CC BY
108
УДК 619: 616. 34-008. 314. 4 - 084
ВЛИЯНИЕ ХЕЛАТОВ КОБАЛЬТА, ЦИНКА, МЕДИ И ЖЕЛЕЗА НА ОРГАНИЗМ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ И КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Ю.К. КОВАЛЁНОК
(ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»)
В работе обобщены исследования по влиянию на организм белых мышей и крупного рогатого скота разработанных в Беларуси этилендиаминтетраацита-тов кобальта, цинка, меди и железа. Установлены позиции токсичности исследуемых веществ и их влияние на клинико-гематологические, биохимические и патолого-анатомические показатели животных.
Ключевые слова: этилендиаминтетраацитаты микроэлементов; лабораторные животные; крупный рогатый скот; гематологические, биохимические, токсикологические, микробиологические и патологоанатомические исследования.
Промышленное животноводство — одна из наиболее интенсивно и динамично развивающихся отраслей сельского хозяйства. Скотоводческой отрасли принадлежит одно из ведущих мест в обеспечении населения страны отечественными, экологически безопасными и высококачественными продуктами животного происхождения [8]. Высокая продуктивность животных неразрывно связана с крайне интенсивным течением обменных процессов и напряженной работой всех органов и систем организма. При этом малейшие дисбалансы обеспечения животных основными классами питательных и биологически активных соединений привод т к болезн м обмена веществ, выливающимся в конечном итоге в огромные экономические потери государства.
В насто щее врем в скотоводстве остро стоит проблема недостаточного обеспечения организма животных
минеральными веществами и как следствие широкого распространения микроэлементозов, особенно среди откормочного поголовья, высокие темпы роста которого предполагают особо напряжённый тип течения обменных реакций. Происхождение данной проблемы крайне многообразно — это и решение проблем балансировки рационов животных по минеральным веществам, и особенности условий хоз йственной де тельности в зонах биогеохимических провинций с активным антропогенным загр зне-нием окружающей среды, и трудности диагностики микроэлементозов на ранних этапах их развития, и многие другие факторы [4, 7].
Лечение и профилактика гипоми-кроэлементозов традиционно основывается на введении их животным в неорганической форме в составе сульфатов, карбонатов, хлоридов, фосфатов. Известно, что неорганические
формы биогенных элементов вл ют-ся достаточно «агрессивными» и несовместимыми в ряде случаев между собой [3, 9].
Введение минеральных солей в состав кормов затрудн етс и химической несовместимостью р да ионов. Например, в премиксах в качестве источника меди используют сернокислую медь, а источником йода я вля етс йодистый калий. При их контакте происходит реакция, результатом которой вл етс образование практически не растворимого, а значит, неусво емого йодида меди и легко испаряющегося элементарного йода. Поскольку соединений меди в премиксах намного больше, чем йодида калия, нетрудно заметить, что йода в премиксах нет [5]. Рассмотренное взаимодействие происходит и в водных растворах и при контакте сухих солей.
Известно [2], что в природных кормах биогенные микроэлементы свя заны с белками, аминокислотами, т.е. наход тс в составе органических соединений, определяющих судьбу метаболизма их в живом организме. В структуре органических соединений активность микроэлементов в организме животных значительно возрастает по сравнению с ионным состоянием. В этой связи генез подобных соединений переживает период интенсивного формировани . Высокими темпами идут процессы накоплени информации о составе, строении и свойствах комплексонатов, условиях их существования, реальных и потенциальных област х их практического использования [9, 10].
Учёными УО «Витебская ордена «Знак Почёта»> государственная ака-деми ветеринарной медицины» с
сотрудниками НИУ «Институт прикладных физических проблем имени
А.Н. Севченко»> Белорусского государственного университета были разработаны хелатные соединения железа, цинка, кобальта и меди с натрийэтилен-
диаминтетраацетатом (МаН3(е^а)), получившие коммерческие названия: «Феравет»> (МаЕе(е^а)); «Цин-ковет»> (МаЕпН(е^а)); «Кобаль-вет»> (МаСоЩе^а)) и «Купровет»> (ШСиЩе^а)).
Материал и методы исследования
Исследования выполнены в условиях вивария, клиники кафедры внутренних незаразных болезней животных и центральной научноисследовательской лаборатории научно-исследовательского института прикладной ветеринарной медицины и биотехнологии УО «Витебская ордена «Знак Почёта»> государственная академи ветеринарной медицины» (УО ВГАВМ) (аттестат аккредитации согласно СТБ/ИСО/МЭК 17025 № БУ 11202.1.0.087) и скотоводческих хоз йств Республики Беларусь. Основой для исследования послужили полученные ранее результаты изучени токсичности этилендиаминтетраа-цетатов железа, меди, кобальта и цинка для лабораторных животных, порося т и теля т [6, 12]. Параметры токсичности исследуемых веществ приведены в таблице 1.
Изучение влияния исследуемых этиледиаминтетраацитатов на организм лабораторных животных проводили в серии опытов.
В первом опыте были изучены аллергенные свойства. Для этого были подобраны 5 групп клинически здоровых мышей, 4 из которых были опытными, а одна — контрольная. У мышей в области крестца на участке 2 см2 удаляли волося ной покров. Животным опытных групп на оголенный участок кожи наносили растворы исследуемых веществ в полулеталь-ной дозе. Мыши контрольной группы фармакологическому воздействию не подвергались. Обработку рабочими растворами подопытных мышей проводили в течение 10 дней подр д при систематическом контроле состо ни их здоровья. После 10-дневного воз-
Т а б л и ц а 1
Параметры токсичности препаратов кобальвет, цинковет, купровет и феравет для лабораторных животных и телят при пероральном введении
Показатель Кобальвет Цинковет Купровет Феравет
Ю0 (для белых мышей), мг/кг 488,00 1232,00 223,00 1449,00
Ю50 (для белых мышей), мг/кг 1244,35 2425,00 455,00 2931,25
Ю0 (для лабораторных крыс), мг/кг 353,00 1084,00 238,00 1352,00
Ю50 (для лабораторных крыс), мг/кг 811,36 2075,00 525,00 2300,00
Ю0 (нарушение рубцового пищеварения), мг/кг 336,0 1081 144 1111
Ю0 (лабораторный синдром), мг/кг 605 1469 517 1676
Ю50, мг/кг 1224 1839 916 2706
Коэффициент аккумуляции по Л.Н. Медведю 3,55 3,75 3,15 4,23
Максимально переносимая доза, задаваемая ежедневно в течение 120 дней и не вызывающая токсического эффекта, мг/кг 6,7 29,4 2,9 29,4
П р и м е ч а н и е. Здесь и далее по тексту статьи даны дозы по введению препаратов.
действия на кожный участок делался 10-дневный перерыв. После этого перерыва на обрабатываемый участок снова наносили раствор исследуемого вещества в разрешающей дозе. Далее изучали поведение и состоя ние кожи животных на протя жении 72-96 ч.
Дл изучени вли ни исследуемых веществ при длительном их скармливании белым мышам было сформировано 4 опытных группы по 7 гол. в каждой (5 самок и 2 самца) и контрольна группа из 5 гол. (3 самки и 2 самца). Живая масса мышей со-ставля ла 11,7-12,0 г, все они были клинически здоровы.
Дл данных групп мышей готовили рабочие растворы каждого вещества по нормам кормлени тел т с учетом живой массы тела мыши из расчёта на
1 мл воды. Поскольку, согласно физиологическим потребностя м, мышь выпивает в сутки не более 1 мл воды, то каждая из них ежедневно получала рассчитанную дозу МаСоН(е^а) — 3,5 мг/кг, МаЁпН(е^а) — 17,5 мг/кг, МаЕе(е^а) — 2 3,7 мг/кг и МаСиН(е^а) 3,35 мг/кг. Контроль состо ни здоровья подопытных животных проводили по таким показателям, как габитус,
состоя ние шерстного покрова, кожи, слизистых оболочек, дыхательной, пищеварительной, нервно-мышечной систем, поведение, системы воспроизводства, заболеваемость, смертность мышей. Павших животных вскрывали.
Изучение вли ни комплексонатов микроэлементов на организм крупного рогатого скота проводили в условиях эксперимента на базе клиники кафедры внутренних незаразных болезней УО ВГАВМ. Для этого были сформированы группы клинически здоровых тел т: 4 опытные дл изучения каждого вещества и 1 контрольная по трое телят 2-месячного возраста в каждой. Группы формировались с учетом принципа условных аналогов, по лабораторным показателя м животные не имели статистически достоверных различий (Ц-критерий Манна-Уитни). Тел та опытных групп в течение 30 дней получали индивидуально внутрь исследуемые комп-лексонаты микроэлементов. Доза рассчитывалась согласно необходимого количества соответствующих элементов дл профилактики микроэле-ментозов с использованием неоргани-
ческих солей: цинковет — 0,5 мг/кг, кобальвет — 0,17 мг/кг, купровет — 1,2 мг/кг, феравет — 0,3 мг/кг [5]. Телята контрольной группы получали основной рацион, не содержащий микроэлементных препаратов. За животными был установлен ежедневный контроль клинического состояния, перед началом и на 30-й день эксперимента у животных для гематологического и биохимического исследования были взяты пробы крови и мочи, для микробиологического исследования — содержимое рубца и толстого кишечника. Кровь животных исследовали по следующим показателям: количество лейкоцитов, эритроцитов, гематокрит, концентрация гемоглобина, цинка, меди, кобальта (в цельной крови), глюкозы, общих липидов, общего белка, мочевины, активность печеночных ферментов (АлАТ, АсАТ, ЛДГ) (в плазме крови), содержание железа (в сыворотке) [4]. Гематологические показатели определ ли посредством автоматического гематологического анализатора Medonic CA-620. Содержание кобальта, меди и цинка определяли атомно-абсорбционным методом с использованием атомно-абсорбционного спектрофотометра МГА-915. Железо определ ли в сыворотке крови с ференом без депротеинизации на автоматическом биохимическом анализаторе Cormey Lumen с наборами производства Cormey. Биохимические исследовани проводили на автоматических биохимических анализаторах Cormey Lumen и EuroLiser, исполь-зу диагностические наборы производства Cormey и Randox. Мочу исследовали на наличие в ней глюкозы, билирубина, белка, крови, нитритов, кетонов, уробилиногена с использованием тест-полосок производства «Mediscreen» и экспресс-анализатора мочи АМ 2100.
Идентификацию, активность, число и культуральные особенности нор-мофлоры и фауны рубцового и ки-
шечного содержимого осуществляли согласно прин тым в микробиологии методикам [11].
По окончанию эксперимента животные были подвергнуты диагностическому убою, после чего проведено морфологическое исследование тканей и органов, связанных с основными элементами фармакодинамики исследуемых элементов. Кусочки печени, почек, сердца, селезенки, тонкого кишечника фиксировали в формалине и заливали в парафин. Депа-рафинированные срезы окрашивали гематоксилин-эозином и суданом III. Проводили микроскопическое исследование образцов органов.
Результаты и их обсуждение
В результате 10-дневного наблюдения за животными в опыте по изучению аллергенных и сенсибилизирующих свойств этилендиаминтетра-ацетатов при ежедневной аппликации их растворов не было отмечено отклонений от нормы в поведении и состоя нии кожного покрова. Нарушений в состоя нии дыхательной, пищеварительной и других систем организма животных не регистрировалось.
Нанесение разрешающей дозы вещества также не вызывало никаких изменений как со стороны кожи, шерстного покрова, органов и систем, так и поведения мышей.
На 4-5-й день аппликации раствора МаЕе(е^а) у мышей опытной группы было отмечено окрашивание шерстного покрова и кожи обрабатываемого участка в красно-бурый цвет — цвет изучаемого комплексо-ната. Нар ду с окрашиванием шерстного покрова отмечено незначительное огрубление кожи обрабатываемого участка. После нанесени разрешающей дозы по-прежнему обнаруживались окрашивание кожи и шерстного покрова в бурый цвет, характерный дл препарата. Отмеченные изменения кожи и шерстного покрова были ограничены и не распростран лись
на другие части тела, не соприкасав-шиес с препаратом. Это говорит о способности вещества проникать через кожу и волосяной покров. Необходимо отметить, что данный эффект выражался только местной реакцией организма мышей на аппликацию препарата без изменений в де тель-ности систем. Локальность изменений в коже и шерстном покрове, ограниченная местом аппликации, свидетельствует об отсутствии у препарата сенсибилизирующих и аллергенных свойств.
В течение всего эксперимента по изучению вли ни веществ при длительном их скармливании у мышей опытной группы, которым задавали МаСоН(е^а), не наблюдалось заболеваемости и гибели. Показатели клинико-физиологического состо ни мышей опытной и контрольной групп не имели значимых различий. Мыши обеих групп в течение всего эксперимента оставались клинически здоровыми, шерстный покров был чистым, гладким, белым, блестя щим. Кожа и слизистые оболочки имели розовый цвет. Поведение мышей было активным. Отклонений и нарушений со стороны дыхательной, пищеварительной, нервно-мышечной систем не отмечалось. Три из п ти самок опытной группы и две из трех самок контрольной группы родили по семь нормальных мышат и вырастили их до половозрелого возраста, что может служить свидетельством нормального функционировани системы воспроизводства.
У мышей опытной группы, получавших МаЕпН(е^а), на протяжении первых 94 сут. не было отмечено клинически выраженных признаков токсикоза. В целом испытуема доза препарата оказалась предельно переносимой. Она не вызывала заболеваемости с клинически выраженными признаками в течение трех мес цев опыта. При э том мыши, имевшие клинические признаки токсикоза, не по-
гибли в течение опыта. Однако беременности и родов у мышей на прот -жении эксперимента не наблюдалось.
В опыте по изучению хронической токсичности МаСиН(е^а) в состоя нии здоровь мышей было вы влено два периода. Первый период продолжался 35$45 сут. В этот промежуток времени мыши были клинически здоровы, активны. В последующие сроки у животных по вились признаки токсикоза. Наблюдалась потеря блеска, про-вление серости шерстного покрова, бледность кожи и слизистых оболочек, потеря аппетита, подвижности, рефлекторной активности. Одна мышь пала на 64 сут. опыта. В этих услови-х было прекращено скармливание вещества. Наблюдение за мышами продолжалось до 132 сут. За э тот срок отмечено восстановление всех физиологических функций, за исключением системы воспроизводства. У мышей опытной группы не наблюдалось беременности и родов.
В состо нии здоровь грызунов опытной группы при изучении хронической токсичности МаЕе(е^а) от-клонени стали наблюдатьс довольно быстро. У подопытных животных спустя разные промежутки времени после начала скармливани вещества наблюдались следующие признаки: ограничение подвижности и рефлекторной реактивности, потеря блеска и по вление тусклости шерстного покрова, выпадение волос вплоть до поя вления аллопеций, более выраженных на задней части тела, бледность кожи и слизистых оболочек. В течение первой недели опыта с признаками токсикоза пала одна мышь. На протяжении первого меся ца пало еще 2 мыши, за два меся ца погибло 5, т. е. 71,4% подопытных мышей. В этих услови х было прекращено скармливание вещества оставшимс двум мышам. К 132-му дню опыта клиническое состо ние оставшихс в опыте животных пришло в норму. Однако у подопытных животных, в отличие
от животных контрольной группы, не отмечалось признаков беременности и родов, что свидетельствовало о нарушении системы воспроизводств подопытных мышей.
Таким образом, отмечается крайне негативное вли ние испытуемого препарата железа на состоя ние здоровья мышей. При этом отмечена неодинаковая чувствительность животных к данному веществу, так как признаки токсикоза и смерть у подопытных животных наступали без видимой временной закономерности. Этот факт указывает, с одной стороны, на неодинаковую чувствительность мышей к МаЕе(е^а), с другой — на его ку-мул тивные свойства.
При патологоанатомическом исследовании трупов мышей, павших в опытах по изучению хронической токсичности препаратов МаСиН(е^а) и МаЕе(е^а), обнаруживались, как правило, однотипные изменения, ло-кализирующиес в основном в органах пищеварительной системы: геморра-
гическое воспаление с изъязвления-ми и некрозом слизистой оболочки тонкого и толстого отделов кишечника, дегенеративное перерождение печени и почек, дря блость сердечной мышцы.
Поскольку система воспроизводства у мышей имеет определенные особенности, нельзя безоговорочно распростран ть нарушение ее функции под вли нием длительного скарм-ливани больших доз исследуемых веществ на другие виды животных.
Группы животных для проведения эксперимента по изучению вли ни этилендиаминтетраацетатов на тел т были сформированы из клинически здоровых животных. Результаты лабораторного исследовани крови
тел т приведены в таблице 2. Исследованные показатели не выходили за рамки нормативных критериев, однако стоит отметить, что концентрация гемоглобина, железа, общего белка, а также количество эритроцитов находились немного ниже нормы, что
Т а б л и ц а 2
Результаты лабораторного исследования крови телят на начальном этапе эксперимента
Показатель Кобальвет Купровет Цинковет Феравет Контроль
Лейкоциты, 109/л 7,30±0,56 7,33±0,25 7,27±0,50 7,27±0,38 7,30±0,20
Эритроциты, 1012/л 5,10±0,10 5,10±0,17 5,09±0,07 5,12±0,10 5,10±0,10
Гематокрит, л/л 33,33±1,53 33,67±3,21 33,00±4,36 33,3±2,89 33,67±3,51
Гемоглобин, г/л 97,33±5,03 97,33±6,11 97,33±5,69 97,67±5,86 97,33±2,31
Глюкоза, ммоль/л 4,08±0,12 4,09±0,18 4,09±0,19 4,09±0,09 4,09±0,06
ЛДГ, нкат/л 15873,33± 15826,67± 15846,67± 15850,00± 15870,00±
296,87 171,56 219,39 269,63 229,13
Общие липиды, г/л 6,22±0,62 6,38±0,81 6,42±0,82 6,24±1,00 6,36±0,73
АсАТ, нкат/л 1165,00±45,00 1164,00±66,09 1179,67±56,22 1172,67±98,68 1164,00±84,31
АлАТ, нкат/л 359,03±29,08 361,37±29,00 363,70±14,53 361,10±38,76 360,37±43,04
Общий белок, г/л 72,00±3,61 72,67±4,04 72,00±4,36 71,87±3,35 71,73±1,16
Мочевина, ммоль/л 2,18±0,37 2,15±0,10 2,17±0,33 2,15±0,10 2,18±0,12
Кобальт, мкг/л 31,60±2,43 31,70±1,35 31,70±1,55 31,70±0,90 31,67±0,55
Медь, мкг/л 918,40±8,77 919,43±13,18 918,90±10,25 918,37±9,37 918,27±15,48
Железо, мкмоль/л 17,58±0,98 17,60±0,63 17,57±1,11 17,62±0,76 17,62±0,35
Цинк, мкг/л 3,61±0,29 3,63±0,32 3,63±0,29 3,60±0,25 3,63±0,46
характерно для животных данного возраста.
У животных всех групп до обработки препаратами в рубце выделя -ли (в среднем): бифидобактерии — 22-41х106-8 КОЕ/мл, лактобактерии — 24-51х106-8 КоЕ/мл, аэробные бациллы — 46-67х104 КОЕ/мл, грибы, дрожжи — 2-5х104 КОЕ/мл, E. coli — 74~93х103-4 КОЕ/мл. Показатели
жизнедеятельности простейших рубца: количество инфузорий — 107-8/мл, подвижность инфузорий — 6-9 балл., активность рубцовой микрофлоры —
3,3-3,5 мин.
Количество кишечной микрофлоры составл ло: бифидобактерии — 13$58х107-8К0Е/г, лактобактерии — 12-36х106-8 КоЕ/г, аэробные бациллы — 3$21х104-5 кОе/г, грибы, дрожжи — 1-8х104-5 КОЕ/г, E. coli — 81-92х104 КОЕ/г.
В течение эксперимента телята опытных групп оставались здоровы, в то время как у 2 телят в каждой контрольной группе на 17-18-й день стали отмечатьс неспецифические
отклонени в клиническом статусе, характерные дл гипомикроэлемен-
тозов: взъерошенность шерстного
покрова, несколько сниженный аппетит, анемичность слизистых оболочек.
Результаты гематологических и биохимических исследований крови приведены в таблице 3.
Из таблицы 3 видно, что такие показатели, как количество лейкоцитов, концентрация глюкозы, общих липидов, мочевины, активность лак-татдегидрогеназы и аминотрансфераз в крови, а также показатели мочи статистически значимо не измен лись ни в одной группе опытных животных. Это говорит о том, что исследуемые комплексонаты металлов не оказывают отрицательного вли ни на белковый, углеводный и липидный обмены, а также не вызывают токсических состоя ний у животных. В то же врем применение данных веществ вызывает статистически значимое увеличение содержания эритроцитов и гемоглобина (Ц=0; р<0,05), а такТ а б л и ц а 3
Результаты лабораторного исследования крови телят в конце эксперимента
Показатель Кобальвет Купровет Цинковет Феравет Контроль
Лейкоциты, 109/л 7,24±0,54 7,31±0,28 7,26±0,40 7,25±0,31 7,30±0,22
Эритроциты, 1012/л 5,52±0,17* 5,60±0,10* 5,62±0,08* 5,72±0,16* 5,12±0,06
Гематокрит, л/л 37,67±1,53 37,3±3,00 37,67±1,53 37,33±2,08 34,0±2,65
Гемоглобин, г/л 104,8±2,93* 106,2±3,85* 103,5±1,36* 108,3±3,06* 97,6±2,51
Глюкоза, ммоль/л 4,08±0,11 4,11±0,05 4,11±0,13 4,10±0,07 4,09±0,06
ЛДГ нкат/л 15953,3± 15983,3± 15886,7± 15863,3± 15906,7±
330,05 126,62 300,89 262,74 240,07
Общие липиды, г/л 6,21±0,57 6,38±0,72 6,32±0,77 6,25±1,03 6,35±0,70
АсАТ, нкат/л 1167,33±37,43 1167,00±65,18 1169,87±67,08 1173,33±94,52 1163,67±86,43
АлАТ, нкат/л 358,33±24,03 360,13±26,48 364,90±9,76 362,93±42,47 360,67±43,53
Общий белок, г/л 74,00±2,00 75,70±2,69* 76,00±2,65* 75,27±1,10* 71,63±1,24
Мочевина, ммоль/л 2,16±0,23 2,13±0,06 2,14±0,37 2,16±0,10 2,17±0,07
Кобальт, мкг/л 40,03±1,60* 32,30±1,30 32,77±1,36 32,23±0,81 31,83±1,03
Медь, мкг/л 921,03±9,67 962,00±17,78* 921,67±9,07 932,80±0,46* 917,23±14,01
Железо, мкмоль/л 17,74±0,87 18,38±0,48* 18,27±0,73 18,91±0,32* 17,64±0,35
Цинк, мкг/л 3,66±0,30 3,78±0,21 4,11±0,24* 3,71±0,21 3,63±0,46
* Статистически значимое изменение (по U-критерию Манна-Уитни), p<0,05.
же гематокрита на уровне тенденции (U=0,5; p=0,06). Под действием кобальта в организме повышаетс выработка специфического фактора роста — эритропоэтина, который я вля -етс главным регул тором эритропоэ-за. Медь катализирует включение железа в гемм-необходимую часть гемоглобина. Этим объя сня ется увеличение указанных показателей в результате применени исследуемых хелатов.
В каждой опытной группе отмечается статистически значимое увеличение концентрации соответствующего микроэлемента (U=0; p<0,05). Следует отметить, что при применении веществ в каждой группе наблюдается не только статистически значимое изменение концентрации соответствующего металла, а также отмечается тенденция к увеличению концентраций других микроэлементов. Это св -зано с общностью метаболизма минеральных веществ, а также с тем, что хелатные формы минералов вл ютс более доступными дл усвоени в организме, не вступают в антагонистические отношени друг с другом и с другими элементами корма. В крови животных всех опытных групп также отмечаетс увеличение концентрации общего белка, что говорит о положительном вли нии на метаболические процессы, протекающие в организме. При применении комплексонатов меди, цинка и железа данное изменение вл етс статистически значимым (U=0; p <0,05), а при применении комплексоната кобальта — на уровне тенденции (U=0,5; p=0,06). При этом между количеством микроэлементов и общего белка в крови имеетс статистически достоверна коррел ци (R=0,81-0,87; p<0,05).
При исследовании содержимого рубца после 30-дневной обработки NaCoH(edta), выделены (в среднем): бифидобактерии в количестве 8-15х109-11 КОЕ/мл, лактобактерии —
3-27х108-9 КОЕ/мл, E. coli — 24-68х104 КОЕ/мл. Дрожжеподобные
грибы обнаружены в количестве
1-4х103-4 КОЕ/мл, аэробные бацил-
лы — 5$19х104 КОЕ/мл. Количество инфузорий в рубце данной группы животных составля ло 108 — 109/мл, подвижность инфузорий — 8$10 балл., активность рубцовой микрофлоры —
2,8-3,1 мин. Исследование фекалий данных животных показало: лак-
тобактерии наход тс в количестве
4-54х108-9 КОЕ/г, бифидобактерии — 12-65х109-11 КОЕ/г, E. coli — 23-82х106 КОЕ/г. Дрожжеподобные грибы обнаруживаются в количестве
2-6х102 — 103 КОЕ/г, аэробные бациллы — 4-26х103 — 104 КОЕ/г.
Применение NaCuH(edta) в течение мес ца привело к тому, что у тел т были выделены (в среднем): бифидобактерии в количестве 23-35х109 КОЕ/мл, лактобактерии —
3-19х108-9 КОЕ/мл, E. coli — 21-48х104 КОЕ/мл. Дрожжеподобные грибы обнаружены в количестве
3-10х103-4 кОе/мл, аэробные бациллы — 15-32х104 кОе/мл. Количество инфузорий составля ло 108 — 109/мл, подвижность — 6-9 балл., активность рубцовой микрофлоры — 3,2-3,4 мин. Фекалии животных данной группы содержали: лактобактерии в количестве 12-28х108-9 КОЕ/г, бифидобактерии — 4-21х109 кОе/г, E. coli — 7-47х105-6 КОЕ/г, грибы — 1-3х103 — 104 КОЕ/г, аэробные бациллы — 21-42х104 КОЕ/г.
После обработки теля т NaFe(edta) констатировано, что в содержимом рубца выделено (в среднем): би-
фидобактерии в количестве 14-65х х108-10 КОЕ/мл, лактобактерии — 3-37х х108-9 КОЕ/мл, E. coli — 4-18х х103-4 КОЕ/мл. Дрожжеподобные грибы обнаружены в количестве 1-4х х103-4 КОЕ/мл, аэробные бациллы —
5-39х104 КОЕ/мл. Количество инфузорий составля ло 107 — 108/мл, подвижность — 6-8 балл., активность рубцовой микрофлоры — 4,5-6,7 мин. При исследовании фекалий у данных животных установлено (в среднем):
лактобактерии наход тс в количестве 4-52х108-10 КОЕ/г, бифидобактерии — 12-43х108-9 КОЕ/г, E. coli —
3-24х105-6 КОЕ/г. Дрожжеподобные грибы обнаруживаются в количестве
2-6х103-4 КОЕ/г, аэробные бациллы —
4-26х104-5 КОЕ/г.
Содержимое рубца у телят, обработанных NaZnH(edta), характеризовалось следующими значени ми (в среднем): бифидобактерии в количестве 12-46х108-9 КОЕ/мл, лактобактерии — 23-67х108-9 КОЕ/мл, E. coli — 24-48х104 КОЕ/мл. Дрожжеподобные грибы обнаружены в количестве 2-5х103 КОЕ/мл, аэробные бациллы — 3-9х104 КОЕ/мл. Количество инфузорий составля ло 108 — 109/мл, подвижность — 8-10 балл., активность рубцовой микрофлоры —
2,8-3,1 мин. В фекалиях у данных животных установлено (в среднем): лактобактерии — в количестве 24-65х108-10 КОЕ/г, бифидобактерии — 21-39х1010-11 КОЕ/г, E. coli — 21-54х105-6 КОЕ/г. Дрожжеподобные грибы обнаруживаются в количестве 1-4х103-4 КОЕ/г, аэробные бациллы —
4-12х104_К0Е/г.
При исследовании содержимого рубца у контрольной группы животных в начале и в конце опыта количественные и качественные показатели были следующие: бифидобактерии — в количестве 7-32х109-11 КОЕ/мл, молочнокислые бактерии — 4-71х109 КОЕ/мл, E. coli — 5-62х104 КОЕ/мл. Дрожжеподобные грибы обнаружены в количестве 2-7х 103 КОЕ/мл, аэробные бациллы — 4-21х103 КОЕ/мл. Количество инфузорий составл ло 107 — 109/мл, подвижность — 7-9 балл., активность рубцовой микрофлоры — 2,7-3,3 мин. При исследовании фекалий выделены (в среднем): лактобактерии — 4-52х108-9 КОЕ/г, бифидобактерии — 12-43х109-10 КОЕ/г, E. coli — 3-24х105-6 КОЕ/г. Дрожжеподобные грибы обнаруживаются в количестве 2-6х103-4 КОЕ/г, аэробные бациллы — 4-26х104-5 КоЕ/г.
Как видно из результатов опыта, дача исследуемых веществ в течение 30 дней не оказывает какого-либо негативного воздействи на коли-
чественный и качественный состав микрофлоры желудочно-кишечного тракта. Более того, применение разработанных хелатных соединений кобальта и цинка оказывает стимулирующее действие на нормофлору желудочно-кишечного тракта. Так, при обработке МаСоН(е^а) количество лакто- и бифидобактерий увеличилось с 106-8 КОЕ/мл(г) до 108-11 КОЕ/ мл. Это, по нашему мнению объя сня -ется тем, что кобальт является ростовым фактором для таких микроорганизмов, как лакто- и бифидобактерии. Кобальт кормов способствует увеличению численности микроорганизмов в рубце, которые синтезируют р д аналогов. Эффект повышени переваримости кормовых средств при достаточном наличии кобальта в кормах может объя сняться и тем, что образуетс попул ци определенных микроорганизмов с высокими потребностями в кобальте, а также тем, что в результате образовани двухвалентного катиона кобальта образуются перекрестные свя зи между отрицательно заряженными бактерия -ми и отрицательно заряженными частицами грубого корма, что помогает микроорганизмам прилипать к частицам корма более эффективно. Как сообщалось, дополнительное введение кобальта в рацион повышает количество анаэробных бактерий в рубце на 50% и увеличивает образование молочной кислоты на 86% [1].
При обработке телят МаЕпН(е^а) увеличилось в первую очередь количество инфузорий. Это, по нашему мнению и данным литературных источников, объя сня ется тем, что цинк вл етс одним из основных микроэлементов, отвечающих за построение оболочки клетки простейших. В то же время цинк активно участвует в белковом обмене, и его нехватка
сказывается как на количественном составе микроорганизмов желудочнокишечного тракта (в первую очередь рубца), так и на синтезе микробного протеина.
При морфологическом исследовании тканей и органов животных после диагностического убо не было вы в-лено патологических изменений. Так, при исследовании кишечника установлено, что его серозная оболочка гладкая, блестящая, прозрачная,
повреждений, наложений, кровоизлияний не отмечается, сосуды умеренно наполнены кровью. Слизистая оболочка бледно-розового цвета, без повреждений и наложений, на гистосрезе структура не изменена, имеет крипты и ворсинки, покрыта однослойным эпителием.
Макроскопически печень не увеличена в размерах, капсула не напря-жена, кровоизлияний обнаружено не было. Цвет органа коричневый. На разрезе видна дольчата структура. Гистологически балочное строение печеночных долек сохранено. Балки расположены радиально вокруг центральных вен, сосуды не расширены.
Сердце при макроскопическом исследовании темно-красного цвета, наложений и кровоизлияний не обнаружено. На гистосрезе волокнистое строение выражено.
Селезенка красно-коричневого
цвета, плоской удлиненной формы, не увеличена в размерах, капсула не напряжена. На разрезе рисунок узелкового и трабекул рного строени не нарушен, соскоб пульпы незначительный. На гистосрезе видны лимфоидные узелки и диффузно расположенная лимфоидная ткань.
Макроскопических изменений почек выя влено не было. Органы имеют буро-коричневый цвет, не увеличены, капсула не напряжена. На разрезе видна четкая граница между корковым и мозговым веществом. При гистологическом исследовании — просветы канальцев не сужены, вы-
стланы однослойным кубическим эпителием. В корковое вещество вход т мозговые лучи.
Выводы
1. Натрийэтилендиаминтетраацета-ты феравет, цинковет, кобальвет и ку-провет не обладают аллегенными, сенсибилизирующими и кумул тивными свойствами.
2. Скармливание лабораторным животным NaCuH(edta), NaZnH(edta) и NaFe(edta) на протяжении 120 дней в дозах согласно суточным потребностям крупного рогатого скота с учетом живой массы мыши приводит к нарушению де тельности репродуктивной системы грызунов, чего не отмечено при аналогичном применении NaCoH(edta).
3. Разработанные хелатные соеди-нени не вызывают патологических изменений в общем профиле нормоф-лоры желудочно-кишечного тракта. Комплексонаты кобальта и цинка при этом оказывают стимулирующее действие на развитие лакто- и бифидобактерий, выражающееся увеличением их численности с 106-8 КOE/мл(г) до 108-11 КOE/мл(г), а также инфузорий с 107-8/мл до 108 — 109/мл, повышают активность рубцовой микрофлоры с
З,З-З,5 мин до 2,8-З,1 мин.
4. Изученные натрийэтилендиамин-тетраацетаты цинка, меди, железа и кобальта оказывают корригирующее вли ние на метаболические процессы организма крупного рогатого скота, подтверждением чему является достоверное увеличение концентраций микроэлементов на 5-ЗЗ% (p<0,05-0,01), гемоглобина — на 6-11% (p<0,05), эритроцитов — на 8-10% (p<0,05), а также общего белка на уровне тенденции (на З-6%).
5. Препараты феравет, купровет, цинковет и кобальвет, применяемые у крупного рогатого скота в течение З0 дней не оказывает отрицательного, патоморфологически и гистологически регистрируемого вли ни на кишечник, печень, сердце, селезенку и почки.
Библиографический список
1. Авцын А.П. Микроэлементозы человека: этиология, классификация, органопатология/ А.П. Авцын [и др.]. М.: Медицина, 1991.
2. Васильев В.П. Комплексоны и комплексонаты / В.П. Васильев // Химия, 1996. Т. 32. В. 5. С. 145-153.
3. Ершова Ю.А. Механизмы токсического действия неорганических соединений / Ю.А. Ершова, Т.В. Плетнева. М.: Медицина, 1989.
4. Кальницкий Б.Д. Минеральные вещества в кормлении животных / Б. Д. Каль-ницкий. Л.: Агропромиздат, Ленинградское отделение, 1985.
5. Клюева В.И. Решение проблемы гипомикроэлементозов / В.И. Клюева и др. // Ветеринарный консультант, 2006. №13.
6. Курдеко А.П. Изучение острой и подострой токсичности новых препаратов комплексонатов металлов для поросят / А.П. Курдеко и др. // Ученые записки УО «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины». 2005. Т. 41. Вып. 2. Ч. 2 (июль - декабрь). С. 47-49.
7. Кучинский М.П. Биоэлементы — фактор здоровья и продуктивности животных: монография / М.П. Кучинский. Минск: Бизнесофсет, 2007.
8. Министерство сельского хозяйства и продовольствия. [Электронный ресурс]. — Режим доступа: http://www.mcx.ru/index.html?he_id=693&doc_id=723. — Загл. с экрана
9. Пчельников Д.В. Вли ние хелатных соединений микроэлементов на морфологический состав лейкоцитов сельскохозяйственных животных / Д.В. Пчельников// Ветеринарная патология, 2005. № 2. с. 47-48.
10. Степанов,В.В. Источники микроэлементной обеспеченности питания животных / В.В. Степанов // Сельскохозяйственная биология, 2000. № 6. С. 104-113.
11. Тараканов Б.В. Методы исследования микрофлоры пищеварительного тракта сельскохозяйственных животных и птицы/ Б.В. Тараканов. М.: Научный мир,
2006.
12. Ковалёнок Ю.К. Токсичность этилендиаминтетраоцитатов железа, цинка, кобальта и меди в опытах на теля тах/ Ю.К. Ковалёнок и др. // Акутальные вопросы электрофизиологии и незаразной патологии животных: Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию заведующего кафедрой терапии и клинической диагностики профессора Юрия Абогоевича Тар-нуева (26-28 июня 2009 г., Улан-Удэ): В 2 ч. Ч II. Улан-Удэ: Изд-во БГСХА имени
В.Р. Филиппова, 2009. С. 128-131.
Рецензент — д. б. н. А.А. Иванов
SUMMARY
Research into cobalt, zinc, copper, iron ethylene diamine tetra acetates’ effect on organisms of both white mice and cattle has been generalized in the article, these preparations are produced in Belarus Republic. The level of the preparations’ toxicity, their influence on clinical - hematologic, bio-chemical, and pathologic - anatomical indices in animals, have been established.
Key words: ethylene diamine tetra acetates of microelements, laboratory animals, cattle, bio-chemical, hematological, morbid-anatomical research.
Ковалёнок Юрий Казимирович — к. в. н. Эл. почта: kovalionok@vsavm.com; kovalionok@gmail.com
