CC BY
29
н
Влияние селмевита на мембраны и коагуляционную активность тромбоцитов у больных сахарным диабетом
Р. Г. Алборов Кафедра биохимии (зав. - член-корр. РАЕ, проф. А.Ш. Бышевский) I Тюменской государственной медицинской академии I
ную активность тромбоцитов, общую свертывающую активность крови у больных неосложненным СД.
Методы исследования и характеристика больных
Эффект селмевита изучали у больных СД с неосложненные течением, используя двойной слепой контроль.
Обследуемых разделили случайным способом на 2 группы: человек получали селмевит (основная группа) и 27 человек (груп па сравнения) — плацебо (таблетки с инертными наполнителям., идентичные селмевиту по внешнему виду). Селмевит (или плаце бо) назначали по 1 таблетке 2 раза в день в течение 14 дней н фоне лечения традиционными приемами, включавшими инсули нотерапию.
По исходной клинической характеристике боль ные обеих групп практически однородны.
У всех пациентов, наряду с общепринятыми методами клини ческого и лабораторного обследования больных, до и после кур
Таблица '
Содержание фосфолипидов и активность ферментов трансмембранного транспорта ионов в мембранах тромбоцитов больных СД, получавших плацебо или селмевит
Показатель Здоровые доноры Больные СД без осложнений і
(контрольна группа) плацебо (группа сравнения) селмевит (основная группа)
Лизофосфатидилхолины, ммоль/мл 0.019±0.002 0,011 ±0,001* 0,01 1 ±0,002* 0,01 2±0,001* 0,01 9±0,002+
Фосфатидилсерины, ммоль/мл 0.01 8±0.003 0,018±0,001 0,019±0,002 0,017+0,001 0,01 8±0,002
Сфингомиелины, ммоль/мл 0.037±0.004 0.031 ±0.001* 0.029±0.002* 0,030±0,002* 0.039±0.001 * +
Фосфатидилхолины, ммоль/мл 0.072±0.003 0,060±0,002* 0,058±0,003* 0,061±0, 002* 0,076±0,001 *+
Фосфатидилэтаноламины, ммоль/мл 0.035±0.002 0,031 ±0,002 0,032±0,001 0,033±0,001 0,041 ±0,002*+
Холестерол, ммоль/мл 0.25010.006 0,297±0,003* 0,295±0,003* 0,291 ±0,004* 0,259±0,002*+
Отношение холестерин/фосфолипиды 0.72±0.04 0,91 ±0,03* 0,87±0,03* 0,89±0,02* 0,71 ±0,03+
Ыа*,К*- АТФаза, мкмоль/мл на 1 мг белка 0,131 ±0,007 0,136±0,002 0,134+0,003 0,138±0,003 0,121 ±0,002*+
Мд2*-АТФаза, мкмоль/мл на 1 мг белка 0,109±0003 0,112±0,006 0,110±0,012 0,108±0,003 0,111 ±0,002
Са2*-АТФаза, мкмоль/мл на 1мг белка 0,316±0,02 0,339±0,004* 0,334±0,003* 0,321 ±0,005 0,367±0,004*
Фосфолипаза А2, мкмоль/мл на 1мг белка Примечание: верхняя строка - до лечения, них ные различия у больных до и после лечения. 38 0.72±0.07 княя - после лечения; : 0,81 ±0,03* 0,79±0,01 * ' достоверные различия в сравн 0,79±0,01 * 0,61±0,02*+ ении с контролем; + достовер-
В патогенезе сахарного диабета 1 типа (СД) играют роль нарушения функции клеточных мембран [2, 11), сопряженные с ускорением липопероксидации (Л ПО). Мембранопротекторы, в том числе и антиоксиданты, способствуют структурно-функциональной нормализации мембран у больных СД 1 типа [11, 12].
Селмевит (утвержден Фармакологическим государственным комитетом 25.09.1997 г. Регистрационный номер 2000/114/8) — отечественный препарат, содержащий «ловушки» свободных радикалов, протекторы Нв-групп (витамины А, Е, С, Н и группы В), компонент антиоксидантных энзимов (селен) и ряд минералов, компенсирует витаминно-минеральную недостаточность, нормализует липидный обмен, позитивно влияет на гемостаз |3|, ограничивает нарушения толерантности к углеводам при атеросклерозе, сахарном диабете 113] и других заболеваниях, протекающих с активацией Л ПО |3].
Цель работы — изучить влияние селмевита на фос-фолипидный состав, транспортную и коагуляцион-
Сахарный лиабет
Лечение
са терапии определяли в мембранах тромбоцитов содержание ли-зофосфатидилхолинов, фосфатидилсеринов, сфингомиелинов, фосфатидилхолинов, фосфатидилэтаноламиинов и холестерола [8], активность фосфолипазы А, [18], активность энзимов трансмембранного переноса ионов Na'/K*-, Mg: - и Са!'-АТФаз |17| и активность глкжозо-6-фосфатдегидрогеназы — Г-6-Ф-ДГ |1|. Одновременно в плазме крови определяли активированное время рекальцификации — АВР, активированное частичное тромбопла-стиновое время — АЧТВ |10|, содержание продуктов деградации фибрина — ПДФ [6|, D-димеров (набор «D-dimer test» фирмы Roche), содержание растворимых комплексов мономерного фибрина — РКМФ 110], концентрацию реагирующего на тромбин фибриногена 1101, количество тромбоцитов в крови 110), спонтанную и АДФ-агрегацию тромбоцитов (агрегометр «Биола»), индуктор агрегации — АДФ, конечная концентрация 0,01 мг/мл [7| и общую коагулирующую активность тромбоцитов — ОКАТ [5]. Определяли уровень гликозилированного гемоглобина.
Все исследования выполнены у здоровых лиц соответствующего возраста и пола (29 доноров — контрольная группа).
Результаты
У больных СД, получавших селмевит, в более короткие сроки исчезали признаки астении и декомпенсации диабета, что сопровождалось снижением уровня гликированного гемоглобина, в сравнении с больными, получавшими плацебо. У больных СД (табл. 1) в сравнении со здоровыми в мембранах тромбоцитов снижено содержание легкоокисляемых фракций фосфолипидов (лизофосфатидилхолинов, фосфатидилхолинов и сфингомиелинов), повышено содержание холестерола, отношение холестерол/фо-сфолипиды.
После курса терапии с плацебо у больных группы сравнения эти величины существенно не изменились.
У больных основной группы содержание легкоокисляемых фракций увеличилось, содержание трудноокисляемых фракций, холестерола и коэффициент холестерол/фосфолипиды уменьшились. Селмевит способствовал нормализации структуры тромбоцитарной мембраны.
Активность ионтранспортных энзимов у больных группы сравнения близка к таковой у здоровых лиц, а активность фосфолипазы А2 повышена и такой же осталась после лечения. У больных основной группы после курса терапии, включавшей селмевит, уменьшились активность Na+-, К+, Mg+-ATOa3bi, достоверно увеличилась активность Са2 -АТФазы. Активность фосфолипазы, уменьшилась, но не достигла, однако, нормального уровня А,. Видимо, введение селмевита в комплекс терапевтических мероприятий активирует транспорт ионов, участвующих в поддержании физиологического уровня осмоляль-ности тромбоцитов. Ограничение роста активности фосфолипазы, наблюдаемое при назначении селме-
вита, позитивное явление: у больных СД этот энзим активирован, что и обусловливает активацию тромбоцитов при диабете [2] и их переход в состояние рефрактерное™ [11]. Ограничение активности энзима способствует нормализации процессов трансформации полиненасыщенных жирных кислот в тромбоцитарных мембранах [15].
У больных СД (табл. 2) снижена общая свертывающая активность крови (удлинены АВР и АЧТВ), имеется наклонность к гипофибриногене-
Тоблицо 2
Индикаторы ВТФ, общая свертываемость крови, прокоагулянтная активность тромбоцитов,
ЛПО и антиоксидантный потенциал в них у больных, получавших плацебо или селмевит
Показатель Здоровые доноры Больные СД ¡
плацебо селмевит
АВР, с 68,1+0,3 123,3±2,3 121,5±1,3 122,2±3,2 89,1 ±0,9*
АЧТВ,с 43,2±0,8 63,2±1,2* 62.4±1.4* 61,2± 1,2 * 46.711.1 +
ФГ, г/л 3,8±0,2 3,5±0,7 3,2±0,4 3,1 ±0,7 2,9±0,3*
Количество тромбоцитов, тыс/ мкл 241 ±6,7 181 ±5,0* 185±4,2* 185±6,4* 249±7,1 +
Спонтанная агрегация, % 4,3±0,03 3,3±0,02* 3,4±0,01 * 3.31 0,08* 4,110,04+
АДФ-агрегация, % 58.3± 1,3 46,2±1,4* 49.0±1,6* 45,8±1,7* 55.3±1.4+
ОКАТ, % 89.4±1.6 77.3±1.5* 78.4±1.7* 77.21.2.0* 84.911.1 +
ПДФ, мг% 15.1 ±0.4 17.9±0.2* 18.1 ±0.3 * 18.2±0.3* 15.9±0.2+
РКМФ, мкг/мл 24,3±0,6 26.9±0.4* 27,0±0,3* 27,8±0,4* 23,1 ±0,1 +
Р-Д, мкг/мл 0.22±0.011 0.30±0.002* 0.28±0.016* 0.32±0.016* 0.25±0.011 +
ДК, А/мг ЯП 0.099±0,001 0.113±0,002* 0.09710,003* 0.116±0,003* 0.076±0,002*+
ТБК, ед/мгЛП 0.38±0,001 0.47±0,003* 0.45±0,001 * 0.41 ±0,003* 0.29±0,003*+
ПИ, мин/мл 45.7±1.1 38.7±1.0* 39.0±0.8* 36.9±1.0* 52.911.1*+
СО, мм3/мин Э.721 ±0.01 0.89±0.01 0.87±0.02* 0.86±0.02* 0.71 ±0.04+
СОД уел. ед. торм/ мг белка 3.56±0.14 3,99±0,11 * 3,81 ±0,14* 3,94±0,11 * 3,2 НО, 17*+
Каталаза, мкмоль/мин на 1 мг белка 0.78±0.02 0,99±0,03* 0,93±008* 0,91 ±0,02* 0,62±0,02*+
Г-6-ФДГ, мл.ед.акт/мг белка 0.24±0.3 0,21 ±0,5 0,20±0,5 0,2010,02 0,2110,07
Примечание: верхняя строка - до лечения, нижняя - после лечения; * достоверные различия в сравнении с контролем; + достоверные различия у больных до и после лечения.
39
■
Сахарный диабет
Лечении
мин, снижено количество тромбоцитов. Общая коагуляционная активность тромбоцитов снижена, уменьшена их способность к агрегации (снижены СА- и АДФ-агрегация). Наряду с этим увеличено содержание индикаторов взаимодействия тромбин-фибриноген (ПДФ, РКМФ и D-димеров). Это свидетельствует об ускорении процесса внутрисо-судистого свертывания крови, приводящего к вторичной гипокоагуляции, что подтверждается снижением фибриногенемии и числа тромбоцитов. Не противоречит этому и снижение коагуляционной активности тромбоцитов, которое может рассматриваться как следствие их рефрактерности [4].
Применение плацебо не изменило степени выявленных сдвигов, а применение селмевита ограничило интенсивность изменения всех показателей, отражающих состояние биохимического и тромбо-цитарного компонентов гемостаза, приблизив их значения к норме.
У больных СД ускорена ЛПО (увеличено содержание липопероксидов — ДК и ТБК-продуктов) и
Лите
1. Асатиани B.C., Новые методы биохимической фотометрии. - М., 1965.
2. Балаболкин М.И. Сахарный диабет. - М: Медицина, 1994
3. Бышевский А.Ш., Умутбаева М.К., Алборов Р.Г. Связь гемостаза с пе-рекисным окислением липидов. М.:Медицинская книга, 2003.
4. Бышевский А.Ш., Галян С.Л., Вакулин A.A. и др. // Сибирский мед. жур., 1999. - 1 4. - 3-4. - с. 27-30
5. Бышевский А.Ш., Соловьев В.Г., Селиванова И.В.Патент № 2061953 Способ количественного определения общей коагуляционной активности тромбоцитов. - 1996.
6. Бышевский А.Ш., Мухачева И.А., Шафер В.М. A.C. № 1659855,
1 991 «Способ определения содержания продуктов деградации фибрина в плазме»
7. Габбасов З.А., Попов Е.Г.и др.// Лаб. дело, 1 989. - С. 15-18
8. Крылов В.И., Виноградов А.Ф., Еремеева С.И. // Лаб. Дело, 1975. -№4.-С. 205-206.
9. Мирсаева Г.Х., Ишметова Р.Л., Камилов Ф.Х. и др. // Тромбы, кровоточивость и болезни сосудов, 2002. - 1. - Приложение № 1. - С.92-93
1 0. Момот А.П., Елыкомов В.А.„ Баркаган З.С. // Клин, лабор. диагно-
снижен антиоксидантний потенциал — увеличена скорость окисления (СО) и укорочен период индукции (ПИ), компенсаторно активированы энзимы антиоксидантной защиты (СОД и каталаза при неизмененной активности Г-6-ФДГ). Это согласуется с изменениями гемостаза, активность которого растет при активации ЛПО, и снижением антиоксидантного потенциала [3, 4, 11]. У больных, получавших плацебо, к концу терапии видимых сдвигов в гемостазе и ЛПО не произошло. У больных, получавших селмевит, значительно ограничилась липопероксида-ция и возрос антиоксидантный потенциал (снижені уровень липопероксидов, приблизились к контролю] показатели антиоксидантного потенциала).
Таким образом, селмевит на фоне обычной терапии больных СД, протекающим без осложнений.] наряду с удовлетворительным клиническим эффектом положительно влияет на функциональные свойства тромбоцитов, в частности, на их гемокоагуля-| ционную активность, за счет торможения ЛПО и[ повышения антиоксидантного потенциала.
стика, 1999. - №4. -С. 17-20 1 1. Нелаева А.А., Бышевский А.Ш., Алборов Р.Г. и др. // Сахарный диабет, 2003. - 3. - С. 10-13
1 2. Субботина Т.Н., Титова Н.М., Савченко А.А. и др. Сибирский мед. журнал, 2002. - 6. - С.33-38
1 3. Удалов Ю.Ф. Бышевский А.Ш., Дараган А.Г.и др. // Матер, научнопрактической. конф. «Планета и здоровье». - М., 2000. - С. 130-131 1 4. Ушкалова В.Н., Иоанидис Н.В., Деева З.М. и др. // Лаб. Дело, 1987. -6.-С. 446-460.
1 5. Gawaz М.P. Blood Platelets. - Stuttgart; New York: Time, 2001 1 6. Manjoub Т., Kortas М., Bouslama A. et al. Diabete et aggregation pla-quetaire. // Cah. techn. biol.- 1 992.-7. - 29.- P. 29-39.
1 7. Reilila М., McDonald E., Norman S. et al. Standartized method for determination of human erythrocyte membrane adenosine triphosphatases // Analytical Biochemistry. - 1 982.- Vol. 124. - P. 1 9-26.
1 8. Zieve L., Vogel W.C. Beschtimungsverfahren blutphospholipase /J. Lab. Cliin. Merd., 1 961. - 57. - S. 586-591
40
3/2\
