CC BY
66
Экспериментальная медицина
IVh
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
УДК 612.014.464:616.831-092
ВЛИЯНИЕ ОЗОНИРОВАННОГО ФИЗИОЛОГИЧЕСКОГО РАСТВОРА НА АКТИВНОСТЬ ЭНДОКАННАБИНОИДНОЙ СИСТЕМЫ
Е.Г. Лобанова, Ю.К. Караман,
Владивостокский филиал ФГБУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» Сибирское отделение Российской академии медицинских наук - Научно-исследовательский институт медицинской климатологии и восстановительного лечения
Лобанова Елена Григорьевна - e-mail: isachenko1@yandex.ru
Цель исследования: изучить влияние озонированного физиологического раствора на экспрессию эндоканнабиноидных СВ2 рецепторов клетками иммунной системы в условиях in vivo. В исследовании принимали участие 1Б здоровых добровольцев в возрасте 20-42 лет (30,4±Б,2 года). Применяли внутривенное введение озонированного 0,9% физиологического раствора NaCl. Озонизацию раствора осуществляли на аппарате «Медозонс-БМ» (Россия). Раствор в количестве 200 мл предварительно озонировали в концентрации Б мг/л, после чего вводили внутривенно капельно. Определение экспрессии поверхностных маркеров эндоканнабиноидных рецепторов на мононуклеарных лейкоцитах проводили при помощи соответствующих антител (Santa Cruz Biotechnology, США), результаты учитывали методом проточной цитофлюорометрии на проточном цитометре FACSCaIibur (Becton Dickinson, США). Полученные данные об ингибирующем влиянии озонированного физиологического раствора на активность экспрессии СВ2 рецепторов раскрывают новые механизмы регуляции иммунного ответа озоном и могут быть использованы для целенаправленного воздействия на иммунный ответ организма через эндоканнабиноидную систему.
Ключевые слова: эндоканнабиноидная система, озон.
The purpose of the research is to study the effect of ozonized saline solution effect on the expression of endocannabioid CB2 receptors by immune system cells in vivo. 16 healthy volunteers aged 20-42 (30,4±6,2 years) were involved in the study. The intravenous 0,9% NaCl saline solution injection was applied. Solution was ozonated by Medozons-BM, Russia. 200 ml of solution was preliminary ozonated
with the concentration of 6 mg/l and further administered intravenously drop-by-drop. The expression of surface markers of endocannabioid receptors on mononuclear leukocytes was determined with the aid of appropriate antibodies (Santa Cruz Biotechnology, the USA). Findings were recorded by the multiparamet-ric flow cytometry method on flow cytometer FACSCalibur (Becton Dickinson, the USA). Data obtained on the inhibition effect of ozonated saline solution to the activity of the expression of endocannabioid CB2 receptors disclose new mechanisms for the immune response regulation by ozone and may be used for purposeful action to the immune response by organism via the endocannabioid system.
Key words: endocannabioid system, ozone.
В настоящее время существует достаточно большой в ыбор методов, модулирующих состояние иммунной системы. Одним из биологически активных агентов, стимулирующих метаболизм клетки и иммунный ответ организма, является озон. Активация клеток иммунной системы озоном приводит к образованию провоспали-тельных медиаторов (лейкотриены, простагландины, цитокины), которые запускают каскад иммунного ответа [1, 2]. Одним из возможных механизмов, через которые озон осуществляет регуляцию иммунной реакции, является активация эндоканнабиноидной системы (ЭКС). Известно, что ЭКС принимает участие в поддержании энергетического, метаболического, иммунного баланса организма [3, 4, 5]. В условиях воспаления происходит снижение экспрессии эндоканнабиноидных СВ2 рецепторов, что способствует гиперпродукции провоспалитель-ных медиаторов. Однако в литературе нет данных о влиянии озона на активность ЭКС.
Цель исследования: изучить влияние озонированного физиологического раствора на экспрессию эндоканнабиноидных СВ2 рецепторов клетками иммунной системы в условиях in vivo.
Материалы и методы
В исследовании принимали участие 16 здоровых добровольцев в возрасте 20-42 лет (30,4±6,2 года). Применяли внутривенное введение озонированного 0,9% физиологического раствора NaCl. Озонизацию раствора осуществляли на аппарате «Медозонс-БМ» (Россия). Раствор в количестве 200 мл предварительно озонировали в концентрации 6 мг/л, после чего вводили внутривенно капельно.
Забор периферической крови проводили дважды - до введения озоно-кислородной смеси и через три часа после процедур. Кровь отбирали в пробирки с антикоагулянтом (ЭДТА - 0,1М 0,02 мл/мл крови; «Venoject»). Для удаления эритроцитов пробоподготовку проводили по безотмывоч-ной технологии с использованием лизирующего 0,83% раствора NH4CL [6]. Определение экспрессии поверхностных маркеров эндоканнабиноидных рецепторов на моно-нуклеарных лейкоцитах проводили при помощи соответствующих антител (Santa Cruz Biotechnology, США), результаты учитывали методом проточной цитофлюорометрии на проточном цитометре FACSСalibur (Becton Dickinson, США). Гейт (окно) популяции клеток устанавливали на
основе комбинации прямого и бокового светорассеяния и размера клеток. При учете результатов подсчитывали 10 000 клеток в гейте. Статистическая обработка материала проведена при помощи программного пакета 'МпМЭ! 2,8.
Результаты исследования
Проведенный цитометрический анализ мононуклеар-ных лейкоцитов здоровых доноров показал, что процентное содержание клеток, экспрессирующих на своей поверхности дифференцирующий антиген к рецептору СВ2, составило более 90% от всех исследуемых клеток. Следовательно, наличие эндоканнабиноидных СВ2 рецепторов на мононуклеарных лейкоцитах является маркером лейкоцитарного пула клеток.
После введения внутривенно озоно-кислородной смеси количество клеток, имеющих СВ2 рецепторы, составило в среднем 66%. Сравнительный анализ до воздействия озонокислородной смеси на иммунокомпетентные клетки и после показал достоверное снижение экспрессии СВ2 рецептора на 20% (р<0,001). Полученные результаты свидетельствуют о блокаде экспрессии эндоканнабиноидных СВ2 рецепторов на поверхности лейкоцитов после введения озона.
Обсуждение и выводы
Таким образом, озон способствует угнетению активности эндоканнабиноидной системы, что в свою очередь оказывает стимулирующий эффект на иммунную систему. Учитывая, что СВ2 рецепторы обладают иммунодепресси-рующим действием на синтез провоспалительных медиаторов, снижение их экспрессии под действием озонокислородной смеси является первичной реакцией организма, которая активирует иммунную систему. Возможно, гиперреактивность иммунного ответа обусловлена актива-
Экспериментальная медицина
цией синтеза эндоканнабиноидов, обладающих блокирующим действием на экспрессию СВ2 рецепторов.
Полученные данные об ингибирующем влиянии озонированного физиологического раствора на активность экспрессии СВ2 рецепторов раскрывают новые механизмы регуляции иммунного ответа озоном и могут быть использованы для целенаправленного воздействия на иммунный ответ организма через эндоканнабиноидную систему.
ИИ
ЛИТЕРАТУРА
1. Виткина Т.И., Хмелева Е.В., Антонюк М.В., Новгородцев А.Д. Влияние медицинского озона на иммунометаболический статус больных хроническим бронхитом и артериальной гипертензией. Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2011. № 40. С. 81-86.
2. Перетягин С.П., Бояринов Г.А., Зеленов Д.М. и др. Техника озонотерапии: Методич. рекомендации. Н. Новгород. 1991. 15 с.
3. Исаченко Е.Г., ВиткинаТ.И., Геронина С.А. Потапов В.Н., Бердышев Е.В. Спонтанный и липополисахаридиндуцированный синтез цитокинов клетками крови человека в норме и при аллергопатологиях. Иммунология. № 5. 1999. С. 37-39.
4. Исаченко Е.Г., Виткина Т.И., Бердышев Е.В. Влияние лигандов каннаби-ноидных рецепторов WIN 55,212-2 и анандамида на выработку TNF-a и ИЛ-8 лейкоцитами крови здоровых лиц и больных с аллергопатологией. Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2003. Т. 2. С. 86-91.
5. Kurihara R., Tohyama Y., Matsusaka S. et al. Effects of peripheral cannabionoid receptor ligands on motility and polarization in neutrophil-like HL60 cells and human neutrophils. J. Biol. Chem. 2006. Vol. 281. P. 12908-12918.
6. Клауса Дж. Лимфоциты: методы. М.: Мир, 1990. 395 с.
7. Чурюканов М.В., Чурюканов В.В. Функциональная организация и терапевтический потенциал эндогенной каннабиноидной системы. Эксперим. и клинич. фармакология. 2004. Т. 67 (2). С. 70-78.
8. Han K.H., Lim S., Ryu J., Lee C.-W., Kim Y., Kang J.-H., Kang S.-S., Ahn Y.K., Park C.-S., Kim J.J. CB1 and CB2 cannabinoid receptors differentially regulate the production of reactive oxygen species by macrophages. J. Cardiovasc Res. December 1. 2009. Vol. 84 (3). P. 378-386.
