CC BY
22
Рис. 9. Зависимость содержания аминогрупп на поверхности от времени модифицирования из жидкого МЭА при 150 °С
По данным, полученным из рис. 6 и 8, построены кинетические кривые реакций взаимодействия МЭА с поверхностью силикагелей КСКГ и КСМГ, которые показаны на рис. 9. Исходя из вида кривых, адсорбционное равновесие на поверхности КСКГ наступает в течение 15 - 20 минут, КСМГ - 30 минут Предельная концентрация аминогрупп на поверхности КСКГ равна 0,3 ммоль/г, КСМГ - 0,8 ммоль/г. Это служит подтверждением большей скорости взаимодействия МЭА с поверхностью КСМГ по сравнению с крупнопористым силикагелем.
В целом сравнение кривых титрования (схожие по форме линейные участки и скачки на кривых для КСКГ и КСМГ) свидетельствует о схожести протолитических свойств исследуемых сорбентов на основе изученных силикагелей, что говорит о сходных механизмах сорбции и строении привитого слоя. Исходя из того, что средняя концентрация силанольных групп кремнеземов равна 4,9 групп на 1 нм2 поверхности [8,9], а также результатов адсорбционных экспериментов с изучаемыми образцами силикагелей [4], вычислено содержание аминогрупп по отношению к исходному количеству гидроксогрупп поверхности. Для силикагелей КСКГ это соотношение равно 26 %, КСМГ - 22%. Такие величины позволяют говорить о возможных стерических затруднениях при доступе довольно крупных молекул индикаторов и их комплексов с ионами кальция к непрореагировавшим силанольным группам поверхности. Это в свою очередь является доказательством участия аминоэтоксигрупп во взаимодействии с продуктами индикаторных реакций ионов кальция.
ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ
Установлено, что молекулы моноэтаноламина ко-валентно связываются с поверхностью силикагелей с образованием сложноэфирных связей Э1-О-С. В поверхностной реакции зафиксировано участие как свободных, так и связанных водородной связью гидроскогрупп силикагелей КСКГ и КСМГ. Объяснением этому может служить то, что вследствие высокой кривизны поверхности число вицинальных силанольных групп значительно превышает количество геминальных группировок.
Полученные поверхностные аминоэтоксигруппы обладают свойствами слабого основания и способны создавать рН = 9 в водных суспензиях модифицированных силикагелей. Поверхностные аминогруппы способны вступать во взаимодействие с водными растворами индикаторов кальмагита и арсеназо I. Продуктами этих взаимодействий являются основные формы указанных ин-
дикаторов, которые реагируют с ионами кальция и магния. Описанные окрашенные продукты индикаторных реакций сорбируются на поверхности модифицированных силикагелей КСКГ и КСМГ за счет сил электростатического взаимодействия их отрицательно заряженных центров с ионами -NH3+ поверхности.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Золотов Ю.А., Иванов В.М., Амелин В.Г. Химические тест-методы анализа.- М.: Едиториал УРСС, 2006.- 304 с.
2. Вода. Индикаторные системы / Под. ред. Ю.М. Арского. -М.: ВИНИТИ РАН, ЭКОНИКС, 2002.- 256 с.
3. Киселев А.В., Лыгин В.И., Соломонова И.Н. Исследование монослоев моноэтаноламина на кремнеземе и алюмоси-ликагеле методом инфракрасной спектроскопии // Журнал физической химии.- 1970. - № 5.- С. 1249 - 1255.
4. Гладышева С.А., Филистеев О.В., Воронцов Б.С. Струк-турно-сорбционные характеристики золь-гель силикагелей и силикагелей, модифицированных ионами Fe3+ // Компьютерное моделирование физико-химических свойств стекол и расплавов: Труды IX Российского семинара.-Курган, 2008.- С. 67-68.
5. Тессман А.Б. и др. Сравнение протолитических свойств кремнеземов с привитыми аминогруппами для моделирования внутренних градиентов рН // Вестник Московского университета. Серия 2. Химия.- 2002. -№ 1.- С. 223229.
6. Нестеренко П.Н., Нестеренко А.П., Иванов А.В. Модифицирование поверхности кремнезема оксидом алюминия // Вестник Московского университета. Серия 2. Химия. 2001.- №2. - С. 106-108.
7. Satu E. et al. Determination of the hydroxyl group content in silica by thermogravimetry and a comparison with 1H MAS NMR results // Thermochimica Acta. - 2001.-№ 2. -Р. 201-212.
8. Айлер Р.К. Химия кремнезема: В 2 т. /Пер с англ. - М.: Мир, 1982.
9. Unger K. Structure of porous adsorbents // Angew. Chem. Int. Ed.- 1972. - № 4.- P. 267-270.
О.М. Плотникова (1,2), С.Н. Лунева (2), А.М. Корепин (3), Н.Н. Матвеев (3), И.В. Савинова (3), А.Н. Евдокимов (3), Т.А. Шингаренко (3)
(1) Курганский государственный университет, г. Россия, Россия
(2) Российский научный центр «ВТО им. Г.А. Илизарова», г. Курган, Россия
(3) Региональный центр экологического мониторинга объектов по хранению и уничтожению химического оружия по Курганской области, г. Курган, Россия
ВЛИЯНИЕ МЕТИЛФОСФОНАТА В ВЫСОКИХ И МАЛЫХ ДОЗАХ НА ОСНОВНЫЕ БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ МЕТАБОЛИЗМА ЛАБОРАТОРНЫХ МЫШЕЙ
Аннотация: В Региональном центре по обеспечению государственного экологического контроля и мониторинга объектов по хранению и уничтожению химического оружия по Курганской области с 2008 года работает Межрегиональная лаборатория экотоксикологии. В лаборатории изучают токсичность различных специфических веществ и отходов. В работе используют биохимические показатели крови лабораторных мышей. В настоящее время проведена работа по изучению влияния метил-фосфоновой кислоты в высоких и малых дозах на лабораторных мышей. Найдено, что МФК оказывает достоверное влияние на показатели метаболизма. В большей степени МФК действует на антиоксидантную систему приводя к окислительной модификации белков. При введении малых доз МФК в сыворотке
крови животных даже через 30 дней остается повышенным уровень продуктов перекисного окисления белков.
Ключевые слова: метилфосфоновая кислота, лабораторные мыши; биохимические показатели, токсичность загрязняющих веществ.
O.M. Plotnikova (1,2), S.N. Luneva (2), A.M. Korepin (3), N.N. Matveev (3), И.В. Savinov (3), A.N. Evdokimov (3), T.A. Shingarenko (3)
(1) Kurgan State University, Kurgan, Russia
(2) Academician G.A. Elizarov FGU «RNTs "VTO" of Rosmedtechnology», Kurgan, Russia
(3) Regional Center of environmental monitoring of storage and CW destruction facilities in the Kurgan Region, Kurgan, Russia
EFFECT OF METHYL PHOSPHONATE ACIDS IN HIGH AND SMALL DOSES ON THE BASIC BIOCHEMICAL FACTORS OF LABORATORY RAT METABOLISM
Abstract: Since 2008 in the Regional Center on provision of the state environmental control and monitoring of storage and chemical weapons destruction facilities in the Kurgan region the Inter-regional Environmental Ecotoxilogy Laboratory has been carrying out its work. The Laboratory makes tests for toxicity of various specific substances and wastes. In the testing process biochemical factors of laboratory rat blood are used. At present the work has been carried out on studying effects of methyl phosphonate acids (MPA) in high and small doses on laboratory rats. It is found out that MPA have statistically reliable effect on the metabolism factors. To a greater degree MPA effect antioxidant system leading to oxidating modification of proteins. After injection of small MPA doses in the serum of animals even in 30 days the level of protein peroxidation continues to be high.
Keywords: methyl phosphonate acid, laboratory rats; biochemical factors, contaminator toxicity.
ВВЕДЕНИЕ
В соответствии со статьей 70 ФЗ «Об охране окружающей среды» научные исследования в области охраны окружающей среды проводятся в целях оценки последствий негативного воздействия хозяйственной и иной деятельности на окружающую среду; разработки и совершенствования показателей комплексной оценки воздействия на окружающую среду, способов и методов их определения [13].
ФЗ «Об уничтожении химического оружия» при проведении работ по хранению и уничтожению химического оружия одной из основных задач ставит разработку и внедрение эффективных методов оценки состояния ОС в зонах защитных мероприятий, позволяющих контролировать соблюдение санитарно-гигиенических, экологических нормативов и стандартов безопасности для разных объектов окружающей среды (статья 13) [14].
«Санитарные правила по определению класса опасности токсичных отходов производства и потребления» в целях установления и предотвращения вредного воздействия токсичных отходов на среду обитания и здоровье человека предусматривают экспериментальную оценку степени опасности отходов на теплокровный организм в остром и хроническом санитарно-токсикологическом эксперименте. Такая оценка является обязательной в случаях, когда возможно контактное, ингаляционное, перо-ральное или комплексное действие компонентов отхода на здоровье человека [11].
В Региональном центре по обеспечению государственного экологического контроля и мониторинга объек-
тов по хранению и уничтожению химического оружия по Курганской области (РЦ СГЭКиМ) с 2008 года работает Межрегиональная лаборатория экотоксикологии, которая в 2009 году была аккредитована в Системе аккредитации аналитических лабораторий на техническую компетентность и независимость в проведении биохимических исследований с использованием биологического материала (свидетельство аттестата аккредитации № РОСС Ри.0001517720).
Сотрудниками лаборатории аттестована методика выполнения измерений (свидетельство об аттестации № 224.11.03.052/2009) биохимических показателей фотометрическим методом в плазме (сыворотке) крови мелких теплокровных животных (мышей и мелких грызунов на территориях санитарно-защитных зон и зон защитных мероприятий) в рамках государственного экологического мониторинга объектов хранения и уничтожения химического оружия [6].
Важнейшим направлением работы лаборатории является изучение биохимических показателей крови белых мышей линии СВА и закономерностей в их изменении для оценки состояния лабораторных мышей как тест-объектов при определении токсичности специфических загрязняющих веществ, класса опасности токсичных отходов и состояния представителей животного мира в зонах защитных мероприятий объектов хранения и уничтожения химического оружия.
В настоящее время закончено полномасштабное изучение влияния метилфосфоновой кислоты (МФК) как основного специфического продукта детоксикации фос-форорганических отравляющих веществ на основные биохимические показатели метаболизма белых лабораторных мышей после однократного подкожного введения нейтрализованного раствора МФК в высоких и малых дозах. Полученные результаты успешно апробированы при выполнении работы по проведению токсиколого-ги-гиенических исследований при обследовании объекта бывшего хранения химического оружия в Удмурдской Республике и мест прошлого уничтожения химического оружия в Пензенской области.
Целью настоящей работы было определение биохимических характеристик крови, мышц и печени у лабораторных мышей при воздействии высоких и низких доз метилфосфоновой кислоты в остром и хроническом эксперименте.
ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Для исследования влияния МФК на мелких грызунов использовали плазму, сыворотку и эритроцитарную массу крови мышей линии СВА в возрасте 2-х месяцев массой 24±2 г, которые содержались в стандартных условиях аттестованного вивария [12, с. 7]. Эвтаназия осуществлялась методом декапитации с соблюдением всех биоэтических правил работы с лабораторными животными [10].
Совокупности полученных экспериментальных данных в каждой выборке описывали с помощью медианы и процентилей. Данные обрабатывались набором методов непараметрической статистики, достоверность различий между выборками экспериментальных данных оценивали с использованием критерия для независимых выборок Вилкоксона-Манна-Уитни при р < 0,05 [4].
При определении достоверно значимых изменений между опытными и контрольными группами мелких грызунов определялись биохимические показатели через 12, 24, 48, 72, 96 часов после интоксикации в остром эксперименте, а также через 12, 18 и 30 суток в хроническом эксперименте.
Опытным группам мышей (по 10 особей в каждой)
подкожно вводили нейтрализованный раствор МФК различных концентраций, контрольным группам - физиологический раствор хлористого натрия.
В качестве изучаемых показателей были выбраны гликоген печени и мышц (ГЛпеч., ГЛм), креатинфосфат (КрФ) и креатин в мышцах, креатинкиназа (КК), пируват (ПВК), лактатдегидрогеназа (ЛДГ), общие липиды (ОЛ), холестерин (ХС), малоновый диальдегид (МДА), суперок-сиддисмутаза (СОД), холинэстераза (ХЭ), продукты пе-рекисного окисления белков (ПОБ270 или АФГи ПОБ363+370 или КФГ), альбумин (Ал) и глобулины (Гл) в сыворотке или плазме, олигопептиды (ОПпл, ОПэр), вещества низкой и средней молекулярной массы (ВНСММпл, ВНСММэр) и их катаболические фракции (КПпл, КПэр) в плазме и эритроцитах.
В работе для определения изучаемых биохимических показателей крови использовали адаптированные методики. В биоматериале лабораторных мышей определяли общий белок в плазме крови - спектрофотомет-рически биуретовым методом; ОП в плазме крови и эритроцитах - по методу Лоури [5]; продукты перекисного окисления белков (ПОБ) - по концентрации альдегидо- (АФГ или ПОБ270) и кето- (КФГ или ПОБ363+370 ) 2,4-динитрофе-нилгидразонов [3]; вещества низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ) в плазме и эритроцитах - по методу Малаховой [5]; гликоген в печени - фотометрически с антроновым реактивом [15]; креатин в скелетных мышцах - по реакции с диацетилом, креатинфосфат - по содержанию фосфора в тканевом экстракте [8]; пируват -фотометрированием окрашенного продукта конденсации с 2,4-динитрофенилгидразином [1]; лактат - энзимати-ческим колориметрическим методом с 4-аминоантипи-рином (наборный метод фирмы «Витал Диагностикс СПб»); активность ЛДГ - по уменьшению оптической плотности при восстановлении пирувата в лактат (наборный метод DiaSys Diagnostic); активность холинэстеразы - по изменению оптической плотности при восстановлении тиохолином окрашенного гексацианоферрата (III) [6]; холестерин - энзиматическим колориметрическим методом Триндера [6]; общие липиды - спектрофотометри-чески с фосфованилиновым реактивом (наборные реактивы фирмы «РЫУА-ЬасИета Diagnostika», Хорватия); активность СОД в эритроцитах - по реакции, основанной на способности фермента конкурировать с нитросиним тетразолием (НСТ) за супероксидные анионы [2], малоновый диальдегид - по реакции с тиобарбитуровой кислотой [9].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В данной статье представлены лишь некоторые результаты изучения влияния МФК в дозах 2 и 10-15 мг/кг на биохимические показатели белкового, липидного и энергетического обмена белых лабораторных мышей через 3 суток (72 часа), 18 и 30 суток (дней) после введения МФК. Дозы МФК 2 и 10-15 мг/кг - это варианты опытов с высокими (ВД) и низкими (НД) дозами.
Изменения в ряду важнейших показателей энергетического и белкового обменов, перекисного окисления липидов (ПОЛ) и белков (ПОБ), антиоксидантной системы (АОС) и системы эндогенной интоксикации (ЭИ) у лабораторных мышей под влиянием МФК в дозах 2 и 10-15 мг/кг через 72 часов после введения приведены на рис. 1 и 2.
Анализ данных, представленных на рис. 1 и 2, показывает, что как высокие, так и низкие дозы МФК оказывают влияние на метаболические показатели лабораторных мышей, при этом можно отметить некоторые закономерности и особенности.
12 11
б
1 - ГЛпеч, 2 - ГЛм, 3 - КрФ, 4 - креатин, 5 - КК, 6 - ПВК 7 - ЛДГ, 8 - ОЛ 9 - ХС 10 - МДА, 11 - СОД, 12 - ПОБ270 , 13 -ПОБ363+370, 14 - Ал, 15 - Гл, 16 - ОПпл, 17 - ОПэр, 18 -ВНСММпл, 19 - ВНСММэр, 20 - КПпл, 21 - КПэр.
Рис. 1. Изменение биохимических показателей (в % относительно контрольных групп) через 72 часа после введения МФК в дозе 2 мг/кг: а - для мышей-самцов, б - для
мышей-самок (для данных с достоверным отличием уровень значимости различий опытных групп по сравнению с контролем: * р<0,05, ** р<0,01, *** р<0,001)
Так, наибольшие изменения гомеостаза происходит под действием МФК в дозе 2 мг/кг у самок (по 12 показателям из 21 изменения произошли на 20% и более) и под действием МФК в дозе 10-15 мг/кг у самцов (изменения на 20% и более произошли по 15 показателям).
При действии МФК в дозе 2 мг/кг (рис. 1) как у самцов, так и у самок уменьшается уровень гликогена печени на 12 и 31% и увеличивается содержание ПВК в сыворотке крови на 24 и 86% соответственно, что соответствует увеличению скорости гликолиза и гликогенолиза. Однако гликоген мышц под действием высокой дозы МФК
изменяется у самцов и у самок противоположно: у самцов уровень гликогена в мышцах увеличился на 168%, а у самок - уменьшился на 79%.
б
Рис. 2. Изменение биохимических показателей (в % относительно контрольных групп) через 72 часа после введения МФК в дозе 10-15 мг/кг: а - для мышей-самцов, б - для мышей-самок (для данных с достоверным отличием уровень значимости различий опытных групп по сравнению с контролем: *р<0,05, **р<0,01, ***р<0,001)
При действии МФК в дозе 10-15 мг/кг (рис. 2) у самцов наблюдается повышение уровня гликогена в печени на 55% при одновременном уменьшении концентрации ПВК в сыворотке на 56%, что связано, видимо, с усилением процессов гликонеогенеза. У самок под действием малых доз МФК одновременно значительно уменьшается уровень гликогена в печени (на 26%), мышцах (на 75%) и ПВК (на 53%); при этом уменьшается содержание МДА (на 31%), незначительно повышается уровень АФГ (на 13%), а уровень ВНМММ повышается лишь в эритроцитах (на 40%). Возможно, это связано с утилизацией глюкозы
по пентозофосфатному пути с образованием НАДН, который предохраняет ненасыщенные жирные кислоты и белковые молекулы клеточных мембран от аномальных взаимодействий с радикальными частицами.
Таким образом, МФК в высокой дозе у мышей-самцов влияет в основном на систему углеводного и липид-ного обмена - изменяются показатели ГЛм, ПВК, ЛДГ, СОД, ОЛ, МДА; а в низкой дозе - на систему белкового обмена - существенно возрастает содержание продуктов ПОБ (на 35-75%), ОП в плазме и эритроцитах (на 90 и 10%), ВНСММ в плазме и эритроцитах (на 47 и 20%), уровень катаболического пула в плазме (в 3 раза).
Для характеристики происходящих изменений в метаболизме под действием внешних воздействий, в том числе загрязняющих веществ, часто применяются различные интегральные индексы и коэффициенты, позволяющие повысить информативность результатов и сделать соответствующие выводы.
Для описания эндогенной интоксикации (ЭИ) мы применили: а) индекс интоксикации (ИИ, равный сумме произведений концентрации ВНСММ и ОП в плазме и эритроцитах), позволяющий провести комплексную оценку ЭИ и отразить роль ОП в ее развитии; б) коэффициент расчета эндогенной интоксикации (КРЭИ, равный отношению концентраций ВНСММ в плазме и эритроцитов); в) коэффициент эндогенной нагрузки (КЭН, равный произведению КРЭИ на сумму ВНСММ плазы и эритроцитов); г) процентное выражение уровня катаболической составляющей в объеме ВНСММ плазмы и эритроцитов (%КПпл и %КПэр, равные отношению величины катаболического пула к уровню ВНСММ).
На рис. 3 и 4 приведены некоторые интегральные индексы синдрома эндогенной интоксикации и системы перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы (ПОЛ-АОС) через 72 часа после введения МФК в дозе 2 мг/кг (рис. 3) и в дозе 10-15 мг/кг (рис. 4).
При сравнительном анализе интегральных индексов и различных коэффициентов можно видеть их разнонап-равленность при введении МФК в дозах 2 и 10-15 мг/кг, т.е. высокие и низкие дозы МФК различным образом влияют на ход окислительной модификации белков (ОМБ). Для высоких доз МФК можно предположить антиоксидантную активность МФК или инициирование гиперпродукции анти-окисантов: интегральные индексы ИИ, КРЭИ, КЭН понижены на 20-40%; %ПОБ363+370 - на 30-35%, отношение продуктов ПОБ (а именно АФГ/КФГ) повышено на 40-50%. Интегральные индексы при действии низких доз МФК повышены: ИИ от 30% у самок до 230% у самцов, КЭН - достоверно до 60% у самцов и с тенденцией до 20% у самок, %КП в плазме у самцов повышен на 240%, а у самок - на 80%.
Таким образом, независимо от доз МФК оказывает влияние на протекание процессов белкового обмена и окислительной модификации белков.
В работе был проведен и хронический эксперимент по оценке влияния МФК в высоких и малых дозах через 18 и 30 дней после введения МФК животным. Из двух десятков изученных показателей около 60% через 18 и около 70% через 30 дней пришли к нормальным значениям контрольной группы. Однако часть показателей достоверно отличалась от значений контрольной группы мышей, что показано на рис. 5.
Через 18 дней после введения как высоких, так и низких доз МФК при повышенной активности СОД (на 2030%) уменьшается уровень МДА на 30-40% и катаболи-ческая составляющая фракции средних молекул на 2050%, однако остается повышенным уровень продуктов ПОБ - ПОБ270 (на 10-20%), ПОБ363+370 (на 25-30%) и ОП в эритроцитах (на 18-20%).
Через 30 дней после введения как высоких, так и
а
140 120
« 100
Ч
О &
к
о и н о
80 +60 40
"П
I |_П I
1
3
□ Самцы □ Самки
1 - ИИ
2 -КРЭИ
3 - КЭН
4 - %КПпл
5 - %КПэр
200 -
180 -
160 -
140 -
о
1*
К 120 -
«
н о чО 100 Н
80 -
60 -
2
3
□ Самцы □ Самки
1 - МДА/ОЛ
2 - МДА/ХС
3 - СОД/МДА
4 - СОД/ПОБ
б
5 - %П°Бз6З+З70
6 - АФГ/КФГ
Рис. 3. Некоторые интегральные индексы синдрома эндогенной интоксикации (а) и системы ПОЛ-АОС (б) через 72 часа
после введения МФК в дозе 2 мг/кг
240
220
«
ч о 200
£
к о 180
к
н о 160
£ 140
120
100
80
** *
**
*
_1_ ■
«
н
о ^
К о и н
о
^
о4
200 180 160 140 120 100
80 -60 40
+ТТГ+
3
4
□ Самцы □ Самки
□ Самцы □ Самки
ИИ КРЭИ
3 - КЭН
4 - %КПпл
5 - %КПэр
1 - МДА/ОЛ
2 - МДА/ХС
3 - СОД/МДА
4 - СОД/ПОБ
б
5 - %ПОБ363+370
6 - АФГ/КФГ
Рис. 4. Некоторые интегральные индексы синдрома эндогенной интоксикации (а) и системы ПОЛ-АОС (б) через 72 часа
после введения МФК в дозе 10-15 мг/кг
140 120 100 80 60 40
180 160
« 140
ч
I 120
о и н о
о4
100 80 60 40
1 2 3 4 5 6 НВД-18 □ НД-18 1 -МДА 2 - СОД
6 - ОПэр 7 - ВНСММ
а
7 8 9
*** ** ** *
*** ¡П ** ** *
№ 1 || 1* 1
И *
I
**
123456789 ВВД-30 □ НД-30
3 - ПОБ270
КПпл
8
4 - ПОБ30 9 - КПэр
5 - ОПпл
Рис. 5. Достоверно значимые изменения биохимических показателей (в % относительно контрольных групп) через 18 дней (а ) и 30 дней (б) после введения МФК лабораторным мышам в высокой дозе (ВД, 2 мг/кг) и низкой дозе (НД, 10-15 мг/кг) (для данных с достоверным отличием уровень значимости различий опытных групп по сравнению с контролем: * р<0,05,
** р<0,01, *** р<0,001).
■■ ■■ ■■
* * *
* * *
*
*
* * *
* * *
*
1
4
5
*
*
* * *
**
*
шж
4
5
6
5
**
*
**
низких доз МФК активность СОД понижается до нормальных значений, отмечается повышенный на 30% уровень ПОБ270 и на 10-20% уровень ВНСММ и КПэр. Обращает на себя внимание, что при действии МФК в дозе 10-15 мг/кг уровень ПОБ363+370 повышен на 60% от уровня в контрольной группе мышей.
Таким образом, результаты хронического эксперимента показали достоверное повышение продуктов окислительной модификации белков, небольшой рост содержания ВНСММ, существенное понижение катаболичес-кой составляющей в плазме ВНСММ, поэтому можно предположить, что результатом адаптации на воздействие на организм животных МФК стал срыв возможностей антиоксидантной системы.
Изучение активности специфического фермента хо-линэстеразы (ХЭ) привело к результатам, приведенным на рис. 6. Данные по активности Хэ показывают, что после введения высоких и низких доз МФК через 72 часа происходит понижение активности ХЭ в сыворотке крови мышей на 18% при действии МФК в дозе 2 мг/кг и на 43% при действии МФК в дозе 10-15 мг/кг Эксперимент по изучению вопроса о том, происходит ли возврат активности ХЭ к нормальным значениям через более длительное время, завершится в ближайшем будущем.
Полученные в эксперименте данные показали, что биохимические показатели мелких грызунов могут быть использованы для выявления токсичности загрязняющих веществ как в высоких, так и в малых дозах. Это было с успехом осуществлено при оценке токсичности почв и грунтов из мест прошлого уничтожения химического оружия в Пензенской области и при обследовании объекта бывшего хранения химического оружия в Удмурдской Республике.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, полученные данные в экспериментальной работе показали, что МФК оказывает достоверное влияние на показатели белкового, липидного и энергетического обменов при воздействии как высоких (2 мг/кг), так и низких (10-15 мг/кг) доз МФК. В большей степени МФК действует на антиоксидантную систему приводя в основном к окислительной модификации белков, при этом
даже через 30 дней при введении малых доз МФК в сыворотке крови животных остается повышенным уровень
продуктов перекисного окисления белков.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Бабаскин Б. С. Определение пировиноградной кислоты модифицированным методом Умбрайта // Лаб. дело. -1976.- № 3. -С. 76.
2. Векслер Б.М. Характеристика системы перекисного окисления липидов крови в семьях больных ишемической болезнью сердца: Дис. ...канд. биол. наук.- СПб., 1995.- 76 с.
3. Вьюшина А.В., Вайдо И.А., Герасимова И.Г. и др. Различия в процессах перекисного окисления белков у крыс, селектированных по порогу возбудимости нервной системы // Бюл. экспер. биол. -2002. -Т. 133. -№ 3. -С. 292-296.
4. Гланц С. Медико-биологическая статистика. -М.: Практика, 1998.- 459 с.
5. Малахова М.Я. Методы биохимической регистрации эндогенной интоксикации. Сообщение второе // Эфферентная терапия. -1995. -Т. 1. -№ 2. -С. 61-64.
6. Методика выполнения измерений биохимических показателей в плазме (сыворотке) крови мелких теплокровных животных фотометрическим методом: Свидетельство об аттестации МВИ № 22.11.03.052/2009.
7. Правила лабораторной практики в РФ: Приложение к приказу МЗ РФ № 267 от 19.06.2003.
8. Практикум по биохимии / Под ред. С.Е. Северина, Г.А. Соловьевой. -М.: Изд-во МГУ, 1989. - 509 с.
9. Современные методы в биохимии / Под ред. В.Н. Орехо-вича. - М.: Медицина, 1977.- С. 62-68.
10. Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев) № 1945-73 от 06.04.1973.
11. Санитарные правила по определению класса опасности токсинных отходов производства и потребления. СП 2.1.7.1386-03: Постановление Минздрава РФ № 144 от 16.06.2003 г.
12. Требования Международного комитета по науке по использованию в экспериментальных исследованиях лабораторных животных // Бюллетень ИКЛАС. -1978. -№ 24. -С. 4-5.
13. Федеральный закон «Об охране окружающей среды» №7-ФЗ от 10.01.2002 г. (ред. 2008).
14. Федеральный закон «Об уничтожении химического оружия» №76-ФЗ от 02.05.1997 г. (ред. 2006).
15. Филиппович Ю.Б., Егорова Т.А, Севастьянова Г.А. Практикум по общей биохимии. -М.: Просвещение, 1982.- 311 с.
3000
2000
□ Контроль □ 2 мг/кг ЕЗ Е-15
100 90 80 70 60 50 40
□ 2 мг/кг ЕЭ Е-15 мг/кг
а б
Рис. 6. Изменение активности холинэстеразы в сыворотке крови мышей-самцов через 72 часа после введения МФК в дозах 2 и 10-15 мг/кг: а - активность фермента в Е/л; б - активность в % относительно контроля (для данных с достоверным отличием уровень значимости различий опытных групп по сравнению с контролем: * р<0,05, ** р<0,01, *** р<0,001)
