковым. У телят контрольной группы в содержимом толстого кишечника клостридии не были обнаружены, а у животных 2 и 3 групп присутствовали в незначительном количестве. У одного теленка из 3 группы в содержимом толстого кишечника были обнаружены энтеропатогенные кишечные палочки (Е. coli 026 : К60 (В6)). которые являются возбудителями острых кишечных инфекций, типичных экзогенных инфекций, называемых эшерихиозами (диареи).
Таблица 3
Влияние выпаивания провагена и провагена с хитозаном на микробиоценоз толстого кишечника телят, КОЕ lg/r / частота выделения, % (1 опыт)
Наименование микроорганизмов 1 группа 2 группа 3 группа
Бифидобактерии 11,00 ±0,0/, 00 11,00 ±0,0/,оо 11,00 ± 0,0/,оо
Лактобактерии 6,67±0,33/1Ю 6,33±0,33/|оо 6,33±0,33/юо
Эшерихии: типичные 6,33±0,33/,оо б,67±0,33/,оо 7,00±0,0/ юо
лактозонегативные 0 0 0
гемолитические 0 0 0
Патогенны? иггеробактерии 0 0 Есть/«.»
Бактерии рода Протея 0 0 0
Другие условно-патогенные энтеробактерии 0 0 0
Энтерококки 5,00± 0,0/,оо 5,00± 0,0/,оо 5,00±0,0/100
Стафилококк золотистый 0 0 0
Клостридии 0 2,67±1,33/бб.б? 4,00±0,0/ ,оо
Грибы рода Кандида 0 0 0
Неферментируюшие бактерии 0 0 0
Лактозонегативных и гемолитических эшерихий, бактерий рода Протея, других ус-ловно-патогенных энтеробактерий, стафилококка золотистого, грибов рода Кандида, нефер-ментирующих бактерий в содержимом толстого кишечника телят подопытных групп не было обнаружено. Следовательно, выпаивание в течение 7 суток провагена и провагена с хитозаном обусловило тенденцию к оптимизации в содержимом толстого кишечника телят уровня типичных эшерихий. При этом выпаивание провагена с хитозаном не смогло предотвратить у одного теленка появление в кишечнике энтеропатогенных кишечных палочек.
В содержимом толстого кишечника телят подопытных групп, использованных во 2 опыте, количество бифидобактерий было одинаковым (табл. 4), но на порядок меньше, чем у
животных в 1 опыте (табл. 3). Количество лактобактерий в содержимом толстого кишечника телят подопытных групп во 2 опыте, как и у животных в 1 опыте существенно не различалось, но отмечена тенденция к большему их количеству у животных 3 группы (на 5,37% по сравнению с контролем). Типичных эширихий в содержимом у телят контрольной группы во 2 опыте было столько же, как и у животных в 1 опыте. У телят 2 и 3 групп также отмечена тенденция к более высокому числу этих микроорганизмов в содержимом толстого кишечника по сравнению с контролем на 5,37%. Количество энтерококков в содержимом толстого кишечника у телят контрольной группы соответствовало наиболее высоким нормативным значениям и на 2 порядка превышало их уровень у контрольных телят в 1 опыте.
Таблица 4
Влияние выпаивания провагена и провагена с хитозаном на микробиоценоз толстого кишечника телят, КОЕ lg/r / частота выделения, % (2 опыт)
Наименование микроорганизмов 1 группа 2 группа 3 группа
Бифидобактерии 10,00±0,0/юо 10,00±0,0/юо 10,00±0,0/IOO
Лактобактерии 6,00±0,0/,оо 6,00±0,0/loo 6,67±0,33/100
Эшерихии: типичные б,33±О,33/100 6,67±0,33/100 6,67±0,33/100
лактозонегатив ные 0 0 0
гемолитические 0 0 0
Патогенные энтеробактерии 0 0 0
Бактерии рода Протея 0 0 0
Другие условно-патогенные энтеробактерии 0 0 0
Энтерококки 7,00±1,15/кю 5,33±0,33/100 5,00±0,0/100
Стафилококк золотистый 0 0 0
Клостридии 2,67± 1,33/66.67 2,67±1,33/б6.67 1,33±1,33/зз.зз
Грибы рода Кандида 0 0 0
Неферментирующие бактерии 0 0 0
Потсзность этих микроорганизмов была доказана многими учеными, в том числе М.М. Интизаровым [12]. Однако среди энтерококков имеются и патогенные штаммы, вызывающие эндокардиты, маститы, участвующие в смешанных инфекциях [13].
У телят 2 и 3 группы отмечена тенденция к меньшему количеству этих микроорганизмов (на нижней границе нормативных значений) в содержимом на 23,86 и 28,57% соответственно. Следовательно, удвоенная доза использованных препаратов обусловила тенденцию к снижению уровня энтерококков в содержимом толстого кишечника у телят опытных групп по сравнению с контролем. При этом количество энтерококков в содержимом у телят, которым выпаивали препараты, было практически одинаковым в 1 и 2 опытах. У контрольных телят во 2 опыте, в отличие от 1 опыта, в содержимом толстого кишечника были обнаружены в незначительном количестве клостридии. Их количество у животных 2 группы было таким же, как и у телят 1 группы, а у животных 3 группы - меньше на 50,19%, чем у них. Следовательно, выпаивание удвоенной дозы комплекса провагена с хитозаном обусловило тенденцию к снижению уровня клостридий в содержимом толстого кишечника у телят. Лак-
тозонегативных и гемолитических эшерихий, бактерий рода Протея, других условно-патогенных энтеробактерий, стафилококка золотистого, грибов рода Кандида, неферменти-рующих бактерий в содержимом толстого кишечника телят подопытных групп во 2 опыте, как ив 1, не было обнаружено. Кроме того, если у 1 теленка в 1 опыте в содержимом были найдены энтеронатогенные кишечные палочки, то у подопытных животных во 2 опыте они не обнаруживались.
Таким образом, ежедневное выпаивание в течение 7 суток 1 - 1,5-месячным телятам пробиотика «Проваген» (14 г/голову) и комплекса этого пробиотика (14 г/голову) с хитоза-ном (0,8 г/голову) обусловило увеличение общего белка в сыворотке крови. Добавка хигоза-на к пробиотику способствовала повышению уровня гуморальной защиты организма телят за счет повышения уровня гамма-глобулинов в сыворотке крови. При этом у животных отмечена тенденция к оптимизации микробионеноза толстого кишечника, о чем свидетельствует повышение уровня типичных эшерихий в содержимом.
Выпаивание удвоенных доз этих препаратов в течение 7 суток 1 - 1,5-месячным телятам не оказало существенного влияния на уровень общего белка и его фракций в сыворотке крови, но также обусловило тенденцию к оптимизации микробиоценоза толстого кишечника за счет повышения уровня типичных эшерихий в содержимом. Кроме того, введение телятам вместе с пробиотиком хитозана способствовало снижению количества клостридий в содержимом толстого кишечника.
ЛИТЕРАТУРА
1. Чахава О.В., Горская E.H. Из)чение механизма действия бактериальных биологических препаратов с использованием модели безмикробных крыс. // Бюллетень ВИЭВ, «Теоретические и практические основы гнотобнологии». М., 1984. - Вып. 53. - С. 7-10.
2. Бовкун Г.Ф., Ващекин Е.П., Машк Н.И., Малик Е.В. Микробиоценоз кишечника в норме и патологии у молодняка птиц, крупного рогатого скота и целесообразность пробиотиче-ской и пребиотической коррекции. Брянск, из-во ФГОУ ВПО «Брянская ГСХА», 2005. - 80 с.
3. Некрасов Р.В., Кирилов М.П., Ушакова H.A. Использование пробиотиков нового поколения в кормлении свиней. // Проблемы биологии продуктивных животных, 2010. - № 3. - С. 64-75.
4. Елизаров И. В. Спорообразующий пробиотик Проваген в свиноводстве // Журнал Ветеринария, 2009. - №9. - С. 17-18.
5. Маслов М.Г., Ежова О.Ю., Сенько Е.Е. Влияние пробиотика провагена, пребиоти-ка асидлака и селплекса на качество инкубационных яиц уток. // Известия Оренбургского государственного университета, 201 ], №1 с. 100-102).
6. Нормы и рационы кормления сельскохозяйственных животных. Справочное пособие. / Под ред. А.П. Калашникова, В.И. Фисинина, В.В.Щеглова, Н.И. Клейменова: 3-е изд. перераб. и доп. - М.: Агропромиздат, 2003. - 456 с.
7. Методические указания по применению унифицированных биохимических методов исследования крови, мочи и молока в ветеринарных лабораториях.- М.; ВАСХПИЛ, 1081.-85 с.
8. Методы ветеринарно-клинической лабораторной диагностики: Справочник / И.П. Кондрахин, А.В. Архипов, В.И. Левченко и др.; Под ред. И.II. Кондрахина. М.: КолосС., 2004. - 520 с.
9. Плохинский Н.А. Биометрия. Из-во Сибирского отделения АН СССР, Новосибирск, 1961.-362 с.
10. Малахов, А.Г., Кармолиев Р.Х., Савойский А.Г. др. Нормативы биохимических показателей обмена веществ в организме крупного рогатого скота. M.: МВА, 1986. - 28 с.
11. Чумаченко В.Е., Высоцкий A.M., Сердюк Н.А., Чумаченко В.В. Определение естественной резистентности и обмена веществ у сельскохозяйственных животных.- Киев: Урожай, 1990,- 136 с.
12. Интизаров М.М. Проблемы гнотобиологии и взаимоотношения аутомикрофлоры и макроорганизма хозяина. Авгореф. дисс. докт. ветер, наук., М., 1985. - С. 18-19.
13. Etinne J., Reverdy М.Е., Wouren V. Etude bactériologique de cent, vingt-cing end-jcardites infcctibuscs a streptocoque // Sem. Hop. - Paris. - 1983. - Vol. 59. - № 4. - P. 240-243.
LIT 1С AC Y Ul" PKUiiiU I ICS "PROVÀGENT AND A COMPLEX OF THIS PROBIOTIC WITH CHITOSAN IN CALF REARING E.V. Krapivina, D.V. Ivanov, E.A. Krivopushkina, G.N. Bobkova Bryansk State .Agricultural Academy Summary
Daily watering for 7 days 1 - 1.5-month-old calves with probiotic "Provagen" (14 g / head) and a complex of probiotic (14 g / head) with chitosan (0.8 g / head) resulted in an increase in total protein in serum blood. The addition of chitosan to increase the level of probiotics humoral defenses of calves due to higher levels of gamma globulins in blood serum. At the same animals showed a tendency to optimize mikrobiotsenoz of large intestine, as evidenced by the increase in the typical contents of Escherichia.
Watering doubled doses of these drugs within 7 days of 1 - 1.5-month-old calves had no significant effect on serum total protein and its fractions in blood serum, but also led to a tendency to optimize mikrobiotsenoz colon by increasing the level of typical Escherichia contents. In addition, the introduction of calves with probiotic chitosan helped reduce the number of Clostridia in the bowel contents.
