CC BY
34
УДК 616.428-091.8:612.57
ВЛИЯНИЕ УПРАВЛЯЕМОЙ ГИПЕРТЕРМИИ НА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ВИСЦЕРОСОМАТИЧЕСКИХ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ
А.В. ЕФРЕМОВ, К.К. ДМИТРИЕВА, А.В. ИГНАТОВА, С.В. МИЧУРИНА,
Е.В. ОВСЯНКО, Ю.В. ПАХОМОВА, М.Г. ПУСТОВЕТОВА,
В.С. САЗОНОВ*
Лимфатическим узлам в силу их функционального предназначения отводится значимая роль в патогенезе и развитии большинства заболеваний. Лимфатические узлы являются одной из основных специализированных и саморегулирующихся систем, занимают важное место в комплексной оценке механизма биологического действия на организм различных дестабилизирующих факторов, в том числе и общей управляемой гипертермии (ОУГ). При этом в лимфатических узлах осуществляется дренаж тканей и биологическая обработка лимфы [1, 10]. На основании анализа литературных данных известно, что в лимфатических узлах при ОУГ отмечаются нарушения микрогемоциркуляции и лимфоцир-куляции в различные сроки после перегревания; отек лимфоидной ткани, обусловленный спазмом прекапиллярных артериол и расширением посткапиллярных венул; увеличение емкости синусов, что обуславливает повышение транскапиллярной возможности лимфатических узлов [5]. В лимфу раньше, чем в кровь, поступают эндогенные и экзогенные токсины, наблюдаемые при этом токсемия и токсиколимфия сопровождаются ухудшением гемоциркуляции, что проявляется в нарушении микроциркуля-торного гомеостаза [3, 9]. Таким образом, при патологических состояниях, сопровождающихся клеточной деструкцией, именно лимфогенный путь поступления в кровоток продуктов катаболизма является приоритетным. К числу таких состояний, несомненно, относится и ОУГ [6].
Цель работы - изучение морфологических изменений вис-церосоматических лимфатических узлов, приобретающих особое значение в адаптивных реакциях организма при ОУГ.
Материалы и методы. Исследование проводили на 28 крысах-самцах Вистар, массой 180-200 г, полученных из вивария ЦНИЛ университета (сертификат имеется). Экспериментальные животные были разделены на 4 группы: 1 группа - контроль (n=7); 2 группа - 3-и сутки с момента перегревания (n=7); 3 группа - 7-е сутки с момента перегревания (n=7); 4 группа - 14-е сутки с момента перегревания (n=7). Разогревание крыс производилось однократно по «Способу экспериментального моделирования общей гипертермии у мелких лабораторных животных» [4] при погружении объекта исследования в горячую воду (45 °С) до уровня шеи до достижения ректальной температуры 43,5 °С (стадия теплового удара). Опытных животных содержали на стандартном рационе со свободным доступом к пище и воде.
Изучали структурно-функциональные изменения подвздошного лимфатического узла, регионарного для области лим-фосбора нижних конечностей и органов малого таза в сроки на 3, 7 и 14 сутки после проведения процедуры. Взятие лимфатических узлов, изготовление и окраску гистологических препаратов (гематоксилином Майера-эозином) вели по стандартным методикам. Морфометрический анализ светооптических препаратов вели с помощью микроскопа МБС-10 при увеличении в 32 раза с помощью окулярной морфометрической вставки, представляющей собой закрытую квадратную тестовую систему площадью 14,06 мм2, методом точечного счета [2]. Определяли площади компонентов узла: общую площадь лимфатического узла, площади краевого синуса, капсулы, коркового и мозгового вещества, лимфоидных узелков с герминативными центрами и без, пара-кортикальной зоны, подкапсулярной зоны, коркового плато, мозговых тяжей и мозговых синусов. В лимфоидных узелках с герминативными центрами определяли площади герминативных центров и мантии. Измеряли и рассчитывали отношение абсолютной площади лимфоидных узелков с герминативными центрами и без них (ЛУ2/ЛУ1-индекс). Рассчитывали отношение абсолютной площади коркового и мозгового вещества (К/М-индекс) [2]. Статистическую обработку результатов производили с использованием пакета статистических программ «SPSS 16.0 for Windows». Эксперименты были выполнены с соблюдением принципов гуманности в соответствии с «Правилами проведения
* Новосибирский ГМУ, 630091 г. Новосибирск, Красный пр., 52
работ с использованием экспериментальных животных» (Приказ Минздрава СССР от 12.08.77).
Таблица
Показатели структурных элементов подвздошных лимфатических узлов крыс при общей управляемой гипертермии (М±т)
Исследуемый признак Группы экспериментальных животных
1 группа 2 группа 3 группа 4 группа
Общая площадь, мм2 8,16±0,12 17,42±0,3* 10,50±0,56* 9,29±0,16*
Капсула, мм2 0,14±0,01 0,53±0,04* 0,43±0,06* 0,5±0,05*
Краевой синус, мм2 0,72±0,03 1,43±0,15* 0,96±0,1 0,74±0,03
Корковое вещество, мм2 5,25±0,07 9,1±0,17* 6,01±0,39 5,58±0,08
а) подкапсулярная зона, мм2 - 0,13±0,01* 0,12±0,01* 0,46±0,04*
б) корковое плато, мм2 1,81±0,28 2,1±0,16 1,56±0,16 1,26±0,08
в) лимфоидные узелки без герминативных центров (ЛУ1), мм2 0,14±0,01 1,09±0,09* 0,27±0,04* 0,31±0,03*
г) лимфоидные узелки с герминативными центрами (ЛУ2), мм2: 0,54±0,02 1,83±0,1* 1,18±0,08* 1,54±0,07*
Герминативные центры, мм2 0,23±0,02 0,43±0,05* 0,13±0,01* 0,56±0,03*
Мантия, мм2 0,3±0,02 1,39±0,1* 1,06±0,11* 0,98±0,04*
ЛУ2/ЛУ1, мм2 3,97±0,53 1,68±0,18* 4,37±0,61 4,96±0,7
д) паракортикальная зона, мм2 2,67±0,05 3,95±0,2* 2,84±0,24 2,01±0,14*
Мозговое вещество, мм2 2,05±0,09 6,36±0,21* 3,11 ±0,26* 2,47±0,12
а) мозговые тяжи, мм2 0,73±0,03 3,13±0,18* 1,19±0,1* 1,15±0,06*
б) мозговые синусы, мм2 1,32±0,05 3,23±0,09* 1,92±0,18* 1,32±0,11
К/М-индекс, мм2 2,55±0,12 1,43±0,06* 1,92±0,12 2,25±0,12
Примечание: * - статистически достоверные показатели с контролем
Результаты. При действии ряда дестабилизирующих факторов увеличивается объем интерстициальной жидкости в корнях лимфатической системы, усиливая продукцию лимфы. При ОУГ происходит усиление дренажной функции лимфатической системы за счет увеличения минутной производительности лимфан-гиона [8]. Об усиленной лимфопродукции и повышенной возможности транспортной функции подвздошного лимфатического узла в условиях ОУГ по сравнению с интактным уровнем свидетельствовали на протяжении всего срока эксперимента увеличение показателя его общей площади как за счет коркового, так и за счет мозгового вещества (табл.). При этом максимальное увеличение показателей площади мозгового вещества происходило на 3 сутки после ОУГ. Рост емкости лимфатических синусов явился морфологической предпосылкой повышения транспортной функции в результате роста лимфообразования, обусловленного местным раздражением кожных покровов, и повышением скорости лимфотока [11]. Максимальное увеличение показателей площадей мозговых синусов отмечалось после 3-х суток опыта. На 7-е сутки показатели площадей мозговых синусов снижались, но оставались еще достоверно выше исходного уровня.
К/М-индекс также снижался, в большей мере на 3 сутки опыта при ОУГ. Это позволило отнести лимфатический узел к промежуточному типу с дренажно-детоксикационной функцией. В дальнейшем данный показатель рос и достигал контрольного уровня, тип лимфоузла вновь становился компактным. Отмечено увеличение на протяжении опыта показателей площадей лимфоидных узелков с герминативными центрами и без них, подкапсу-лярной зоны, мозговых тяжей, а также рост показателей площадей паракортикальной зоны и коркового плато на 3-и сутки после воздействия ОУГ по сравнению с показателями подвздошных лимфатических узлов интактных животных. Эти изменения могут косвенно говорить об активации клеточного и гуморального иммунитета в связи с развитием эндотоксикоза в ранние сроки после ОУГ за счет высокой концентрации в плазме крови и тканях токсических метаболитов, образующихся из-за клеточной деструкции при активации протеолиза.
Заключение. Все реакции лимфатической системы (включая и метаболические) в экстремальных условиях концептуально объединяются в понятие «лимфатического ресетинга», т. е. системной перестройки структурно-функциональных параметров на качественно новом уровне жизнеобеспечения, при котором компоненты лимфатической системы принимают на себя функции, ранее им несвойственные либо невостребованные [4].
Концепция «лимфатического ресетинга», являющегося системной реакцией организма, позволяет не только подчеркнуть активную роль лимфатической системы как элемента компенсации и коррекции метаболических нарушений при критических состояниях, но и выделить физиологические аспекты адаптации к
стрессу лимфатической системы. С точки зрения адаптационных процессов, «лимфатический ресетинг» отражает высокую цену адаптации, поскольку для компенсации имеющихся эндокриннометаболических изменений включается большое количество структурных единиц лимфатической системы, которые функционируют продолжительный период времени [7]. Усугубление тяжести повреждения приводит к срыву адаптации, но даже имеющиеся адаптивные изменения становятся звеньями патогенеза. Выявленные в ходе опыта изменения структурной организации подвздошного лимфатического узла, возникающие в по-стгипертермическом периоде, говорят об участии этого органа в формировании компенсаторно-приспособительной реакции организма при действии экстремально высокой внешней температуры. Вероятно, это связано с «компенсацией перераспределения» в системе «кровь - ткань - лимфа - лимфатический узел», когда функциональная нагрузка распределяется между аналогичными элементами системы для снижения ее до нормы адаптации.
Литература
2.Банин В.В. Механизмы обмена внутренней среды.- М. : Изд-во РГМУ, 2000.- 174 с.
3.Буянов В.М., Алексеев А. А Лимфология эндотоксикоза.-М. : Медицина, 1990.- 272 с.
5.Ефремов А.В. Морфо-функциональные особенности лимфатического русла при СДС и его фармакологическая коррекция : Дис. ... д-ра мед. наук.- Новосибирск, 1992.- 539 с.
6.Ефремов А.В. и др. Лимфатическая система, стресс, метаболизм.- Новосибирск : Изд-во СО РАМН, 1999.- 194 с.
8.Зайко Т.М. Лимфатические узлы в условиях общей гипертермии (морфо-функциональное исследование) : Автореф. дис. к. м. н.- Новосибирск, 1987.- 17 с.
9Масленникова М.А. Эндокринно-метаболические особенности тканевой адаптации миокарда в динамике синдрома длительного сдавления (экспериментальное исследование) : Дис. ... д-ра мед. наук.- Новосибирск, 2006.- 288 с.
10Меерсон Ф З. Адаптация, стресс и профилактика.- М. : Медицина, 1981.- 278 с.
11.Орлов Р., Ерофеев Н. // Физиол. ж.- 1994.- №2.- С. 34^8.
12.Пахомова Ю.В. Системные механизмы метаболизма при общей управляемой гипертермии (экспериментальное исследование) : Дис. ... д-ра мед. наук.- Новосибирск, 2006.- 280 с.
13.СапинМР. // Морфология.- 1997.- Т. 112, № 5.- С. 84.
14.Тимошенко А.В., Черенкевич С Н. // Биофизика.- 1995.-Т. 40, № 1.- С. 115-116.
УДК 616. 153.915:612(085)
ВЛИЯНИЕ ЭТИЛМЕТИЛГИДРОКСИПИРИДИНА ГЕМИСУКЦИНАТА И МЕКСИДОЛА НА ПРОТИВООПУХОЛЕВУЮ АКТИВНОСТЬ ЦИК-ЛОФОСФАНА У МЫШЕЙ С ЛЕЙКОЗОМ Ь 1210
Н.И.МИКУЛЯК, А.Н.МИТРОШИН, А.И.МИКУЛЯК*
Учитывая современные тенденции развития химиотерапевтического метода лечения злокачественных опухолей, заключающиеся в использовании высоких доз противоопухолевых средств, приходится говорить о возросшей роли данного вида токсических реакций на течение, прогноз и эффективность лечения злокачественных новообразований [10]. В связи с этим одной из важнейших проблем экспериментальной и клинической фармакологии является разработка новых фармакотерапевтических подходов к снижению токсичности и повышению терапевтической эффективности лекарственного метода лечения злокачественных опухолей [7,8,10,11]. К классическим противоопухолевым средствам относятся антрациклиновые антибиотики, которые широко применяются в клинической практике. Однако применение этих препаратов связано с развитием в период лечения осложнений, наиболее опасным из которых является развитие токсической кардиопатии и гепатотоксичности [9,12]. Поэтому предупреждение и уменьшение разных видов токсичности противоопухолевой химиотерапии - это реальный путь к повышению эффективности широко применяемых в клинике цитостатиков и сохранению качества жизни пациентов [8]. В целом ряде исследований установлена роль активации ПОЛ в генезе опухолевого
*Кафедра физиологии человека Медицинского института Пензенского госунивер ситета
роста и в основе токсического действия препаратов [2,5]. При этом происходит изменение активности антиоксидантной системы организма опухоленосителя [9]. Установление роли ПОЛ в канцерогенезе и повреждении гомеостатических структур определило место антиоксидантов в профилактике, как опухолевых заболеваний, так и осложнений цитостатической терапии. Появление нового типа водорастворимых антиоксидантов, производных 3-оксипиридина, обладающих широким спектром действия при различных патологических состояниях является основанием для применения с целью коррекции побочного действия цитоста-тических лекарственных средств [1,3,4,6].
Цель работы — изучение возможности фармакологической коррекции производных 3-оксипиридина мексидола (МЕКС) и этилметилгидроксипиридина гемисукцината (ГЕМ) побочных эффектов циклофосфана (ЦФ). ЦФ применяется для проведения химиотерапевтического лечения острого лимфобластного и хронического лимфолейкоза, рака молочной железы, яичников, легкого, шейки матки, мочевого пузыря, яичка, хориокарциномы, саркомы мягких тканей, костной ретикулосаркомы, саркомы Юинга, нейробластомы, опухоли Вильмса, опухоли слюнных желез, предстательной железы, щитовидной железы, тимомы, рабдомиосаркомы, миеломной болезни, ретинобластомы. Побочные эффекты ЦФ проявляются в тошноте, рвоте, анорексии, стоматите, реже - гепатите, лейкопении, анемии, тромбоцитопении, геморрагическом цистите, алопеции, гиперпигментации.
Материалы и методы. Опыты проведены на мышах линии БЭЕ^самцы, полученных из питомника «Столбовая», (масса тела 22-24 г) с внутрибрюшинно трансплантированным (1 млн клеток/мышь) лейкозом Ь 1210 (штамм получен из Банка опухолевых штаммов ГУ РОНЦ им.Н.Н.Блохина РАМН). В каждой экспериментальной группе по 12 животных. ЦФ (ОАО «Биохимик» г. Саранск) вводили однократно в физрастворе внутрибрю-шинно через 24 часа после трансплантации опухоли. Использовали 3 дозы ЦФ - 50мг/кг, 75 мг/кг и 100 мг/кг. ГЕМ вводили внут-рибрюшинно в физрастворе в дозе 25 мг/кг пять дней: через 1,5 часа после ЦФ и далее ежедневно. МЕКС (5% раствор для инъекций, СОО «Эллара», Владимирская обл.) вводили внутрибрю-шинно в физрастворе в дозе 25 мг/кг пять дней: через 1,5 часа после ЦФ и далее ежедневно. Об изменении лечебного действия ЦФ при воздействии препарата судили по изменению продолжительности жизни павших животных (ИПЖ) в опытных группах в % по отношению к этому показателю в контрольной группе.
Таблица 1
Структура эксперимента
п Серии № п Серии
12 Ь 1210 7 12 ЦФ (75мг/кг)
12 ГЕМ 8 12 ЦФ (75мг/кг)+ГЕМ
12 МЕКС 9 12 ЦФ (75мг/кг)+МЕКС
12 ЦФ (50мг/кг) 10 12 ЦФ (100мг/кг)
12 ЦФ (50мг/кг)+ГЕМ 11 12 ЦФ (100мг/кг)+ГЕМ
12 ЦФ (50мг/кг)+МЕКС 12 12 ЦФ (100мг/кг)+МЕКС
Статистическую обработку результатов проводили методом Фишера - Стьюдента. Разницу считали достоверной при р<0,05.
Результаты. Влияние ГЕМ на гибель мышей с лейкозом Ь-1210 после введения Цф изучали в 8 экспериментальных группах: 1) контроль 1 - животные с лейкозом Ь-1210; 2) контроль 2 -животные получавшие, ГЕМ по схеме; 3) животные, получавшие ЦФ в дозе 50 мг/кг; 4) мыши, получавшие ЦФ в дозе 50 мг/кг с модификатором ГЕМ; 5) мыши, получавшие ЦФ в дозе 75 мг/кг; 6) животные, получавшие ЦФ в дозе 75 мг/кг с модификатором ГЕМ; 7) животные, получавшие ЦФ в дозе 100 мг/кг; 8) животные, получавшие ЦФ в дозе 100мг/кг с модификатором ГЕМ.
В первой группе средняя продолжительность жизни павших животных (СПЖ) составляла 7,8±0,08 суток, гибель животных началась на 7 сутки, погибло 2 животных из 12 (2/12), остальные погибли на 8 сутки. Во второй группе СПЖ составляла 8,3±0,2. Гибель животных, как и в первой группе, началась на 7 сутки, погибли 3 животных (3/12), на 8 сутки погибли еще 2 животных, остальные на 9 сутки. В третьей группе, получавшей ЦФ в дозе 50 мг/кг, гибель животных наступила на 9 сутки, погибли 4 из 12 животных, на 10 сутки 3 из 8 животных, на 11 сутки остальные. СПЖ в этой группе составляла 10,1±0,2. У животных, защищен-
