CC BY
36
© КОРНОПОЛЬЦЕВА Т.В., ШУРЫГИНА Ю.Ю. - 2006
ВЛИЯНИЕ СУХОГО ЭКСТРАКТА ПАНЦЕРИИ ШЕРСТИСТОЙ НА ТЕЧЕНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО АРТРИТА
ТВ. Корнополъцева, Ю.Ю. Шурыгина
(Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, директор — В.М. Корсунов; отдел биологически активных
веществ, зав. — д.м.н., проф. С.М. Николаев)
Резюме. Патоморфологическим исследованием и оценкой динамики изменения показателей активности воспалительной реакции доказана фармакотерапевтическая эффективность применения сухого экстракта из надземной частиРапіегіа ІапаГа Ь. при экспериментальном артрите.
Ключевые слова. Панцерия шерстистая, экспериментальный артрит.
Панцерия шерстистая (Рап^егча 1апаГа (Ь.) 8суак) — многолетнее растение из флоры Восточной Сибири, широко используемое в народной и традиционной медицине [3,6,15].
Известно, что в данном сырье содержатся алкалоиды (стахидрин) [12]; дубильные вещества пирокатехи-нового ряда [7]; горькое вещество неустановленной природы; яблочная кислота; эфирное масло [1,11]; ири-доиды: гарпагид, 8-ацетилгарпагид; фенолкарбоновые кислоты: хлорогеновая, неохлорогеновая, кофейная и производные фенолкарбоновых кислот: 4-0-Р-ё-глю-копиранозид кофейной кислоты [7]; а также флавоно-иды: 3-0-Р-ё-глюкопиранозил-6”-а-1-арабинопирано-зид, 3-О-Р-Б- глюкопиранозил -6”- а -1-рамнопирано-зид и 3-О-Р-Б-галактопиранозид изорамнетина, 3-О-Р-Б-галактопиранозид кепферола, рутин [2,7-10].
Разработана технология получения субстанции — сухого экстракта: экстрагент — 50% этанол; температура экстракции — 60°С; время экстракции, за которое достигается полное извлечение биологически активных веществ (БАВ) — 150 мин; размер частиц сырья — 0,5 см; соотношение сырье: экстрагент — 1:14; кратность экстракции — 3.
Цель работы: определить противовоспалительное действие нового фармакологического средства — сухого экстракта панцерии шерстистой и оценить его фар-макотерапевтическую эффективность при экспериментальном артрите.
Материалы и методы
Острая токсичность сухого экстракта определялась на белых беспородных мышах-самцах с исходной массой 20,0+1,0 г при внутрибрюшинном и внутрижелудочном введениях растворенного в воде экстракта. Каждую дозу экстракта испытывали на 10 животных. Наблюдение за животными вели в течение 14 суток. Регистрировали визуальные признаки интоксикации, проводили вскрытие и осмотр погибших животных.
Экспериментальный острый артрит коленного сустава вызывали у 90 белых крыс обоего пола с исходной массой 200-220 г по методу Френка инъекцией в коленный сустав правой задней конечности 0,1 мл 2% раствора формалина [5]. Экспериментальную терапию проводили сухим экстрактом панцерии шерстистой в дозе 100 мг/кг массы тела животного, с первого дня эксперимента на протяжении 21 суток. Препарат сравнения калефлон вводили второй группе животных в дозе 100 мг/кг массы. Контрольная группа животных получала дистиллированную воду в эквиобъем-ном количестве в аналогичном режиме.
На 7-е, 14-е и 21-е сутки после воспроизведения острого артрита коленного сустава в контрольной и опытных группах животных оценивали динамику изменения показателей активности воспалительной реакции: скорость оседания эритроцитов (СОЭ), количество лейкоцитов в венозной крови, проводили анализ лейкоцитарной формулы, диаметр воспаленного сустава, а также патоморфологическое исследование.
Результаты и обсуждение
Результаты исследований острой токсичности показали, что при внутрибрюшинном введении больших доз сухого экстракта панцерии шерстистой белым мышам наблюдаются признаки интоксикации, выражающиеся в замедлении ориентировочной реакции, резких движениях, появлением тонических, а затем тонико-кло-нических судорог. Животные погибали при явлениях остановки дыхания преимущественно в течение первых суток с начала введения экстракта. ЬБ 50 по Керберу при внутрибрюшинном введении сухого экстракта пан-церины соответствовала 4625,0+390,0 мг/кг. При внут-рижелудочном введении данного экстракта в максимально возможной дозе, гибели животных не наступало и не наблюдали явных признаков интоксикации.
Эти данные позволяют отнести испытуемый сухой экстракт панцерии шерстистой к группе малотоксичных веществ по классификации Сидорова [13].
Скорость оседания эритроцитов (табл. 1) при применении экстракта панцерии на 7-е сутки была близка к таковой у интактных животных; на 14-е и 21-е сутки она была меньше в 1,6 раза, чем в контрольной группе. Количество лейкоцитов в периферической крови на 7е и 14-е сутки было в 1,2 раза меньше, чем у крыс в контроле; на 21-е сутки — в 1,5 раза меньше. Количество палочкоядерных клеток в лейкоцитарной формуле увеличивалось незначительно, но на 21-е сутки у крыс, получавших экстракт панцерии, их было почти в 2 раза меньше, чем в контроле. Количество сегментоядерных нейтрофилов у получавших экстракт панцерии животных было ниже, чем у контрольных особей в 1,2 раза на всех сроках исследования. Количество эозинофилов лейкоцитарной формулы оставалось стабильным на всех сроках наблюдения.
Процентное содержание моноцитов от 7-ых к 21 -ым суткам несколько повышались во всех группах наблюдения, но статистически между собой не различались. Количество лимфоцитов, по сравнению с данными в интактной группе, у животных снижалось, но если в контрольной группе на 7-е сутки оно снизилось в 1,5 раза, то в группе крыс, получавших экстракт панцерии, только в 1,3; на 14-е сутки — в 1,9 и в 1,2 раза; а на 21-е сутки — в 2,5 раза и 1,4 соответственно. Клинические проявления артрита коленного сустава у крыс были обусловлены ограничением подвижности, болезненностью и некоторым увеличением задней лапы, куда был введен раствор формалина, хотя в группах опытных животных все эти изменения были менее выражены по сравнению с контролем. По объему измеряемого нами коленного сустава, не установлено существенных отли-
Таблица 1
Влияние сухого экстракта панцерии шерстистой на некоторые показатели воспалительного процесса при остром артрите коленного сустава (М±т)
Показатели Сутки опыта Условия эксперимента
Интактные животные Контроль Сухой экстракт панцерии, 100 мг/кг Калефлон, 100 мг/кг
п — количество крыс 7 6 9 11 10
14 6 9 10 10
21 6 8 9 9
СОЭ, мм/ч 7 3,3+0,1 6,6+0,6 3,9+0,2* 4,50,2*
14 3,2+0,2 10,4+0,5 6,3+0,4* 8,7+0,9*
21 3,3+0,1 14,1+0,9 8,5+0,6* 10,1+0,3*
Лейкоциты, 10Ул 7 16,15+0,31 34,23+0,21 29,65+0,33* 33,45+0,57
14 16,78+0,55 30,15+0,46 25,74+0,43* 29,74+0,82
21 16,33+0,47 28,71+0,23 18,71+0,25* 23,68+0,36*
Палочкоядерные нейтрофилы, % 7 2,1+0,01 3,1+0,42 2,2+0,07* 3,1+0,13*
14 2,2+0,03 4,2+0,22 3,4+0,14* 3,5+0,25*
21 2,1+0,02 6,3+0,13 3,3+0,70* 4,2+0,43*
Сегментоядерные нейтрофилы, % 7 36,6+0,17 53,4+0,35 42,3+0,29* 47,2+0,55
14 37,3+0,23 61,2+0,28 48,6+0,48* 52,2+0,31*
21 36,5+0,18 63,1+0,33 50,4+0,14* 56,3+0,24*
Эозинофилы, % 7 1,2+0,04 1,1+0,13 1,2+0,23 1,2+0,33
14 1,1+0,29 1,2+0,16 1,3+0,19 1,1+0,24
21 1,1+0,37 1,1+0,11 1,2+0,27 1,2+0,51
Моноциты, % 7 4,4+0,31 5,5+0,45 5,2+0,52 5,0+0,37
14 4,3+0,23 6,2+0,32 5,3+0,22 6,1+0,12
21 4,5+0,56 8,1+0,14 6,3+0,35 7,2+0,13
Лимфоциты, % 7 57,2+0,27 38,1+0,41 50,2+0,26* 44,4+0,17*
14 56,5+0,34 28,3+0,24 43,5+0,49* 34,6+0,27*
21 57,4+0,21 22,3+0,43 40,1+0,37* 32,8+0,23*
Увеличение диаметра коленного сустава, в % от контроля 7 100 113,7+9,41 109,3+2,53 111,3+7,47
14 100 124,4+7,36 115,5+6,17 121,5+5,21
21 100 106,5+4,24 102,6+3,44 104,8+6,43
Примечание: * - означает, что различия по сравнению с контролем статистически значимы при (р < 0,05).
чий между опытной и контрольной группами. Калеф-лон также оказывал противовоспалительное действие, но его эффективность была несколько ниже, чем у экстракта панцерины.
При патоморфологическом исследовании тканей поврежденных суставов, в разных группах крыс также отмечались некоторые различия. На 7-е сутки опыта в контрольной группе крыс при микроскопическом исследовании пораженного сустава выявлялись отек и плазморрагия соединительной ткани всех видов складок, очаговый миолиз поперечно-полосатых мышц, прилегающих к суставу. Характерным было наличие периваскулярного отека. Эндотелий сосудов с базальной мембраной и внутренней эластической мембраной были набухшими и выдавались в просвет самого кровеносного сосуда. Мышечный слой был разволокнен, наружная оболочка, состоящая из рыхлой волокнистой соединительной ткани, также была отечна вплоть до разрывов.
У крыс с экспериментальным артритом в тканях коленного сустава при введении им экстракта панцерии шерстистой на 7-е сутки отек соединительной ткани был значительно менее выражен, по сравнению с данными в контрольной группе животных. Структура стенок кровеносных сосудов была близка к нормальной. Мышечные волокна, окружающие складки и связ-
ки, сохраняли поперечно-полосатую исчерченность.
На 14-е сутки наблюдения в контрольной группе животных сохранялась плазморрагия в соединительной ткани суставных складок. Отек был выражен несколько меньше. Очаговый миолиз был более распространен, чем на 7-е сутки исследования. Сохранялись дистрофические изменения в стенках кровеносных сосудов. При введении экстракта панцерии шерстистой на эти сроки наблюдения, сухожильные связки представляли собой параллельно лежащие пучки. Между этими пучками наблюдали фиброциты и немногочисленные фиб-робласты.
На 21-е сутки наблюдения у животных контрольной группы сохранялся умеренно выраженный отек суставной капсулы, особенно внутреннего синовиального слоя, в котором расположены кровеносные и лимфатические сосуды. Нечетко выявлялся выраженные мышечный миолиз и изменения в стенках кровеносных сосудов.
У животных, получавших экстракт панцерии шерстистой, на 21-е сутки эксперимента структура поверхностей, покрытых хрящом, и суставной сумки, а также коллагеновых и эластических волокон соответствовала норме, что коррелирует с данными [4].
Таким образом, сухой экстракт панцерии шерстистой в экспериментально-терапевтической дозе при его
курсовом введении оказывает фармакотерапевтическое влияние на течение экспериментального острого артрита коленного сустава у белых крыс. Вероятно, нали-
чие в сухом экстракте комплекса биологически активных веществ и обуславливает противовоспалительную активность данного средства.
THE INFLUENCE DRY EXCTRACT OF HERBA PANZERIA LANATA IN THE DURING
EXPERIMENTAL ARTHRITIS
T.V. Kornopolzeva, J.J. Shurygina (Institute of the general and experimental biology SB RAS, Ulan-Ude)
The phato-morfology study and estimation speakers change the factors to activities to inflammatory reaction is proved pharmaco-therapeutic efficiency of the using the dry extract from elevated part Panzeria lanata L. under experimental arthritis.
ЛИТЕРАТУРА
1. Атлас лекарственных растений СССР. — М., 1964. — 703 с.
2. Вавилов В.И., Гелла. Э.В. Рутин панцерии // Конф. молодых ученых Курского мед. института. — Курск, 1970.
— С. 184-187.
3. Варлаков М.Н. Избранные труды / Под ред. А.Д. Туровой. — М., 1963. — 172 с.
4. Воспаление:руководство для врачей / Под ред. В.В. Серова и В.С. Паукова. — М.: Медицина, 1995. — 640 с.
5. Воспроизведение заболеваний у животных для экспериментально-терапевтических исследований / Под ред. Н.В. Лазарева. — Л.: Медгиз, Лен. отд-ние, 1954. — 390 с.
6. Гаммерман А.Ф., Семичев Б.В. Словарь тибетско-латино-русских названий лекарственного растительного сырья, применяемого в тибетской медицине. — Улан-Удэ, 1963. — 162 с.
7. Гелла Э.В. Биологически активные вещества растений родов зопник и панцерия семейства яснотковых // Материалы 4-го Всерос. съезда фармацевтов. — Воронеж, 1981. — С.441-442
8. Гелла Э.В. К химическому исследованию некоторых представителей семейства яснотковых (губоцветных) //
3-й Всесоюз. съезд фармацевтов. — Кишинев, 1980. — С.184.
9. Гелла Э.В., Вавилов В.И. Кемпферол-3-галактозид из панцерии серебристобелой // Конф. молодых ученых Курского мед. ин-та. — Курск, 1973. — С. 186-188.
10. Минаева В.Г, Киселева А.В., Волхонская Т.А. Некоторые результаты обследования растений Красноярского края на содержание флавоновых веществ // Перспективные полезные растения флоры Сибири. — Новосибирск, 1973. — С. 170-178.
11. Прохорова О.А., Лебедев И.М. Душистые растения Алтая и их эфирные масла. — Л., 1932. — 75 с.
12. Пулатова Т.А. Об алкалоидоносности некоторых растений семейства БаЫасеае (губоцветные) // Химия природных соединений. — 1969. — № 4. — С.62.
13. Сидоров К.К. О классификации токсичности ядов при парентеральных способах ведения // Токсикология новых промышленных химических веществ. — М., 1973.
— Вып. 13. — С.47-51.
14. Трину с Ф. П., Мохорт Н.А., Клебанов В. Н. Нестероидные противовоспалительные средства. — Киев, 1975. — 239с.
15. Хайдав Ц, Меньшикова Т.А. Лекарственные растения в монгольской медицине (историко-медицинские исследования). — Улан-Батор, 1978. — 192 с.
© ЛУБСАНДОРЖИЕВА П.Б., АЖУНОВА Т.А., ЦЫБАНОВ К.Б. - 2006
АНТИОКСИДАНТНЫЕ СВОЙСТВА ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОГО СБОРА IN VITRO
П.Б. Лубсандоржиева, Т.А. Ажунова, К.Б. Цыбанов (Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, директор — проф. В.М. Корсунов)
Резюме. Антиоксидантная активность отваров из компонентов противовоспалительного сбора убывает в ряду: черные листья бадана > листья мяты > сбор > цветы ромашки > трава тысячелистника. Наибольший вклад в суммарную антиоксидантную активность сбора вносят полифенольные соединения черных листьев бадана и мяты.
Ключевые слова. Противовоспалительный сбор, антиоксидантная активность._
На основе 4-компонентной прописи тибетской медицины для лечения «жара» тонкой и толстой кишки составлена рецептура противовоспалительного сбора, включающая черные листья бадана толстолистного, цветки ромашки аптечной, траву тысячелистника обыкновенного, листья мяты перечной. Известно, что активация свободнорадикального окисления биомакромолекул является неотъемлемым компонентом воспалительного процесса [5]. Накопление в очаге активных радикалов кислорода и перекисей способствует повышению проницаемости мембранных структур клеток, повреждению структуры ДНК, белковых молекул и нарушению метаболизма [5]. С учетом этого, интерес представляло определение антиоксидантной активности (АОА) составленной растительной композиции и его отдельных компонентов in vitro.
Материалы и методы Фармакопейные виды сырья приобретены в аптечной сети, листья черные бадана толстолистного собраны в осен-
ний период 2002-2003 гг. на хребте Улан-Бургасы Прибайкальского района Бурятии. Качество сырья соответствует требованиям ТУ 9373-028-03533369-02 «Листья черные (перезимовавшие) бадана толстолистного» (рег. уд. 77.99.02.937.Б.000127.08.03). Отвары готовили по методу ГФ XI изд. [1]. Количественное содержание флавоноидов, дубильных веществ, полисахаридов проводили по методикам ГФ XI изд., аскорбиновой кислоты — фотоколоримет-рическим [11], тритерпеновых соединений в пересчете на урсоловую кислоту — спектрофотометрическим [ 10] методами. Антиоксидантную активность водных извлечений определяли по методу [6] с использованием в качестве модельной смеси суспензии желточных липопротеидов. Величину АОА выражали в С^2, (г/л)-1 — концентрации извлечений, необходимой для ингибирования образования малонового диальдегида (МДА) на 50%.
Результаты и обсуждение В данном опыте для водных извлечений из указанных видов растительного сырья наблюдаются процессы закономерного ингибирования окисления, выраженность которого пропорциональна природе активных компонентов и их концентрации. Антиоксидант-
