CC BY
31
УДК 612.017.1:616-097+615.017:616.079
ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА АНТИТЕЛ К ГАММА-ИНТЕРФЕРОНУ И CD4 НА ПОКАЗАТЕЛИ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ У ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ПАЦИЕНТОВ
А. В. Стрыгин12, А. О. Стрыгина12, Е. И. Морковин12
1Волгоградский государственный медицинский университет, 2Волгоградский медицинский научный центр
В данной работе представлены результаты исследования влияния препарата антител к гамма-интерферону и CD4 на клинико-лабораторные показатели, характеризующие состояние иммунной системы у ВИЧ-инфицированных пациентов. Обнаружено, что в сочетании со стандартной антиретровирусной терапией препарат антител способствовал увеличению количества CD3+ и CD4+ клеток, а также стимулировал секрецию гамма-интерферона и интерлейки-нов IL-2 и IL-4.
Ключевые слова: антитела, препарат на основе антител, ВИЧ, иммунный статус.
EFFECTS OF HUMAN y-INTERFERON AND CD4 GLYCOPROTEIN ANTIBODIES ON THE IMMUNE SYSTEM INDICES IN HIV-INFECTED PATIENTS
A. V. Strygin12, A. O. Strygina12, E. I. Morkovin12
Volgograd State Medical University, SI Volgograd Medical Scientific facility
The present article provides the findings of the study of the impact of human y-interferon and CD4 glycoprotein antibodies on the immune system of HIV-infected patients. The combined administration of the standard antiretroviral therapy and the antibodies has been found to result in an increase in CD3+ and CD4+ cells. These changes were associated with the stimulation of y-interferon, IL-2 and IL-4 secretion.
Key words: antibodies, antybody-based medicine, HIV, immune status.
Подавление репликации вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) при помощи антиретровирусной терапии (АРВТ) и увеличение ее доступности позволили улучшить прогноз у ВИЧ-инфицированных пациентов [6, 7, 14, 15], однако смертность от оппортунистических инфекций (ОИ) остается достаточно высокой. В ряде клинических исследований была продемонстрирована необходимость прекращения первичной и вторичной специфической профилактики ОИ из-за высокого риска побочных эффектов [8]. Кроме того, излишняя нагрузка лекарственными средствами увеличивает потенциал лекарственной токсичности, риск лекарственных взаимодействий, выработку резистентности у микроорганизмов, что увеличивает стоимость лечения [9, 10, 12, 13]. Необоснованное назначение профилактических препаратов приводит к снижению комплаентности пациентов вследствие полипрагмазии и лекарственной непереносимости [8].
В последние годы накоплены факты, демонстрирующие свойства инновационных отечественных препаратов на основе антител облегчать течение различных вирусных инфекций, что позволяет допустить их применение в качестве средств профилактики и лечения у ВИЧ-инфицированных в составе комбинированной терапии [1, 2, 3, 4, 5, 16].
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Обоснование возможности применения препарата антител к у-интерферону и гликопротеину CD4 (ПАТ) в комплексной терапии ВИЧ-инфекции на основании клинико-лабораторных показателей состояния иммунной системы.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Клинические и лабораторные исследования проводились в Волгоградском государственном медицинском университете на базе ГКУЗ «Волгоградский областной центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями» в период с 2012 по 2016 гг. Работа выполнялась в рамках рандомизированного плацебо-контролируемого проспективного исследования в параллельных группах. Проведение исследования было одобрено Региональным Независимым Этическим Комитетом (ГУ Волгоградский Медицинский Научный Центр) (регистрационный номер ^В 00005839 IORG 0004900 (OHRP)): протоколы № 63-2012 от 26 октября 2012 г и №82-2014 от 20 июня 2014 г.). Исследование включало 76 ВИЧ-инфицированных пациентов (возраст от 18 до 47 лет, 37 % женщин) с ВИЧ-инфекцией, рандомизация которых на группы в соответствии со схемой терапии проводилась по таблице случайных чисел (табл.).
Исследуемые группы
Схема терапии Количество
АРВТ 20
АРВТ + ПАТ 19
ПАТ 18
Плацебо* 19
*Для данных пациентов предполагалось исключение из исследования при обнаружении клинически значимых признаков ухудшения состояния.
В работу не включались пациенты с тяжелыми поражениями печени, вирусным гепатитом С, тяжелыми сопутствующими заболеваниями в стадии обострения, беременные женщины, а также лица, принимающие внутривенно наркотические средства. В случае невыполнения рекомендаций по регулярному приему препарата и своевременному обследованию, а также при нежелании больного продолжать лечение, он исключался из исследования.
Продолжительность исследования составляла 3 месяца. Лечение пациентов осуществлялось в соответствии со стандартами терапии ВИЧ-инфекции, предполагающими применение двух нуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы — зидовудин (300 мг, 2 р./сут.) и ламивудин (150 мг 2 р./сут.) — и ненуклео-зидного ингибитора обратной транскриптазы — эфави-ренз (600 мг 1 р./сут.). Препарат антител к у-интерферо-ну и гликопротеину CD4 (ПАТ) назначался 2 раза в день сублингвально до еды по две таблетки на прием до полного растворения.
Изучение состояния иммунной системы пациентов проводилось до начала приема препаратов и по окончании курса. Оценивали субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови (CD3, CD4, CD8) и концентрацию цитокинов (IL-2, IL-4, у-INF). Фенотипиро-вание циркулирующих лимфоцитов выполняли с помощью проточного цитофлюорометра FACStaunt (Becton Dickinson, США). Концентрацию цитокинов определяли с использованием тест-систем «BioSource» (Invitrogen,
США) и многоканального анализатора BioRad (США). Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием программного обеспечения Statsoft Statistica 8.0 и GraphPad Prism 5.0. Достоверность различий оценивалась при помощи двухфак-торного дисперсионного анализа с пост-хок тестом Нью-мена-Кеулса.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В ходе исследования значительных изменений в общем содержании Т-лимфоцитов у ВИЧ-инфицированных пациентов не выявлено. В группе, получавшей комбинацию стандартной АРВТ и ПАТ, произошло достоверное p < 0,01, рис. 1 А) увеличение количества CD3+-клеток; при этом достоверных различий по исходному содержанию CD+-клеток не было выявлено (p > 0,2 в однофакторном дисперсионном анализе).
Содержание CD4+-лимфоцитов является одним из наиболее значимых показателей в терапии ВИЧ-инфекции, поэтому его увеличение может отражать успешность проводимой терапии, поскольку сам ВИЧ при проникновении в клетку связывает CD4 и хемокиновый рецептор, расположенные на поверхности Т-хелперов. В нашем исследовании было выявлено достоверное повышение содержания Т-хелперов у пациентов, получавших ПАТ и комбинацию АРВТ с ПАТ, как по отношению к исходным значениям (p < 0,001, рис. 1 Б), так и в сравнении с результатами АРВТ (р< 0,01).
В
CD3+
.V
• i ■ s - * v^
Й ¿* *? Й
: • * /а тТ v
CD8+
V
*p < 0,01; ***p < 0,001.
1000-
Y'Г 800-
ч 600-
г 2 400-
200-
М U и
и ■ *
1.0
0.80,60.40.2'
0.0
CD4+
V А фн
И\' v'
CD4/CD8
V
V
«** Г
t
if v
• АРВТ
■ АРВТ-ПАТ
А ПАТ
▼ Плацебо
Рис. 1. Динамика субпопуляций лимфоцитов в периферической крови. Данные представлены в виде М ± т; выполнен двухфакторный дисперсионный анализ с пост-хок тестом Ньюмена-Кеулса; сравниваемые группы данных обозначены горизонтальными линиями
В группе, получавшей АРВТ, увеличение CD4+-лим-фоцитов не было достоверным, а в группе, получавшей плацебо, напротив, произошло статистически значимое (р < 0,001) снижение данного показателя. Данные изменения свидетельствуют о том, что препарат антител к у-интерферону человека и гликопротеину CD4 способен стимулировать клеточное звено иммунитета, увеличивая популяцию Т-хелперов как при комбинированной с АРВТ, так и при монотерапии. Несмотря на изменения, затронувшие Т-хелперы, популяция Т-киллеров практически не изменилась — достоверных изменений выявить не удалось (рис. 1 В).
В то же время изменилось соотношение CD4/CD8, являющееся интегральным показателем, характеризующим состояние иммунной системы человека. Исходно во всех группах больных данный показатель был снижен более чем в 2 раза по сравнению с нормой. Изменения, произошедшие на фоне терапии, соотносятся с изменениями содержания CD4+-лимфоцитов, описанными выше: в группах пациентов, у которых отмечалось повышение CD4+-лимфоцитов, происходило увеличение соотношения CD4/CD8 (рис. 1 Г). Эти изменения наблюдались в группах АРВТ (р < 0,01), АРВТ и ПАТ (р < 0,001), и в группе, получавшей монотерапию ПАТ (р < 0,01). В группе, получавшей плацебо, напротив, произошло достоверное снижение этого показате-
ля (р < 0,001). Увеличение иммунорегуляторного индекса в группе, получавшей АРВТ в сочетании с ПАТ, было достоверным как по отношению к исходным показателям, так и по отношению к другим группам (р < 0,01 и р < 0,001 для плацебо).
При исследовании концентрации у-IFN у ВИЧ-инфицированных пациентов было выявлено достоверное увеличение данного показателя в группе, получавшей АРВТ в сочетании с ПАТ, как по отношению к исходным значениям, так и в сравнении с группой, получавшей плацебо (р < 0,01, рис. 2 А). Изменения, произошедшие в других группах, не были достоверными, несмотря на видимую тенденцию в отношении монотерапии ПАТ. Аналогичным образом изменялось содержание цитокинов ^-2 и ^-4: статистически значимые изменения отмечены в группе, получавшей АРВТ в сочетании с ПАТ (р < 0,05, рис. 2 Б, В). При этом изменения коэффициента уIFN/IL-4, отражающего соотношение между клетками, секретирующими уIFN, и клетками, сек-ретирующими ^-4, не были статистически значимыми ни в одной из исследуемых групп (рис. 2 Г). Данные результаты могут свидетельствовать о недостаточной выраженности влияния монотерапии ПАТ на концентрации цитокинов в крови ВИЧ-инфицированных больных, что, однако, изменяется при сочетании терапии ПАТ со стандартной АРВТ.
В
Ю-]
86 4 20-
у1К\ ••■•• _
С *
4
1Ь-2
- к
М 5* Ч II
545 3' _
= 210-
ч * ф 44 ¿А т т * тт
1 1 1 1
11-4 *
• ■ ■
■ >
II Т f ?? й а f ;
V V у V
*р < 0,05, Рис.
*р < 0,01.
20-
15-
10-
V
V
V
у1ГЖЬ-4
15-1
10-
5-
И к
V
* р
<>* <>*
• АРВТ
■ АРВТ-ПАТ
А ПАТ
▼ Плацебо
2. Динамика концентраций цитокинов в плазме крови. Данные представлены в виде М ± т; выполнен двухфакторный дисперсионный анализ с пост-хок тестом Ньюмена-Кеулса; сравниваемые группы данных обозначены горизонтальными линиями
I^mpfö ©©СаГГГМЩ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В ходе представленной работы было обнаружено, что в сочетании со стандартной антиретровирусной терапией препарат антител к у-интерферону и гликопро-теину CD4 человека способствовал увеличению количества CD3+ и CD4+ клеток, а также стимулировал секрецию гамма-интерферона и интерлейкинов IL-2 и IL-4.
Представленные результаты позволяют утверждать, что изучаемый препарат способен оказывать им-муномодулирующее действие при моноинфекции ВИЧ, как в комбинации со стандартной АРВТ, так и при монотерапии.
ЛИТЕРАТУРА
1. Стрыгин А. В. Влияние антител к гамма-интерферону на показатели клеточного звена иммунитета и ци-токиновый профиль ВИЧ-инфицированных больных / А. В. Стрыгин, П. П. Несмиянов, А. О. Стрыгина // Российский аллергологический журнал. — 2012. — № 1. — С. 298—299.
2. Стрыгин А. В. Влияние препарата «Анаферон» на цитокиновый профиль ВИЧ-инфицированных пациентов / А. В. Стрыгин, В. И. Петров, П. П. Несмиянов, Б. Ю. Гумилевский // Аллергология и иммунология. — 2009. — Т. 10, № 2. — С. 241.
3. Стрыгин А. В. Повышение эффективности лечения ВИЧ-инфицированных больных с помощью антител к гамма-интерферону: автореф. дис. ... к. м. н. — Волгоград, 2010.
4. Эпштейн О. И. Механизмы иммунотропных свойств потенцированных антител к человеческому интерферо-ну-гамма / О. И. Эпштейн, Ю. П. Бельский, Е. Ю. Шерстобоев и др. // Бюлл. экспер. биол. — 2001. — № 3. — С. 34—36.
5. Эпштейн О. И. Фармакология сверхмалых доз антител к эндогенным регуляторам функций / О. И. Эпштейн, М. Б. Штарк, А. М. Дыгай и др. // РАМН. — 2005. — С. 131—167.
6. Braitstein P. Mortality of HIV-1-infected patients in the first year of antiretroviral therapy: comparison between low-income and high-income countries / P. Braitstein, M. W. Brinkhof, F. Dabis, et al. // Lancet. — 2006. — Vol. 367. — P. 817—824.
7. CDC. 1999 US Public Health Service / Infectious Diseases Society of America guidelines for the prevention of opportunistic infections in persons infected with human immunodeficiency virus // MMWR. — 1999. — Vol. 48. — P. 1—49.
8. Dworkin M. S. Risk for preventable opportunistic infections in persons with AIDS after antiretroviral therapy
increases CD4± T lymphocyte counts above prophylaxis thresholds / M. S. Dworkin, D. L. Hanson, J. E. Kaplan, et al. // J. Infect. Dis. — 2000. — Vol. 182. — P. 611—615.
9. Furrer H. Discontinuation of primary prophylaxis against Pneumocystis carinii pneumonia in HIV-1-infected adults treated with combination antiretroviral therapy. Swiss HIV Cohort Study / H. Furrer, M. Egger, M. Opravil, et al. // N. Engl. J. Med. — 1999. — Vol. 340. — P. 1301—1306.
10. Green H. A prospective multicentre study of discontinuing prophylaxis for opportunistic infections after effective antiretroviral therapy / H. Green, P. Hay, D. T. Dunn, et al. // HIV Med. — 2004. — Vol. 5. — P. 278—283.
11. Hermsen E. D. Discontinuation of Prophylaxis for HIV-Associated Opportunistic Infections in the Era of Highly Active Antiretroviral Therapy / E. D. Hermsen, Heather E. Wynn, Jocarol Mcnabb // American Journal of Health-System Pharmacy. — 2004. — Vol. 61. — P. 245—256.
12. Lopez Bernaldo de Quiros J. C. A randomized trial of the discontinuation of primary and secondary prophylaxis against Pneumocystis carinii pneumonia after highly active antiretroviral therapy in patients with HIV infection / Lopez Bernaldo de Quiros J. C., Miro J. M., et al. // N. Engl. J. Med. — 2001. — Vol. 344. — P. 159—167.
13. Mussini C. Discontinuation of primary prophylaxis for Pneumocystis carinii pneumonia and toxoplasmic encephalitis in human immunodeficiency virus type I-infected patients: the changes in opportunistic prophylaxis study / C. Mussini, P. Pezzotti, A. Govoni, et al. // J. Infect. Dis. — 2000. — Vol. 181. — P. 1635—1642.
14. Palella F. J. Jr. HIV Outpatient Study Investigators. Declining morbidity and mortality among patients with advanced human immunodeficiency virus infection / F. J. Palella Jr, K. M. Delaney, A. C. Moorman, et al. // N. Engl. J. Med. — 1998. — Vol. 338. — P. 853—860.
15. Powderly W. Prophylaxis for opportunistic infections in an era of effective antiretroviral therapy // Clin. Infect. Dis. — 2000. — Vol. 31. — P. 597—601.
16. SherstoboevE. Y. Immunotropic Effects of Potentiated Antibodies to Human Interferon-gamma / E. Y. Sherstoboev, N. M. Masnaya, A. A. Churin, et al. // Bull. Exp. Biol. Med. — 2003. — Vol. 135. — P.70—72.
Контактная информация
Стрыгин Андрей Валерьевич — к. м. н., заведующий кафедрой фундаментальной медицины и биологии, Волгоградский государственный медицинский университет, e-mail: drumsav@mail.ru
