ВЛИЯНИЕ ИНГИБИРОВАНИЯ YAP - СИГЛАЛИНГА НА КОНТРАКТИЛЬНУЮ СПОСОБНОСТЬ ФИБРОБЛАСТОВ ЧЕЛОВЕКА В МОДЕЛИ ЭКВИВАЛЕНТА ДЕРМЫ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ

7

Литература:

1. Bollong M.J., Yun H., Sherwood L., Woods A.K., Lair-son L.L., Schultz P.G. ACS Chemical Biology. 2015. V. 10. № 2193-2198.

2. Ke Q., Costa M. Hypoxia-inducible factor-1 (HIF-1) Mol Pharmacol. 2006. V.70.P. 1469-80.

3. Cherian M.T., Lin W., Wu J., Chen T. Mol Pharmacol. 2015. V. 87. № 5. Р. 878-89.

4. Kota B.P., Tran V.H., Allen J., Bebawy M., Roufogalis B.D. Pharmacol Res. 2010. V. 62. Р. 426-431.

ВЛИЯНИЕ ИНГИБИРОВАНИЯ YAP — СИГЛАЛИНГА НА КОНТРАКТИЛЬНУЮ СПОСОБНОСТЬ ФИБРОБЛАСТОВ ЧЕЛОВЕКА В МОДЕЛИ ЭКВИВАЛЕНТА ДЕРМЫ

Д.С. Аболин1, 2, О.С. Роговая1, Е.П. Калабушева1, Е.А. Воротеляк1

1 Институт биологии развития им. НК. Кольцова РАН, Москва, Россия

2 Российский Химико-Технологический Университет им. Д.И. Менделеева, Москва, Россия

e-mail: danilabolin@mail.ru

Ключевые слова: Фибробласты, дерма, фиброзный рубец, коллагеновый гель, 3й-культивирование клеток, YAP, YAP-сигналинг, вертепорфин.

Кожные раны обычно заживают через фиброзный процесс с образованием деформаций — шрамов. Фибробласты (ФБ) глубоких слоев дермы в ответ на повреждение активируются и реагируют увеличением секреции коллагена для быстрого закрытия дефекта, при этом рана сжимается (контрактирует). Увеличение жесткости внеклеточного матрикса (ВКМ) в процессе рубцевания влияет на изменение состояния ФБ, тем самым запускается «петля обратной связи»: с одной стороны, активация ФБ влияет на жесткость ВКМ, а изменения в жесткости ВКМ запускает активацию ФБ, втягивая в процесс все больше клеток. Понимание клеточных и биохимических механизмов фиброза кожи позволит выявить мишени для медикаментозного ингибирования фиброза.

Цель работы: исследовать возможность ингибирова-ния формирования рубца в модели контракции коллаге-нового геля клетками дермы.

Было показано, что дермальные ФБ в нормальной коже экспрессируют белок YAP преимущественно в цитоплазме. В рубце происходит активация YAP-сигналинга, что увеличивает накопление данного белка в клеточных ядрах [1, 2]. При культивировании клеток в стандартной двухмерной культуре — на пластике их фенотип изменен, при этом помещение клеток в коллагеновый гель возвращает им нормальный фенотип. Исходя из этого, мы предположили, что модель трехмерного геля более адекватна для проверки влияния на поведение клеток лекарственных средств, в частности вертепорфина (ВП). ВП использовали как ингибитор YAP-сигналинга [3]. Внесенный в культуральную среду в на 1 сутки он не токсичен для ФБ культивируемых на пластике и не влияет на экспрессию маркеров PDGFRa, Yap и SM22a. Доля клеток экспрессирующих маркер пролиферирующих клеток Ki67 сразу после воздействия снизилась с 22,6% до 5,8%, восстановление до контрольных значений наблюдали через 7 суток. Было выявлено, что при временном внесении ВП на контрактирующий коллагено-вый гель происходит ингибировние активации Yap, что проявляется в отсутствии данного белка в ядрах. Также

происходит ингибирование экспрессии профибротиче-ского маркера SM22a и замедление контракции геля.

Таким образом ВП ингибирует переход ФБ в фиброзный фенотип в коллагеновом геле, что снижает его контракцию. Это дает нам основания предполагать, что ВП может быть рассмотрен, как компонент лекарственных средств, направленных на предотвращение образования рубца.

Литература:

1. Raghunathan, Vijay Krishna et al. Investigative ophthalmology & visual science vol. 54,1 378-86. 14 Jan. 2013.

2. Liu F. et al. American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 2015. Vol. 308, № 4. P. L344-L357.

3. Shi-Wen X, Racanelli M, Ali A et al. J Cell Commun Signal. 2021 Mar;15(1):71-80.

ХАРАКТЕРИСТИКА МОДЕЛИ ОСТЕОМИЕЛИТА НА СЕГМЕНТАРНОМ ДЕФЕКТЕ БЕДРЕННОЙ КОСТИ У КРЫС

С.М. Авдокушина, Е.О. Стаценко, А.А. Ергешов

Казанский (Приволжский) Федеральный Университет, Казань, Россия

e-mail: sveta.avdokushina@gmail.com

Ключевые слова: модель остеомиелита, бедренная кость, остеозамещающие материалы, компьютерная микротомография.

Остеомиелит — инфекционный гнойно-некротический процесс в кости — является одним из наиболее тяжелых и опасных осложнений, связанных с имплантацией ортопедических устройств и остеозамещающих материалов. Местный остеомиелит часто обусловлен образованием бактериальных биопленок на имплантируемых материалах, сопровождается инфицированием прилегающих костных тканей с последующим остеолизом и отторжением имплантата. Актуальной задачей является разработка удобных и информативных in vivo моделей для оценки антибактериального и регенеративного действия остеозамещающих материалов.

С учетом имеющихся данных литературы оптимизирована модель сегментарного дефекта бедренной кости у крыс, формируемого на латеральной поверхности между проксимальной частью бедренного сустава и гребнем. После обеспечения доступа к кости на ней хирургически проделывали прямоугольный дефект размером ~0,5х0,2 см. Инфицирование проводили путем нанесения и распределения в объеме раны ночной культуры Staphylococcus aureus (10 мкл, 105 КОЕ/мл). Экспериментальные остеозамещающие материалы в форме порошка массой не более 100 мг имплантировали в область дефекта.

С использованием компьютерной микротомографии (микро-КТ) получены и проанализированы Эй-изображения в области костных дефектов в период проведения острого эксперимента (до 30 дней). Сравнительный анализ проводили посредством математических методов оценки объема костной ткани, ее плотности, толщины и других характеристик с помощью программы Image J (Fiji, plug-in BoneJ). Измерения показали, что исследуемая область кости имеет почти цилиндрическую форму, что способствует более точному расчету параметров кости. Кроме того, измерения показали воспроизводимость объема формируемого дефекта в исследуемой области кости. В период с 14 по 30 сутки

Гены & Клетки XVII, №3, 2022