CC BY
58
УДК 615.32: 612.017.1
В.Б. Хобракова1, С.М. Николаев1, И.Г. Козлов2, С.И. Павлова2
ВЛИЯНИЕ РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА «ФИТОПРОСТ» НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ ФАГОЦИТОВ
1Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, Улан-Удэ 2Российский государственный медицинский университет, Москва
В опытах на мышах линии F1 (СВАхС57В1/6) установлена иммуномодулирующая активность сухого экстракта «Фитопрост.». Показано, что испытуемое средство в экспериментально-терапевтической дозе 150 мг/кг способно ослаблять супрессивное действие цитостатика азатиоприна на фагоцитоз перитонеальных макрофагов. Исследуемое средство не изменяет, показатели фагоцитоза интактных мышей. Кроме того, «Фитопрост» не подавляет, поглотительную активность фагоцитов периферической крови, человека и. не изменяет, количество клеток, продуцирующих активные формы кислорода в ответ, на ФМА; однако снижает, интенсивность окислительного «взрыва».
Ключевые слова: сухой экстракт «Фитопрост», иммунитет, фагоцит, азатиоприн
THE INFLUENCE OF THE PLANT REMEDY «PHYTOPROST» ON THE FUNCTIONAL ACTIVITY OF PHAGOCYTES
V.B. Khobrakova1, S.M. Nikolayev1, I.G. Kozlov2, S.I. Pavlova2
1Institute of General and Experimental Biology of SD RAS, Ulan-Ude 2Russian State Medicinal University, Moscow
The mmunomodulating activity of the dry extract«Phytoprost» has been established, in experiments on the F1 (СВАxC57Bl/6) mice. The extract «Phytoprost» in experimental-therapeutic dose 150 mg/kg can relax supres-sive action of azatioprin on phagocytosis of the peritoneal macrophages. The extract does not change indices of the phagocytosis in intact mice. Besides «Phytoprost» does not suppress the absorbing activity of phagocytes of human peripheral blood and does not change quantity of the cells producing active forms of oxygen in reply to FMA; however reduces intensity of the oxidative «explosion».
Kew words: the dry extract «Phytoprost», immunity, phagocyte, azatioprin
В связи с широким распространением имму-нодефицитных состояний актуален поиск новых эффективных иммуномодуляторов, обладающих мягким действием и способных воздействовать только на измененные звенья иммунной системы [12, 13]. В этом плане перспективными являются лекарственные средства растительного происхождения [1, 8, 10]. Особый интерес вызывают многокомпонентные средства тибетской медицины, высокая фармакотерапевтическая эффективность которых обусловлена гармоничным сочетанием содержащихся биологически активных веществ в исходных видах растительного сырья [7].
В соответствии с вышеизложенным разработано новое многокомпонентное растительное средство в форме сухого экстракта, условно названное «фитопрост», полученного из травы горца птичьего (Polygonum aviculare L.), листьев толокнянки обыкновенной (Arctostaphylos uva ursi L.) и ортосифона тычиночного (Orthosiphon stamineus Benth.), цветков ноготков лекарственных (Calendula officinalis L.) и корней солодки уральской (Glycyrrhiza uralensa Fisch.). Данное средство обладает выраженным простатопротекторным свойством, а также оказывает диуретическое, противовоспалительное, анальге-зирующее, антибактериальное и антиоксидантное действия при лечении и профилактике хронического простатита. Не отмечено отрицательного влияния на функциональную активность сердечно-сосудистой, нервной и пищеварительной систем [2, 6].
Ранее нами сообщалось об иммуномодулирующем действии исследуемого средства в отношении клеточного и гуморального звеньев иммунного ответа при экспериментальной азатиоприновой иммуносупрессии [14]. В данной работе показано, что испытуемый экстракт способен ослаблять супрессивное действие цитостатика на клеточноопосредованную иммунную реакцию (гиперчувствительность замедленного типа) и антителогенез. Кроме эффекторных клеток, немаловажную роль в иммунном ответе играют фагоциты. В связи с этим, представляет интерес исследовать влияние данного средства на функциональную активность фагоцитов.
Целью настоящего исследования явилось определение влияния многокомпонентного растительного средства — сухого экстракта «Фитопрост» на функциональную активность фагоцитов.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Эксперименты проведены на мышах-самцах линии Б1 (СВАхС57В1/6) массой 18 — 20 г. Действие исследуемого средства на фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов было изучено на интактных животных, а также животных, находящихся в состоянии иммунодепрессии, вызванной цитостатиком азатиоприном, который вводили животным в дозе 50 мг/кг перорально 1 раз в сутки в течение 5 дней [3].
Сухой экстракт «Фитопрост» вводили 1-й опытной группе на фоне азатиоприна и 2-й опытной
группе интактных мышей в экспериментальнотерапевтической дозе 150 мг/кг перорально 1 раз в сутки в течение 14 дней. Интактная и контрольная группы животных получали воду очищенную по аналогичной схеме.
Состояние макрофагального звена иммунного ответа оценивали в реакции фагоцитоза перитонеальных макрофагов в отношении частиц коллоидной туши. Оптическую плотность лизата клеток перитонеального экссудата, отражающую количество туши, поглощенной перитонеальными макрофагами, определяли при длине волны 620 нм [9].
Влияние сухого экстракта «Фитопрост» на поглотительную активность фагоцитов оценивали методом цитофлуориметрии на проточном ци-тофлюориметре Cytomics FC 500 фирмы Beckman Coulter (США), используя в качестве объекта для фагоцитоза St. aureus, меченный зеленым флюорохромом ФИТЦ (флюоресцеин-5-изотиоцианат). При этом вычисляли фагоцитарный индекс — количество фагоцитов, поглотивших меченные микроорганизмы, к общему числу фагоцитов [5].
Влияние сухого экстракта «Фитопрост» на продукцию активных форм кислорода оценивали цитофлуориметрически в тесте кислородного «взрыва», индуцированного классическим стимулятором — форболмиристат ацетатом (ФМА) с флуорогенным субстратом дигидрородамином — 123 (ДГР-123), на проточном цитолфлюориметре Cytomics FC 500 фирмы Beckman Coulter (США). Определяли процент активированных нейтрофи-лов, а также показатели спонтанной и стимулированной интенсивности флуоресценции [15].
Полученные результаты обработаны статистическим методом с помощью критерия Стьюдента [4].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
При исследовании влияния сухого экстракта «Фитопрост» на фагоцитарную активность пе-
ритонеальных макрофагов интактных мышей в отношении частиц коллоидной туши установлено, что данное средство не вызывает значимого изменения фагоцитарного индекса по сравнению с данными в интактной группе. А при введении данного средства животным с иммунодефицитом наблюдали увеличение фагоцитарного индекса в 1,4 раза по сравнению с данными в контрольной группе (табл. 1).
При оценке влияния исследуемого средства на поглотительную активность фагоцитов установлено, что «Фитопрост» в концентрации 150 мкг/ мл не оказывает влияния на количество фагоцитирующих нейтрофилов периферической крови человека. Фагоцитарные индексы в контроле и при использовании «Фитопроста» отличались недостоверно (рис. 1).
При исследовании влияния «Фитопроста» на продукцию активных форм кислорода установлено, что указанный экстракт в концентрации 150 мкг/мл также значимо не изменял процент ФМА-активированных нейтрофилов, продуцирующих активные формы кислорода (рис. 2). Однако использование «Фитопроста» достоверно снижает интенсивность флуоресценции ней-трофилов в 1,5 раза по сравнению с введением в систему классического стимулятора ФМА, индуцирующего кислородный «взрыв» (табл. 2). Данный эффект может быть обусловлен антиок-сидантными свойствами экстракта «Фитопрост» благодаря преимущественному содержанию в нем веществ фенольной природы [6]. Кроме того, есть данные, что вещества полифеноль-ной структуры могут ингибировать активацию NADPH-оксидазы [17].
Поскольку «Фитопрост» достоверно не подавлял, но и не стимулировал в вышеописанных моделях функции фагоцитов, можно предположить, что эффект данного средства мог быть обусловлен прямой антибактериальной активностью [6].
Таблица 1
Влияние сухого экстракта «Фитопрост» на фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов
Группы животных Фагоцитарный индекс, оптическая плотность, уел. ед.
Интактная, п = 10 0,135 і 0,012
Контрольная (азатиоприн), п = 10 0,065 і 0,004
Первая опытная (азатиоприн + экстракт «Фитопрост»), п = 10 0,088 і 0,005*
Вторая опытная (экстракт «Фитопрост»), п = 10 0,121 і 0,011
Примечание: п - количество животных в группе, * -разница достоверна при р < 0,05 по сравнению с контролем.
Таблица 2
Влияние сухого экстракта «Фитопрост» на интенсивность флуоресценции фагоцитов
№ п/п Группы Интенсивность флуоресценции, у.е.
1 Контроль (спонтанная флуоресценция) 3,60 і 0,3
2 ФМА (стимулированная флуоресценция) 11,23 і 0,9
3 ФМА + «Фитопрост» 7,51 і 0,012*
Примечание: * - разница достоверна при р < 0,05 по сравнению с данными во 2-й группе.
Рис. 1. Влияние сухого экстракта «Фитопрост» на поглотительную активность фагоцитов периферической крови человека: А - контроль; Б - «Фитопрост» (в % - нейтрофилы, фагоцитирующие Staph. aureus).
Таким образом, сухой экстракт «Фитопрост» способен ослаблять супрессивное действие азатио-прина на фагоцитоз перитонеальных макрофагов. Исследуемое средство не изменяет показатели фагоцитоза интактных животных. Кроме того, «Фитопрост» не подавляет поглотительную активность фагоцитов периферической крови человека и не изменяет количество клеток, продуцирующих активные формы кислорода в ответ на ФМА, однако снижает интенсивность окислительного «взрыва». Эффективность исследуемого средства обусловлена совокупным действием комплекса биологически активных веществ, преимущественно, флавонои-дами, дубильными веществами, полисахаридами, тритерпеновыми сапонинами, эфирными маслами, витаминами, обладающими выраженными иммуномодулирующими свойствами [1, 8, 11, 16].
Полученные данные позволяют заключить, что сухой экстракт «Фитопрост» является эффективным иммуномодулирующим средством, что аргументирует целесообразность его применения в комплексном лечении и профилактике иммуно-дефицитных состояний.
ЛИТЕРАТУРА
1. Иммуномодуляторы растительного происхождения / А.Д. Бакуридзе, М.Ш. Курцикидзе,
В.М. Писарев и др. // Хим.-фармац. журн. — 1993. - № 8. - С. 43-47.
2. Клиническое изучение биологически активной добавки растительного происхождения гранул «Фитопрост» / А.А. Маркарян, Р.Н. Аляутдин, Т.Д. Даргаева и др. // Российский мед. журнал. — 2003. - № 6. - С. 42-44.
3. Лазарева Д.Н. Стимуляторы иммунитета / Д.Н. Лазарева, Е.К. Алехин. - М., 1985. -256 с.
4. Лакин Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. - М., 1990. - 352 с.
5. Мазуров Д.В. Оценка поглощения бактерий гранулоцитами и моноцитами периферической крови методом проточной цитометрии / Д.В. Мазуров, К.Ф. Хамидуллина, Б.В. Пинегин // Иммунология. - 2000. - № 1. - С. 57-61.
6. Мантатов В.В. Влияние комплексного средства «Фитопрост» на течение экспериментального
Рис. 2. Влияние сухого экстракта «Фитопрост» на продукцию активных форм кислорода в тесте ФМА-индуцированного кислородного «взрыва»: А - контроль (спонтанная флюоресценция); Б - ФМА (стимулированная флюоресценция); В - ФМА + «Фитопрост» (в % - нейтрофилы, продуцирующие активные формы кислорода).
хронического простатита / В.В. Мантатов // Авто-реф. дис. ... к.м.н. — Улан-Удэ, 1999. — 23 с.
7. О рациональном подходе к разработке многокомпонентных лекарственных препаратов / С.М. Николаев, Т.Д. Даргаева, Г.И. Российская и др. — Улан-Удэ, 1986. — 48 с.
8. Растения, стимулирующие иммунитет / Д.Н. Лазарева, В.В. Плечев, Т.В. Моругова, Л.И. Самигуллина. — Уфа, 2005. — 96 с.
9. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р.У. Хабриева. — М., 2005. — С. 80.
10. Токешова Л.Е. Лекарственные растения и их препараты, используемые в качестве иммуномодуляторов / Л.Е. Токешова // Materials of the II International Conference «Natural Products: Chemistry, Technology and Medicinal Perspectives». — Алматы, 2007. - С. 161.
11. Толкачев О.Н. Новые растительные полифенолы - активные противовирусные агенты и иммуномодуляторы / О.Н. Толкачев, Л.Д. Шипу-лина, О.П. Шейченко // Int. J. Immunorehabil. — 1999. — № 14. — С. 9.
12. Хаитов Р.М. Основные принципы иммуномодулирующей терапии / Р.М. Хаитов, Б.В. Пине-гин // Аллергия, астма и клиническая иммунология. — 2000. — № 1. — С. 9 — 16.
13. Хаитов Р.М. Современные иммуномодуляторы. Классификация, механизм действия / Р.М. Хаитов, Б.В. Пинегин // Российский аллергологический журнал. — 2005. — № 4. —
С. 30 — 43.
14. Хобракова В.Б. Влияние растительного средства «Фитопрост» на показатели клеточного и гуморального звеньев иммунного ответа / В.Б. Хо-бракова, С.М. Николаев // Сб. тр. науч.-практич. конф. «Байкальские чтения — 4. Разгрузочнодиетическая терапия и традиционная медицина». — СПб., 2010. — С. 219 — 222.
15. A fast easy method to determing the production of reactive oxygen intermediates by human and murine phagocytes using dihydrorodamine 123 / A. Emmendorffer, M. Hecht, M.-L. Lohmann-Mattes, J. Roester // J. of Immunol. Meth. — 1990. — Vol. 131. — P. 269 — 275.
16. Kraus J. Immunomodulating effects of polysaccharides from medicinal plants / J. Kraus, G. Franz // Chem. Pharm. Bull. — 1992. — Vol. 40, N 2. — P. 314 — 317.
17. Nishikawa H. Ingibition of NADPH oxidase subunits translocation by tea catechin EGCG in mast cell / H. Nishikawa, Wakano, S. Kitani // Biochem Biophys Res Commun. — 2007. — 362 (2). — P. 504 — 509.
Сведения об авторах
Хобракова Валентина Бимбаевна - к.б.н., с.н.с. лаборатории экспериментальной фармакологии Института общей и экспериментальной биологии СО РАН, 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6, Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН; тел: (3012) 43-47-43, факс: (3012) 43-30-34, e-mail: [email protected].
Николаев Сергей Матвеевич - д.м.н., проф., зав ОБАВ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН, 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6, Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН; тел: (3012) 43-34-63, факс: (3012) 43-30-34, e-mail: [email protected].
Козлов Иван Генрихович - д.м.н. проф., зав. кафедрой фармакологии Российского государственного медицинского университета, 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1, Российский государственный медицинский университет тел.: (495) 434-62-12.
Павлова Светлана Ивановна - к.м.н., ст. преподаватель кафедры фармакологии Российского государственного медицинского университета, 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1, Российский государственный медицинский университет, тел.: (495) 434-62-12.
