Влияние монохромного красного света на клеточные факторы противоопухолевой защиты Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

влияние монохромного красного света на клеточные факторы противоопухолевой защиты

е.а. шейко, е.ю. златник, г.и. закора

ФГУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт Росмедтехнологий»,

г. Ростов-на-Дону

Целью исследования было изучение возможности влияния светодиодного монохромного излучения (СДИ) на функциональное состояние лимфоцитов крови больных раком легких после их облучения монохроматическим красным светом ex vivo и на клетки культуры эритромиелобластного лейкоза человека К562.

Материал и методы. Лимфоциты выделяли в градиенте плотности фиколл-верографина (р=1,078) из проб периферической венозной крови 7 первичных больных местнораспространенным раком легкого и у них же после проведения противоопухолевого лечения. Воздействие на взвесь лимфоцитов осуществляли с помощью аппарата «Спектр ЛЦ», в непрерывном режиме (Х=0,67 мкм), дозой W=3,06 Дж/см2. В облученных и необлучен-ных (контрольных) пробах изучали пролиферативную активность лимфоцитов в реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) путем 72-часового культивирования лимфоцитов в полной культуральной среде в присутствии 5 мкг Т-клеточного митогена ФГА (стимулированная проба) и без митогена (спонтанная проба), после чего в фиксированных и окрашенных по Романовскому-Гимзе мазках подсчитывали процент бласттрансформированных клеток. Изучали синтетическую активность лимфоцитов методом люминесцентно-спектрального анализа по Карнаухову. Цитотоксическую активность естественных киллерных клеток (ЕКК) определяли в цитотоксическом тесте (ЦТТ) при соотношении эффектор:мишень 40:1. В качестве клеток-мишеней использовали культуру клеток эритромиелобластного лейкоза человека К562. Учет теста проводили путем подсчета процента погибших (окрасившихся трипановым синим) клеток-мишеней и вычисляли индекс цитотоксичности (ИЦ) по формуле: ИЦ=(О-К)/К, где О (опыт) - % погибших клеток-мишеней в присутствии клеток-эффекторов; К (контроль)

- % погибших клеток-мишеней в присутствии среды. Кроме того, проводили оценку индекса апоптоза клеток мишений.

Результаты исследования показали статистически достоверное повышение как спонтанной (в 1,4 раза), так и ФГА-индуцированной (в 1,3 раза) РБТЛ. Спектр люминесценции после облучения лимфоцитов монохромным СДИ представлен уже двумя максимумами в красной и зеленой полосе излучения, причем преобладающим становился максимум красной полосы спектра, связанной с присутствием в клетке РНК. Данные, полученные в ЦТТ, свидетельствуют о том, что после облучения происходит увеличение процента гибели клеток-мишеней и возрастание ИЦ; значения обоих показателей статистически достоверно выше, чем в контрольных пробах (без СДИ). Следует отметить, что ИЦ облученных лимфоцитов, взятых у больных после лечения, статистически значимо повышается по сравнению с исходными. Индекс апоптоза до лечения при действии лимфоцитов на клетки опухоли был в 1,2 раза выше контроля, а после лечения - в 2,1 раза. Проапоптогенный потенциал облученных лимфоцитов, взятых в оба срока исследования, увеличивался под действием СДИ: до начала лечения он превышал таковой необлученных лимфоцитов в 4 раза, а после окончания лечения - в 7,86 раза.

Выводы. Полученные результаты говорят о том, что проведенное воздействие СДИ красного спектра на лимфоциты крови больных раком легкого, проявило себя как фактор, стимулирующий их функциональное состояние, способствующий повышению их пролиферативной активности, а также цитотоксичности ЕКК, что проявляется в статистически достоверном усилении их повреждающего эффекта на культуру опухолевых клеток К562 in vitro, одним из механизмов реализации которого служит апоптоз.

СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2009. Приложение № 2