CC BY
13
7 г/л), изменяющих продолжительность лаг-фазы и логарифмического роста, «урожай» клеток даже к концу периода роста по экспоненте был во много раз ниже по сравнению с не достигшей максимума численностью микроорганизмов в контроле и в присутствии небактерицидных доз пестицида. Совершенно аналогичные результаты, как это видно из той же табл. 2, получены и в опытах с сибиреязвенными бациллами.
Последующие этапы развития популяции, сопровождающиеся уменьшением скорости генерации и процессом отмирания микроорганизмов, не могут обусловить значимых изменений в образовавшейся разнице численности микроорганизмов в контроле и в присутствии бактерицидных для них концентраций химических веществ. Подтверждением этого служат результаты исследований с несколькими штаммами кишечной палочки, выделенными из различных объектов окружающей среды (речной, сточной воды и ила городских очистных сооружений Киева). Как видно из полученных данных, при концентрации хлорофоса 1 г/л, бактерицидной для эшерихий вследствие показанного нами значительного увеличения продолжительности лаг-фазы (см. табл. 2), численность их на протяжении 30-суточного наблюдения в «пробе на развитие» постоянно оставалась значительно ниже по сравнению с контролем.
Выводы
Наблюдаемое в длительной «пробе на развитие» количественное уменьшение численности микроорганизмов в присутствии бактерицидных доз химических веществ является результатом тех изменений в их росте и развитии, которые происходят на первых этапах их жизнедеятельности — в период прохождения лаг-фазы и фазы логарифмического роста.
Результаты исследования позволяют считать возможным рекомендовать в порядке апробации в качестве экспресс-метода для определения бакте-рицидности химических веществ для микроорганизмов использование первых этапов их роста и развития — продолжительности лаг-фазы и логарифмического роста.
ЛИТЕРАТУРА. Калабина M. М. — Гиг. и сан.. 1945, № 4—5, с. 1—6. — Родина А. Г. Методы водной микробиологии. М. — Л., 1965, с. 134— 138. — Юровская Е. М. — Гиг. и сан., 1977, № 12, с. 69—72. — Юровская Е. М. — В кн.: Гигиена населенных мест. Киев, 1976, т. 15, с. 74—78. — К ö s-s 1 е г F., Wolburg J. — Z. ges. Hyg., 1971, Bd 117, S. 317-321. — O'N e -ill R. M., Langlois В. E. — Bull. Environ. Contam. Toxicol., 1976, v. 16, p. 330—338. — Pajewska M. — Prace Komis Nauk rolniczych naukles (PTPN), 1972, v. 33, p. 245—249. — S с h u b e r t J. — J. gen. Microbiol., 1970, v. 64, p. 37—40.
Поступила 4/V 1978 r.
УДК в 12,014,45-085,23+613,644-071612,014*2
Канд. биол. наук Н. И. Шарый, канд. физ.-мат. наук В. М. Ковалева,
Г. В. Крюкова
ВЛИЯНИЕ МНОГОКРАТНОГО ДЕЙСТВИЯ УЛЬТРАЗВУКА НА КУЛЬТУРЫ
КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА
II Московский медицинский институт им. Н. И. Пнрогова, научно-исследовательская лаборатория экспериментальной иммунобиологии АМН СССР, Москва
*
Ультразвук в последние годы все более широко применяется в производственной и медицинской практике. В связи с этим становится актуальным изучение влияния многократного действия ультразвука на биологические системы. Соматические клетки человека в культуре являются одной 4
из наиболее чувствительных и удобных моделей, применяемых для изучения действия на них внешних факторов.
С целью изучения ультразвуковых воздействий на клетки человека в культуре (линия НеЬа) нами (Н. И. Шарый и соавт.) ранее был разработан метод контактного озвучивания культур клеток. Как ультразвуковой 4 генератор использовался отечественный аппарат УТП-1. В качестве экспериментальной была принята средняя летальная доза (1^О60) для клеток НеЬа, которая соответствовала частоте ультразвука 880 кГц, интенсивности 0,2 Вт/см2 и времени воздействия 3 с. В числе критериев определения чувствительности клеток к ультразвуку применяли процент выживших клеток, коэффициент пролиферации, митотический индекс и кариометрию.
Наряду с этим мы ставили иммунологические тесты: реакцию прямой и смешанной агглютинации с адсорбцией и реакцию анафилаксии с десенсибилизацией на морских свинках. Реагентами в иммунологических реакциях служили анти-АВО и МЫ-сыворотки и лошадиная анти-НеЬа сыворотка, полученная в лаборатории (И. И. Подоплелов и соавт.). Клетки клона НеЬа К-41, использованные в наших опытах, выращивали на питательной среде 199 с добавлением 20% сыворотки крупного рогатого скота. Количество погибших и живых клеток подсчитывали в камере Горяева. Погибшие клетки окрашивали 1% раствором трипанового синего, цитологические препараты — гематоксилином по Майеру. Провели 10 исследо-вательных ультразвуковых воздействий на клетки клона НеЬа К-41. Интервал между каждым последующим воздействием составлял 7 дней (про-^ тяженность одного пассажа).
В результате десятикратного озвучивания клеток НеЬа К-41 было выявлено постепенное повышение процента выживаемости опытных образцов клеток от 48,2±1,8% после 1-го до 63,5±4,0% после 10-го озвучивания. При этом коэффициент пролиферации и митотический индекс достоверно не изменялись. В результате кариометрических измерений линейных размеров ядер опытных культур клеток существенных изменений также не было обнаружено. В то же время при изучении морфологии озвученных клеток удалось отметить заметное просветление протоплазмы клеток. Грубая зернистость клеток, наблюдавшаяся в контрольных культурах, в опытных образцах культур почти полностью отсутствовала.
При изучении изоантигенов АВ 0 и ЛШ в реакциях прямой и смешанной агглютинации с адсорбцией были выявлены сохранение О, Ми Ы-ан-тигенов в течение первых четырех воздействий и частичная утрата активности М, М-антигенов в последующем, вплоть до 10-го озвучивания. Титр антител в реакции с НеЬа К-41 после 1—4-го воздействий составлял 1 : 512, после 4—10-го воздействий — 1 : 32. ф В реакции анафилаксии с десенсибилизацией на морских свинках между клетками НеЬа К-41 10-го озвучивания и клетками НеЬа К-41 4-го озвучивания было выявлено антигенное различие, которое проявлялось в виде слабого (+) и умеренного (++) анафилактического шока у морских свинок. Однако в отдаленном периоде после 10-кратного ультразвукового воздействия по истечении 5—10 пассажей эти различия вновь исчезали.
Возрастание устойчивости культур клеток к ультразвуку в используемой нами дозе после 3—4-го озвучивания происходит, по-видимому, в основном за счет элиминации чувствительных и выживания устойчивых к ультразвуку клеток. Однако наряду с отбором устойчивых к ультразвуку клеток нельзя исключить возможность определенной биохимической перестройки структуры клеток. В частности, примечательным в этом отношении является упомянутое выше наблюдение, сущность которого заключалась в том, что озвученная клеточная популяция состояла преимущественно из клеток с просветленной протоплазмой в отличие от контрольной, в которой преобладали клетки с грубоватой зернистостью. НгагсИга в дополнение к этому сообщает, что культуры клеток, озвученные малыми дозами ультра-% звука, образуют большее число клеточных колоний, чем неозвученные.
•Очевидно, в этом проявляется стимулирующий (и, возможно, обновляющий) эффект ультразвука малых интенсивностей.
Используемая нами экспериментальная доза ультразвука оказывала на культуры клеток и некоторое отрицательное действие в виде обратимой утраты поверхностных MN-антигенов. Природа указанных антигенных изменений в озвученных культурах клеток, по нашему мнению, связана с обратимым повреждающим действием ультразвука на поверхностные мембраны клеток. О наличии биохимических и антигенных изменений в ряду нескольких генераций микробных клеток после ультразвукового облучения (при частоте 800—1 мГц, интенсивности 5—8 Вт/см2, интервале 20 мин) сообщалось ранее (И. Ф. Перс и J1. Г. Жданова). Изменение клеточной поверхности при аналогичных дозах ультразвука отмечалось другими авторами (А. С. Шаркова и И. Е. Эльпинер), которые наблюдали утрату четкости границ у микробных клеток, выросших после озвучивания. Это качество, по данным упомянутых авторов, сохранялось на протяжении 5 генераций. Об изменении поверхностных клеточных мембран свидетельствует также заметное повышение адгезивных свойств озвученных клеток, выявленное в наших исследованиях. В связи с этим весьма важным является сообщение (Beleva-Staikova и Kraschkova) о нарушении синтеза белков при повторных воздействиях малых (0,2—1,0 Вт/см2) интенсивностей ультразвука, что указывает на наличие кумулятивного ультразвукового эффекта при его многократных воздействиях на биологические системы. Эффект кумуляции при ультразвуковом воздействии на дрожжевых клетках обнаружила в своих исследованиях Г. С. Комолова.
Таким образом, можно заключить, что многократное ультразвуковое воздействие (частота 880 кГц, интенсивность 0,2 Вт/см2, интервал 3 с) на культуры клеток способно вызывать в них изменение биологических свойств в форме заметного повышения устойчивости клеток к ультразвуку, обратимой утраты поверхностных MN-антигенов и выраженного просветления протоплазмы клеток.
ЛИТЕРАТУРА. Комолова Г. С. — В кн.: О химическом и биологическом действии ультразвука. Красноярск, 1962, с. 84—166. — Перс И. Ф., Жданова Л. Г.—Ж. микробиол., 1964, № 3, с. 27—33. — ПодоплеловИ. И., У г р ю м о в Е. П., 3 а х а р о в А. Ф. и др. — Бюлл. экспер. биол., 1964, № 8, с. 85—87. —Шаркова А. С., Эльпинер И. Е. — Биофизика, 1957, № 3, с. 351—353. — Ш а р ы й Н. И., К о в а л е в а В. М., Т р и б у л е в Г. П. и др.— В кн.: Культура тканей в онкологии. М., 1968, с. 243—245. — Beleva-Stai-kova R., Kraschkova A. M. — Radiobiol. Radiother. (Berl.), 1967, Bd 8, S. 655—662.
Поступила ll/V 1978 r.
УДК 613.632.4:66.062.5391-074:543.544
Р. С. Камалов
ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭПИХЛОРГИДРИНА
В ВОЗДУХЕ
Узбекский научно-исследовательский институт санитарии, гигиены и профзаболеваний,
Ташкент
Большую часть эпоксидных смол получают конденсацией в щелочной среде эпихлоргидрина с соединениями, содержащими подвижные атомы водорода (фенолами, аминами, гликолями и кислотами). С целью улучшения свойств эпоксидные смолы модифицируют феноло-мочевино- или фурфуролформальдегидными, фурфуролацетоновыми смолами. К таким смолам относится группа эпоксидных смол типа ФАЭД. Гигиеническая характеристика производства и применения эпоксидных смол во многом зависит от интенсивности выделения эпихлоргидрина в воздух производ-
